大鼠血管性癡呆模型的改良

1、大鼠血管性癡呆模型的改良                  作者：鄭敏,趙 驥,陳紅光,王幫華，鮑翠玉【摘要】  目的 對大鼠血管性癡呆雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎模型（permanent bilateral common carotid artery occlusion，2VO）進(jìn)行改良，提高模型動物存活率。方法 采取改良造模方法（間隔3天分2次結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈）和傳統(tǒng)的2VO方法（同時結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈）建立血管性癡呆模型，觀察并

2、比較2種方法大鼠的成活率和學(xué)習(xí)記憶能力差異。 結(jié)果 術(shù)后60d， 改良模型組動物存活率（80.0%）明顯高于傳統(tǒng)模型組（45.0%）（P0.01）。2個模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力無顯著性差異（P0.05），而均顯著低于假手術(shù)對照組（P0.01）。 結(jié)論 改良2VO法是建造大鼠血管性癡呆模型的理想方法。 【關(guān)鍵詞】  動物模型；血管性癡呆；Morris水迷宮;大鼠   ABSTRACT：Objective  To establish a better permanent bilateral common carotid artery occlusion met

3、hod which is used to establish the vascular dementia model and increase survival rate of the model animals.Methods  The bilateral common carotid arteries were occluded in two times operation at 3 days interval for improved method or,blocked simultaneously at one surgery for traditional one.The

4、differences between the two methods about the survival rates of the rats,and the learning and memory ability were compared.Results  60 days after the last operation,the survival rate of the improved model group animals(80%) was much higher than that of the traditional group animals(45%) (P0.01)

5、.The learning and memory ability of both model groups showed no statistical difference (P0.05),and was decreased as compared to the control group(P0.01).Conclusion  The improved permanent bilateral common carotid artery occlusion is a better method to establish the vascular dementia model than

6、the traditional one.   KEY WORDS：   Animal model；Vascular dementia；Morris water maze；Rat   雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎模型是血管性癡呆研究中常用的模型之一1。傳統(tǒng)方法因雙側(cè)頸總動脈同時永久性結(jié)扎，對動物打擊過大，動物死亡率高，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)成本升高，標(biāo)本獲取困難，實(shí)驗(yàn)周期延長。我們擬對傳統(tǒng)方法進(jìn)行改良，降低動物死亡率，同時觀察其行為學(xué)指標(biāo)的變化。   1  材料與方法   1.1  動物及儀器&#

7、160;  健康雄性Wistar大鼠45只，體質(zhì)量220±20g，購于湖北省實(shí)驗(yàn)動物研究中心（合格證號為0001450）。MT200 Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司。   1.2  實(shí)驗(yàn)方法    大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)對照組（10只）、改良模型組（15只）及傳統(tǒng)模型組（20只）。具體實(shí)驗(yàn)方法如下。   改良模型組：大鼠術(shù)前12h禁食，自由飲水。以10%水合氯醛（350mg/kg，ip）麻醉后，將大鼠仰臥位固定于鼠臺，頸部皮膚剪毛備皮，碘伏酒精常規(guī)消毒。切口位于頸正中線左

8、側(cè)旁開0.5cm處，長約1cm。鈍性分離皮下組織后，于切口正下方的斜方肌與氣管夾角處可見頸總動脈搏動。分離出頸總動脈后，以4號絲線雙重結(jié)扎。術(shù)中動作輕柔，避免鉗夾和過分牽拉迷走神經(jīng)，注意無菌原則。行間斷縫合。術(shù)后3d，每天以碘伏消毒傷口及周圍皮膚。3d后于頸正中線右側(cè)旁開0.5cm處切開，進(jìn)行相同手術(shù)。   傳統(tǒng)模型組：大鼠麻醉、固定，取頸正中切口，切口長約1.5cm。鈍性分離皮下組織，于一側(cè)肌肉間隙中分別分離出頸總動脈，以4號絲線雙重結(jié)扎。完成一側(cè)后，進(jìn)行另外一側(cè)。其余同改良方法。   假手術(shù)對照組：雙側(cè)頸總動脈不結(jié)扎，余同傳統(tǒng)模型組。 &#

9、160;          1.3  指標(biāo)測定   術(shù)后60d觀察大鼠成活率以及學(xué)習(xí)記憶成績。使用Morris水迷宮對大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力的測定。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)分為兩部分： 定位航行實(shí)驗(yàn)：用于測量大鼠對水迷宮學(xué)習(xí)和記憶的獲取能力。實(shí)驗(yàn)歷時6d，第1d讓大鼠自由游泳2min；從第2d起，每天分上、下午兩段，每段訓(xùn)練4次。訓(xùn)練時隨機(jī)選擇一個入水點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水中， 系統(tǒng)自動記錄大鼠尋找并爬上平臺時所需時間(逃避潛伏期)及運(yùn)動軌跡，每次訓(xùn)練間隔為60s。如果大鼠在120s內(nèi)未

10、找到平臺，須將其引至平臺，這時潛伏期記為120s?？臻g搜索實(shí)驗(yàn)：在第6d最后一次訓(xùn)練后撤除水下平臺，在同一入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，系統(tǒng)自動記錄其在120s內(nèi)跨過原平臺相應(yīng)位置的次數(shù)及運(yùn)動軌跡。   1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析   計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。使用spss12.0 for windows軟件。對計(jì)量資料進(jìn)行t檢驗(yàn)，取=0.05作為檢驗(yàn)水平；對大鼠成活率進(jìn)行2檢驗(yàn)，也取=0.05作為檢驗(yàn)水平。   2  結(jié)  果   術(shù)后60d，改良模型組死亡3

11、只，存活12只，存活率80.0%；傳統(tǒng)模型組死亡11只，存活9只，存活率45.0%（表1）。與對照組比較，兩個模型組大鼠逃避潛伏期明顯延長，在120s內(nèi)穿越平臺的次數(shù)明顯減少（P0.01）。而兩個模型組之間沒有顯著性差異（P0.05）（表2）。表1  兩種血管性癡呆模型大鼠成活率的比較表2   兩種血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變 與對照組比較，* P0.01   3  討  論   2VO模型是血管性癡呆研究中常用的模型之一。有文獻(xiàn)報道報道，傳統(tǒng)2VO法動物存活率僅為12.5%，我們實(shí)驗(yàn)中傳統(tǒng)方法的

12、動物存活率也只有45.0%。在實(shí)驗(yàn)中，傳統(tǒng)模型組大鼠在結(jié)扎了雙側(cè)頸總動脈后，出現(xiàn)哮鳴音樣呼吸，抽搐，動物恢復(fù)緩慢，甚至持續(xù)昏迷直至死亡。而行改良模型組的大鼠則沒有出現(xiàn)這些癥狀。傳統(tǒng)方法存活率較低的原因分析有以下兩個：由于采取正中切口，分離兩側(cè)頸總動脈時難免會對迷走神經(jīng)有所牽拉甚至損傷；一次性結(jié)扎兩側(cè)頸總動脈，椎動脈不能迅速代償以提供腦部所需營養(yǎng)，導(dǎo)致腦部缺血改變嚴(yán)重。改良模型組動物存活率高達(dá)80.0%，優(yōu)越性顯而易見，其優(yōu)點(diǎn)：采取頸正中線旁切口，利于分離頸總動脈，減少了對迷走神經(jīng)的牽拉和損傷；分次結(jié)扎，有利于腦部血流重新分配，腦部血供重新建立，機(jī)體逐漸代償適應(yīng)。更接近臨床上常見的腦部慢性缺血的

13、病理過程。實(shí)際觀察也發(fā)現(xiàn)，改良模型組大鼠術(shù)后蘇醒較快，蘇醒后對其進(jìn)食和活動的影響也較小。   經(jīng)典的Morris 水迷宮所檢測的是大鼠在多次的訓(xùn)練中, 學(xué)會尋找固定位置的隱蔽平臺, 形成穩(wěn)定的空間位置認(rèn)知, 這種空間認(rèn)知是加工空間信息(外部線索) 形成的。平臺的位置與大鼠自身所處的位置和狀態(tài)無關(guān), 是一種以異我為參照點(diǎn)的參考認(rèn)知(allocentric cognition) , 所形成的記憶是一種空間參考記憶( reference memory) 。從信息的加工和提取方式來看, 這種空間參考記憶進(jìn)入意識系統(tǒng), 其儲存的機(jī)制主要涉及邊緣系統(tǒng)(如海馬) 以及大腦皮層有關(guān)腦區(qū),屬

14、于陳述性記憶(declarative memory) 。而臨床健忘和癡呆的病人, 正是陳述性記憶首先受損而且比較突出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，兩組模型大鼠逃避潛伏期明顯延長，在規(guī)定時間內(nèi)穿越平臺的次數(shù)明顯減少，空間記憶損害明顯，成功建造了大鼠癡呆模型。   故而我們認(rèn)為，采取頸前區(qū)正中線旁切口、間隔3天分2次永久性結(jié)扎同側(cè)頸總動脈的方法，可以成功建立血管性癡呆模型，且較傳統(tǒng)2VO法動物成活率顯著提高，實(shí)驗(yàn)成本降低，實(shí)驗(yàn)周期縮短；在慢性腦缺血和慢性腦低灌流性疾病尤其是血管性癡呆的相關(guān)研究中，不失為一種理想的建模方法。 【參考文獻(xiàn)】  1蔡晶，杜建. 血管性癡呆動物模型的制作方法及其評價J.中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，20(5):617Vorhees CV，Williams MT. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memoryJ.Nature Protocols，2006，1(2)：848張留寶，陳進(jìn)貴，劉平，等.不同動物的不同腦供血動脈結(jié)扎后存活率比較J南京軍醫(yī)