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1、第十二章 營(yíng)養(yǎng)需要及飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定的研究方法評(píng)定動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要和飼料養(yǎng)分利用率是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的重要內(nèi)容,經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)展已形成了一套系統(tǒng)的研究方法。隨著動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)及相關(guān)學(xué)科的發(fā)展, 研究方法也在不斷地改進(jìn)和完善。對(duì)不同的動(dòng)物,不同的生產(chǎn)目的以及不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),其研究方法也不盡一致。本章主要對(duì)評(píng)定飼料養(yǎng)分利用率及營(yíng)養(yǎng)需要量中常用的消化實(shí)驗(yàn)、平衡實(shí)驗(yàn)、飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、比較屠宰實(shí)驗(yàn)以及同位素示蹤、外科造瘺和無菌技術(shù)等作簡(jiǎn)要介紹。通過對(duì)這些方法和技術(shù)的認(rèn)識(shí)及了解,掌握研究方法常用的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理和操作技術(shù)。第一節(jié) 化學(xué)分析法營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究常需對(duì)飼料、動(dòng)物組織及動(dòng)物排泄物的某些成分,進(jìn)行定性、定量分析。常用的
2、有pH 、光譜、色譜、電泳等物理和化學(xué)分析方法。應(yīng)用最多的是各種比色法、光譜分析及色譜分析。通過有關(guān)化學(xué)成分的測(cè)定,可為動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需要量的確定和飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的評(píng)定提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),為機(jī)體營(yíng)養(yǎng)缺乏癥的早期診斷提供重要的參數(shù)。在確定營(yíng)養(yǎng)需要和評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值中,幾乎沒有不經(jīng)過化學(xué)成分分析的。動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究中常進(jìn)行的化學(xué)成分分析的對(duì)象有飼料、動(dòng)物各種組織以及糞尿。一、飼料成分分析Weende 一百多年前提出的常規(guī)飼料成分分析方案在營(yíng)養(yǎng)學(xué)中仍然應(yīng)用最廣。隨著營(yíng)養(yǎng)學(xué)的發(fā)展,除了常規(guī)分析的粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、無氮浸出物、粗灰分及干物質(zhì),此外,有時(shí)還要測(cè)定真蛋白(TP、非蛋白氮、氨基氮、氨基酸、各種脂肪酸、
3、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素、纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、糖、淀粉、礦物質(zhì)、維生素、真菌及霉菌產(chǎn)物、生物堿、酶以及其它有毒、有害物質(zhì)等也納入了分析的內(nèi)容。通過上述分析可對(duì)飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值作出初步的估計(jì)。二、糞便成分分析分析糞便成分是消化實(shí)驗(yàn)和平衡實(shí)驗(yàn)必需的步驟。測(cè)定糞便中粗蛋白、粗纖維和粗脂肪等養(yǎng)分的含量,可用于飼料可消化養(yǎng)分及消化能的估計(jì)。研究礦物質(zhì)元素的代謝,由于每日內(nèi)源礦物質(zhì)的排泄量大,糞樣分析用于測(cè)定礦物質(zhì)元素的吸收率有較大誤差,若與同位素示蹤法相結(jié)合,結(jié)果更可靠。三、尿成分分析尿中含有各種無機(jī)及有機(jī)成分,它們大都是動(dòng)物體新陳代謝的產(chǎn)物。雖然尿成分的含量受許多因素影響,但正常
4、情況下各種成分都有一定的含量范圍,所以通過某些尿成分分析可了解體內(nèi)代謝和機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況是否正常。有些維生素是以輔酶的形式參與體內(nèi)物質(zhì)代謝,它們的缺乏可導(dǎo)致這些有關(guān)反應(yīng)的中斷,使尿中一些代謝的中間產(chǎn)物積累和尾產(chǎn)物減少,所以檢查這些物質(zhì)在尿中的排泄量可反映機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況。例如,葉酸缺乏,尿中亞胺甲基谷氨酸(FIGLV排泄增加;煙酸缺乏,尿中N 甲基煙酰胺減少;維生素B 6缺乏,尿中黃尿酸或犬尿酸的含量增加。四、動(dòng)物組織和血液成分的分析常用于測(cè)定的組織有肝、腎、心、骨骼肌、骨(脛骨 、毛發(fā)以及全血、血漿、血清和紅細(xì)胞,甚至整個(gè)機(jī)體樣品,包括組織中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物和相關(guān)酶(活性 的測(cè)定。它是確定
5、各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需要量的重要依據(jù),也是評(píng)價(jià)機(jī)體維生素、微量元素等營(yíng)養(yǎng)狀況常采用的標(biāo)識(shí)。結(jié)合飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、平衡實(shí)驗(yàn)和屠宰實(shí)驗(yàn),可確定動(dòng)物對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。常用作標(biāo)識(shí)的功能酶及相應(yīng)的微量元素和維生素有:血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX硒,血清堿性磷酸酶鋅,血漿銅藍(lán)蛋白氧化酶銅,血漿黃嘌呤氧化酶鉬,血漿中以焦磷酸硫胺素為輔酶的酶-硫胺素,紅細(xì)胞中含黃素二核苷酸(FAD的谷胱甘肽還原酶核黃素,紅細(xì)胞或血漿中酪氨酸和天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶維生素B 6,血漿丙銅酸羧化酶生物素等。用酶活作為評(píng)價(jià)機(jī)體某些微量元素和維生素的營(yíng)養(yǎng)狀況是較靈敏的指標(biāo),缺點(diǎn)是有些酶活的準(zhǔn)確測(cè)定較困難,主要是樣品的保存和測(cè)定條件要求嚴(yán)格。有
6、關(guān)動(dòng)物組織、血液和尿中維生素及微量元素含量、相關(guān)酶活性及代謝產(chǎn)物的水平大多數(shù)都不是鑒別缺乏癥或確定需要量唯一的指標(biāo),對(duì)某一種或某些動(dòng)物敏感的指標(biāo),不一定適用于另一種或另一些動(dòng)物。因此,常常把組織、血液或尿中的含量,結(jié)合酶活以及生長(zhǎng)反應(yīng)作綜合評(píng)定。第二節(jié) 消化實(shí)驗(yàn)飼料的化學(xué)成分分析只能說明飼料中各種養(yǎng)分的含量,而不能表明它們能被動(dòng)物消化利用的程度。動(dòng)物采食的飼料經(jīng)消化后,從理論上講,凡是被消化吸收進(jìn)入體內(nèi)的養(yǎng)分,只要數(shù)量和比例與動(dòng)物所需完全一致,其利用率應(yīng)當(dāng)為100%。但實(shí)際上總有一部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(一般占食入總量的20-30%不能被吸收,隨同消化道分泌物和脫落的腸壁細(xì)胞以糞便的形式排出體外。因此,
7、準(zhǔn)確測(cè)定飼料或飼糧中可消化(可利用 養(yǎng)分的含量具有重要意義,也是評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要方法。一般將被吸收的養(yǎng)分占食入養(yǎng)分的百分比定為消化率。計(jì)算消化率的公式參見本書第二章。養(yǎng)分及能量消化率的測(cè)定是通過消化實(shí)驗(yàn)來實(shí)現(xiàn)的。隨著營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的深入, 消化實(shí)驗(yàn)也不斷改進(jìn)完善。目前消化實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容可用圖示(圖12-1 剖析說明??紤]營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或能量吸收后,一部分經(jīng)過體內(nèi)代謝時(shí),從尿中排出,因此,在消化實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,再增加尿液的收集,測(cè)定尿中排泄的養(yǎng)分和能量,即稱代謝實(shí)驗(yàn),一般用于飼料的代謝能或養(yǎng)分的代謝率的測(cè)定。由于代謝實(shí)驗(yàn)只是在消化實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上增加尿液的收集和分析,其它類似消化實(shí)驗(yàn),故不再專門介紹。 一、體
8、內(nèi)消化實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物測(cè)定飼料養(yǎng)分經(jīng)過其消化道后的消化率常稱體內(nèi)(in vivo消化實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)消化實(shí)驗(yàn)通常分為全收糞法(常規(guī)法 和指示劑法。因收糞的部位不同,全收糞法又可分為肛門收糞法和回腸末端收糞法。指示劑法也可分為內(nèi)源指示劑和外源指示劑法,進(jìn)一步仍可分為肛門收糞和回腸收糞。(一 全收糞法1. 肛門收糞法 其方法、步驟是:(1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備和要求 一般選擇健康有代表性的動(dòng)物,如對(duì)性別無特殊要求,常選用公畜,便于糞尿分開。一般可采用拉丁方設(shè)計(jì),每測(cè)一種飼料,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不得少于3頭,一般以4-5頭為宜。動(dòng)物過少,測(cè)值代表性差;動(dòng)物過多,測(cè)值準(zhǔn)確性雖略有提高,但費(fèi)用和工作量都增加。測(cè)定禽飼料氨基酸的消化率
9、,由于個(gè)體間差異大,一般要求16-24只,但為減少測(cè)定氨基酸的樣品數(shù),可3-4只為一組,測(cè)其混合糞樣的氨基酸。(2測(cè)試飼料和飼糧的準(zhǔn)備 用于測(cè)試的飼料要一次備齊,按每日每頭飼喂量稱重分裝,并取樣供分析干物質(zhì)和養(yǎng)分含量用。按消化實(shí)驗(yàn)的目的配制全價(jià)的待測(cè)飼糧。日飼喂量以動(dòng)物能全部攝入為原則,一般為體重的35。體重愈大,飼喂量占體重的比例愈小。(3實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)分預(yù)備實(shí)驗(yàn)和正式實(shí)驗(yàn)兩個(gè)階段。預(yù)備實(shí)驗(yàn)的目的是讓動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)飼糧,排空腸道原有的內(nèi)容物,同時(shí)也熟悉動(dòng)物的排糞規(guī)律,了解采食量。一般成年體重較小的動(dòng)物以及幼齡動(dòng)物的消化道排空快,實(shí)驗(yàn)時(shí)間較短。正式實(shí)驗(yàn)期收集糞便的天數(shù)以偶數(shù)為好,可避免動(dòng)物排糞一天多一天少帶來的誤差。預(yù)飼期和實(shí)驗(yàn)期的長(zhǎng)短大致規(guī)定見表12-6:表12-6 不同種類動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)期規(guī)定預(yù)備實(shí)驗(yàn)期 正式實(shí)驗(yàn)期 牛、羊10-14天 10-14天 馬7-10天 8-10天 豬5-10天 6-10天 家禽* 3-5天 4-5天*:一般是進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn), 采用強(qiáng)飼法,實(shí)驗(yàn)期為1-2天。由于有相當(dāng)一部分飼料,如粗纖維含量高的礱糠,適口性差的菜籽粕及體積大的青綠飼 料,在測(cè)定其消化率時(shí),動(dòng)物很難采食夠?qū)嶒?yàn)
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