運動性疲勞腎氣虛大鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)和性激素改變及補腎益元中藥的

1、史墾重麴墮堂苤查！塑！生！旦箜塹鲞箜呈塑墾蔓！坐堅盟！墮型蘭塑?。乎剑。?！運動性疲勞腎氣虛大鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)和性激素改變及補腎益元中藥的作用石幼琪周志宏王奎劉晟劉建紅歐明毫湖南省體育科學(xué)研究所（長沙）摘要目的：探討運動性疲勞腎氣虛的實質(zhì)及補腎益氣中藥的作用機理。方法：以健康雄性二月齡大鼠為研究對象，隨機分為安靜對照組、運動實驗組、運動腎氣虛組和服藥組（服用補腎益元中藥），采用遞增負荷游泳加懸吊應(yīng)激的方案建立運動性疲勞腎氣虛動物模型。實驗后檢測各組大鼠血清睪酮和促性腺激素含量，稱量大鼠睪丸重量并觀察睪丸的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果：（）運動實驗組和運動腎氣虛組大鼠血清睪酮含量顯著低于安靜對照組（）；（）服藥組

2、大鼠血清睪酮水平顯著高于運動腎氣虛組（）；（）電鏡觀察運動實驗組和運動腎氣虛組大鼠睪丸間質(zhì)嚴重水腫（），細胞固縮，染色質(zhì)邊集，呈凋亡改變。而服藥組大鼠睪丸間質(zhì)水腫不明顯，大多數(shù)細胞結(jié)構(gòu)基本正常，線粒體嵴大多數(shù)清晰，趨于正常。結(jié)論：補腎益元中藥能保護過度訓(xùn)練大鼠的睪丸間質(zhì)細胞及細胞內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)以維持睪酮的正常分泌、促進內(nèi)源性睪酮的再生，這種對睪丸組織結(jié)構(gòu)的保護作用可能是延緩運動性疲勞腎氣虛發(fā)生的機理之一。關(guān)鍵詞運動性疲勞；腎氣虛；睪丸；超微結(jié)構(gòu)；性激素；中藥為了探討運動性疲勞腎氣虛的實質(zhì)及補腎益氣中藥的作用機理，本研究觀察了運動性腎氣虛動物相關(guān)內(nèi)分泌指標(biāo)和睪丸超微結(jié)構(gòu)改變及補腎益氣中藥對其的影響

3、，為研究運動性腎氣虛的發(fā)生及預(yù)防提供實驗依據(jù)。材料與方法動物與分組健康雄性二月齡大鼠，體重±，由中南大學(xué)實驗動物中心提供。所有大鼠在相同的環(huán)境下以相同飼料喂養(yǎng)。開始正式實驗前，先進行為期周的適應(yīng)性游泳，淘汰無法參加游泳運動的大鼠，然后隨機分組進行正式實驗。只大鼠隨機分為組：安靜對照組（不運動）、運動實驗組（游泳運動）、運動腎氣虛組（游泳運動懸吊應(yīng)激）和服藥組（游泳運動懸吊應(yīng)激中藥灌胃，劑量：體重），每組只。藥物為超微補腎益元中藥糖漿，主要成分為人參、女貞子、枸杞、鎖陽、黃芪、仙鶴草、杜仲等。由湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院制劑室制備，規(guī)格為生藥糖漿。運動性疲勞腎氣虛動物模型采用遞增負荷游

4、泳加懸吊應(yīng)激的方案建立運動性疲勞腎氣虛動物模型，。游泳的玻璃缸長、寬、高，水溫為，水深為，所有參與運動的大鼠以相同方式進行游泳訓(xùn)練，每周一至周六游泳六天，每天上午兩次，共訓(xùn)練周。第一、二、三、四、五周每次游泳時間分別為、分鐘，間隔時間均為分鐘。從第三周開始，大鼠游泳時尾部負體重的鉛絲，第四、五周增加到。運動腎氣虛組和服藥組前周依上述方案游泳，第周，上午仍繼續(xù)負重游泳，下午給予懸吊應(yīng)激。應(yīng)激方法：將大鼠尾部距肛門處用膠布固定在長木條上，使其頭向下懸吊一定時間。其下放置一缸水，使鼠鼻恰及水面，以迫使其處于抬頭和四肢不斷活動狀態(tài)。用溫度計測定應(yīng)激前及懸吊期間不同時間的肛溫。懸吊應(yīng)激期間動物體溫逐漸下

5、降，作為動物對應(yīng)激反應(yīng)和耐受情況的主要參考指標(biāo)。每次懸吊時間小時，由于出現(xiàn)應(yīng)激耐受，其后各天應(yīng)激期間體溫下降變慢，因此逐漸增加懸吊時間。各運動組大鼠在第五周的最后一天進行力竭實驗。力竭的判斷標(biāo)準是：從大鼠下水開始記時，直到大鼠無力浮上，即將沉入水底停表記時，記錄力竭運動時間舊。給藥方案按劑量灌胃（按成人正常用藥量換基金項目：湖南省科技廳年社會發(fā)展重點項目（編號：）資助通訊作者：石幼琪。：；：主墾重麴匿堂鎣查呈塑！生！旦箜塹鲞笙蘭塑堡壘也！坐墮墮！叢竺蘭堂?。簤q！墮！：蘭算，每毫升藥液相當(dāng)于克生藥）。灌胃時間為游泳后小時。安靜對照組大鼠灌相同體積的飲用水。動物取材及指標(biāo)測試各運動組大鼠在最后一次

6、運動后次日分別處死，安靜對照組同時處死。采用的戊巴比妥（）腹腔注射，麻醉后腹主動脈取血，靜置后分離血清，一保存，用于血清睪酮（）和血清促性腺激素（）的測定。取大鼠右側(cè)睪丸，電子天平稱重。每組隨機取只大鼠的右側(cè)睪丸進行電鏡標(biāo)本的制備：以戊二醛溶液固定，常規(guī)包埋、切片，醋酸鈾和硝酸鉛雙重染色。透射電鏡觀察。實驗儀器血清激素測試儀器為美國寶特酶標(biāo)儀。透射電鏡觀察儀器為日本產(chǎn)日立一，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院電鏡室制片看片。統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)用統(tǒng)計軟件處理，計量資料用茗±表示，組間兩兩比較采用單因素方差分析（），顯著性差異水平為。結(jié)果實驗后各組大鼠性腺軸指標(biāo)的變化表顯示，實驗周后，運動實驗組和運動

7、腎氣虛組大鼠血清睪酮含量顯著低于安靜對照組（）；服藥組大鼠血清睪酮水平顯著高于運動腎氣虛組（）。各組血清濃度及睪丸重量均無顯著性差異。表實驗后各組大鼠血清、及睪丸重量值注：，與安靜對照組比較；，與運動腎氣虛組比較。各組大鼠睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的變化（倍，圖）圖運動腎氣虛組：間質(zhì)水腫嚴重，間質(zhì)細胞呈長梭形，胞質(zhì)線粒體嵴大多丟失，甚至呈空泡變，核染色質(zhì)圖安靜對照組：為正常睪丸細胞結(jié)構(gòu)，細胞內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正常略有邊集圖服藥組：間質(zhì)水腫不明顯，大多細胞結(jié)構(gòu)基本正常，圖運動實驗組：細胞固縮，間質(zhì)嚴重水腫（）染色邊集，呈凋亡改變細胞內(nèi)大多線粒體結(jié)構(gòu)較清晰，但仍可見部分細胞 有染色質(zhì)邊集主墾垂塑匿堂鎣

8、查蘭塑！生！旦箜塹鲞箜呈塑堡壘墮！墅墮！叢盟！叢型蘭堂?。簤q！墮?。河懻摫狙芯繀⒄者\動性疲勞低血睪酮模型和應(yīng)激致“腎虛”動物模型（現(xiàn)此模型已被列入衛(wèi)生部“保健食品技術(shù)規(guī)范”作為改善性功能作用檢驗方法之一），采用遞增負荷游泳加懸吊應(yīng)激的方案建立運動性疲勞腎氣虛動物模型。這種模型基于中醫(yī)理論“恐傷腎”、“房勞傷腎”和運動性疲勞的特點，給予動物一種較長期強應(yīng)激（懸吊）和大強度運動，使其較長期處于恐懼、緊張、過勞狀態(tài)，產(chǎn)生類似人體“腎虛”的病理生理變化。本文采用此模型，觀察到補腎益元方劑對運動性疲勞腎氣虛大鼠相關(guān)指標(biāo)有所改善，反證了動物模型是成功的。許多臨床研究和動物實驗表明，過度訓(xùn)練后出現(xiàn)的癥狀多類

9、似中醫(yī)之腎陽、腎氣虛弱表現(xiàn)及低血睪酮癥狀，補腎氣、溫腎陽的中藥在抗運動性疲勞之血睪酮降低治療中占主導(dǎo)。本研究結(jié)果顯示運動腎氣虛組經(jīng)五周遞增運動負荷加懸吊應(yīng)激，血水平均較安靜對照組顯著降低，而服用補腎益元中藥組血與安靜對照組無顯著差異，表明補腎益元中藥能防止運動性低血睪酮和運動性腎氣虛的發(fā)生。通過血液循環(huán)到達睪丸后，與間質(zhì)細胞上的膜受體結(jié)合，促進合成與分，；當(dāng)血水平下降時，其對垂體和下丘腦的抑制作用減弱，反饋性地引起、分泌增加，從而使血水平回調(diào)。由于在下丘腦、垂體、睪丸之間存在這種功能相關(guān)而又互相影響的關(guān)系，因而被稱做下丘腦一垂體一性腺軸調(diào)控系統(tǒng)。本研究結(jié)果顯示，運動實驗組、運動腎氣虛組和服藥組

10、較安靜對照組高，尤其是服藥組升高較多，但無顯著性差異，說明血下降時，下丘腦一垂體一性腺軸調(diào)控系統(tǒng)起了一定作用。鄭陸等發(fā)現(xiàn)，大鼠睪丸重量與血清水平相關(guān)，提示有可能根據(jù)睪丸重量判斷其合成并分泌能力的強弱。本研究中，各組睪丸的平均重量差異無顯著意義，與文獻報道不一致，可能是血清的增加不是通過睪丸間質(zhì)細胞數(shù)量增多使睪丸重量增加，而是通過其他途徑實現(xiàn)的。本研究結(jié)果表明，單純連續(xù)大強度運動和運動加應(yīng)激造成的運動性腎氣虛大鼠的睪丸超微結(jié)構(gòu)均有明顯的破壞，尤以腎虛組為甚。應(yīng)用補腎益元中藥后，睪丸間質(zhì)水腫明顯減輕，趨于正常，細胞線粒體結(jié)構(gòu)基本清晰，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及溶酶體改變也不明顯。這些現(xiàn)象提示睪丸間質(zhì)細胞、線粒體、染

11、色質(zhì)結(jié)構(gòu)的損傷使合成睪酮的能力及能量代謝受影響，是造成運動性低血睪酮和運動性腎氣虛的外周機制之一，補腎益氣中藥能改善運動性低血睪酮癥，并不是直接合成或補充睪酮，也不是影響性腺軸上游，而主要是通過保護睪丸間質(zhì)細胞、線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常結(jié)構(gòu)，使其充分發(fā)揮正常的分泌功能，促進內(nèi)源性睪酮的分泌。提示睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的破壞是運動性腎氣虛病理學(xué)證據(jù)之一。小結(jié)為期周的負重遞增負荷游泳訓(xùn)練加懸吊應(yīng)激后，大鼠出現(xiàn)運動性低血睪酮和睪丸組織超微結(jié)構(gòu)明顯破壞，可能是運動性疲勞腎氣虛病機和病理學(xué)的證據(jù)之一。服用補腎益元中藥，有提升大鼠血清睪酮水平的作用，可防止雄性大鼠運動性低血睪酮的發(fā)生。補腎益元中藥能保護過度訓(xùn)練大鼠的睪丸間質(zhì)細胞及細胞內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)以維持睪酮的正常分泌、促進內(nèi)源性睪酮的分泌，這種對睪丸組織結(jié)構(gòu)的保護作用可能是防治運動性疲勞腎氣虛和低血睪酮發(fā)生的機理之一。參考文獻包天桐應(yīng)激致“腎虛”動物模型介紹藥學(xué)學(xué)報，（）：徐曉陽，馮煒權(quán)，馮美云，等運動性低血睪酮大鼠某些功能的變化及補腎中藥效果的觀察天津體育學(xué)院學(xué)報，（）：錢風(fēng)雷，曾凡輝補