臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制流程

1、臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制流程1、質(zhì)量的概念和質(zhì)量保證影響檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的因素很多 ,實(shí)驗(yàn)過程中 ,儀器、試劑和操作 等均會(huì)引起試驗(yàn)結(jié)果的誤差 ,衡量檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量常用準(zhǔn)確度和精 確度,或特異性和靈敏度。 具體采用哪一種指標(biāo)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)決 定,目前臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的工作內(nèi)容大致有3 類 ,衡量起質(zhì)量的技術(shù)指標(biāo)不完全相同。第一類是檢出細(xì)菌的實(shí)驗(yàn) ,包括標(biāo)本直接涂片檢查和細(xì)菌分離 培養(yǎng)。現(xiàn)代的細(xì)菌感染 ,混合菌較常見 ,一份標(biāo)本中 ,會(huì)有 2 種以上細(xì) 菌存在。無論標(biāo)本直接涂片還是分離培養(yǎng) ,檢驗(yàn)結(jié)果必須如實(shí)反映感 染病灶中細(xì)菌的真實(shí)情況。 這類實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量 ,應(yīng)該用細(xì)菌檢出率或細(xì) 菌分離率來衡量。第

2、二類是鑒定細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)。通過一系列生理生化及形態(tài)學(xué)、 血清學(xué)的手段來鑒定病原菌。 對(duì)分離到的病原菌都做出準(zhǔn)確的鑒定 是反映細(xì)菌事工作質(zhì)量的一個(gè)重要方面。第三類是藥敏實(shí)驗(yàn)。 有稀釋法和紙片法 ,前者是半定量的實(shí)驗(yàn) 可以用準(zhǔn)確度和精密度來衡量 ,后者以敏感或耐藥的形式報(bào)告 ,屬于 定性的實(shí)驗(yàn) ,但實(shí)驗(yàn)過程中測量抑菌環(huán)是定量的指標(biāo)。 也應(yīng)以準(zhǔn)確度 和精確度衡量。所以實(shí)驗(yàn)室人員必須清楚認(rèn)識(shí)到以上這一點(diǎn) ,在實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì) 和管理方面就應(yīng)該主動(dòng)設(shè)置誤差檢測系統(tǒng) ,實(shí)驗(yàn)中一旦出現(xiàn)誤差及 時(shí)發(fā)出警報(bào) ,查明原因及時(shí)糾正。2、室內(nèi)質(zhì)量控制2.1 在職人員2.1.1 須受過細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的專門基礎(chǔ)教育以及相關(guān)的生物交全

3、防護(hù) 知識(shí) ,并以細(xì)菌檢驗(yàn)為專業(yè) ,及時(shí)終結(jié)并積累工作經(jīng)驗(yàn)。2.1.2 作人員必須具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度 ,技術(shù)操作須完全遵守操作規(guī) 程,并直接參與質(zhì)量控制工作。2.1.3 工作人員應(yīng)不斷加強(qiáng)自身的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí) ,及時(shí)了解本領(lǐng)域的新進(jìn) 展,將所掌握的新知識(shí)應(yīng)用到實(shí)際工作中。2.1.4 實(shí)驗(yàn)室管理人員應(yīng)注意利用一切機(jī)會(huì)培養(yǎng)技術(shù)人員,積極參加國際、國內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議、專業(yè)培訓(xùn)班 ,獲取新信息。因?yàn)榧?xì)菌學(xué)檢驗(yàn) , 投資人員培訓(xùn)遠(yuǎn)比投資與儀器設(shè)備更重要。2.2 操作手冊及參考書細(xì)菌室可以根據(jù)自己的實(shí)際情況制訂一本指導(dǎo)日常工作、簡 明扼要的操作手冊 ,并在工作中不斷完善和修改。2.2.2 細(xì)菌室應(yīng)準(zhǔn)備一些細(xì)菌學(xué)參考書

4、 ,解決某些少見的菌種的分離 鑒定 ,判斷細(xì)菌的致病性及向臨床醫(yī)生解釋結(jié)果時(shí)用。3、設(shè)備質(zhì)量控制3.1 溫箱、冰箱每日工作開始 ,在打開溫箱或冰箱等控溫設(shè)備前 ,以及 下午下班前須觀察當(dāng)時(shí)設(shè)備的溫度并記錄。3.2 高壓滅菌器須定期檢查滅菌器的滅菌效果 ,至少每月 1 次。測試 方法可用留點(diǎn)溫度計(jì)或嗜熱芽孢菌等 ,并定期維修。3.3 生物安全柜新安裝必須由生產(chǎn)廠家提供安裝檢測報(bào)告,以后每年必須檢測一次 ,若須更換濾網(wǎng) ,須由專門技術(shù)人員進(jìn)行 ,并提供檢測報(bào) 告。工作時(shí)檢測氣流、 紫外燈正常與否 ,可用營養(yǎng)瓊脂檢測空氣中細(xì) 菌的沉降數(shù) ,紫外線必須有使用記錄 ,每 3 個(gè)月檢查一次性能 3.4 接

5、 種環(huán)要求長 5-8cm, 環(huán)直徑約 3mm; 接種針長 5-8cm 。3.5顯微鏡應(yīng)做好常規(guī)的清潔和保養(yǎng)。所有的技術(shù)人員必須對(duì)顯微 鏡的對(duì)光、應(yīng)用和清潔正確步驟掌握。3.6細(xì)菌鑒定儀應(yīng)及時(shí)更新系統(tǒng)操作軟件。定期清浩儀器的探測部位，并用標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行校正，必要時(shí)按照菌株對(duì)每批號(hào)的鑒定卡、條、板進(jìn)行一次測定，并核對(duì)每個(gè)反應(yīng)和藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。4. 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制每批培養(yǎng)基應(yīng)有配制記錄，并對(duì)不同性能的培養(yǎng)基要用以知特 性的、穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行測定并記錄 ,符合要求方可應(yīng)用。培養(yǎng)基的一般質(zhì)量控制項(xiàng)目檢測標(biāo)準(zhǔn)檢測頻率(1)外觀液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基含指示劑的培養(yǎng)基各種培養(yǎng)基都應(yīng)有名 稱、標(biāo)記和制備日期 顏

6、色、透明度、失水情 況無菌落、不干裂無 菌、顏色符合要求每周(2)平板深度般培養(yǎng)基3mmMH 為 4-6mm每批(3)雙糖斜面底層與斜面之間至少 有1cm的直立段，長度 不得過2/3試管，不可 干裂每批（4 ）無菌試驗(yàn) 經(jīng)病壓火菌后的培養(yǎng) 基無菌分裝的試管或 平板選擇性培養(yǎng)基隨機(jī)取10個(gè)，放35度孵箱24h無菌每批（5）硬度試驗(yàn) 固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基劃線接種應(yīng)無碎裂 穿刺接種后能區(qū)分有 動(dòng)力或無每批監(jiān)控常規(guī)培養(yǎng)基及試劑的菌種培養(yǎng)基陽性（或生長）陰性（或不生長）監(jiān)測頻率第一套：A（每月一次）賴氨酸脫酶遲緩愛德華菌弗氏構(gòu)櫞酸菌鳥氮酸脫羧酶產(chǎn)氣腸桿菌弗氏構(gòu)橡酸菌精氨酸雙水解酶陰溝腸桿菌普通變形桿

7、菌靛基質(zhì)大腸埃希氏菌陰溝腸桿菌v - p陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌櫞酸鹽（西蒙氏）產(chǎn)氣腸桿菌遲緩愛德華菌苯丙氨酸脫氨酶雷氏變形桿菌弗氏枸櫞酸菌母批葡萄糖0-F氧化銅綠假單胞菌發(fā)酵大腸埃希氏菌不活動(dòng)洛非氏不動(dòng)桿菌硝酸鹽還原銅綠假單胞菌洛菲氏不動(dòng)桿菌氧化酶觸酶膽汁七葉酸 丙二酸鹽 尿素動(dòng)力銅綠假單胞菌ATCC27853金黃色葡萄球菌糞鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌雷極氏變形桿菌（快） 肺炎克雷伯氏菌（慢） 大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌ATCC25922化膿性鏈球菌化膿性鏈球菌 遲緩愛德華菌 大腸埃希氏菌肺炎克雷伯氏菌第二套:B（每批一次）巧克力球脂（HN）羊血瓊脂平板麥康凱雙糖鐵培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂流感血桿菌化膿性鏈球菌（小

8、菌落）肺炎鏈球菌（中等菌落）大腸埃希氏菌（粉紅 菌落）奇異變形桿菌（無色 菌落）金黃色葡萄球菌每批5試劑、染色液的質(zhì)量控制試劑的質(zhì)量控制試劑陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率氧化酶銅綠假單胞菌ATCC 2 7 8 5 3金黃葡萄球菌大腸埃希氏面ATCC 2 5 9 2 2每次凝固酶表皮葡萄球菌每次桿菌肽紙片A群鏈球菌B群鏈球菌每次Optochin 紙片肺炎鏈球菌草綠色鏈球菌每次染色液的質(zhì)量控制染色液陽性控制菌種陰性控制菌監(jiān)測頻率革蘭氏染色液金黃色葡萄球菌 ATCC 2 5 92 3大腸埃希氏菌ATCC 2 5 9 2 2每天萋納抗酸染液TB陽性的痰液不作每次鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志賀氏每次6、

9、藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制瓊脂擴(kuò)散法為藥敏試驗(yàn)直接測定抑菌環(huán)直徑。參考菌株分別選擇金黃色葡萄球菌 ATCC25923、大腸埃希氏菌 ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。由于有很多因素均能影響藥敏試驗(yàn)擴(kuò)散法的結(jié)果,因此對(duì)以下每一可變因素均應(yīng)按要求加以控制:6.1培養(yǎng)基的成分、PH及深度:成分為水解烙蛋白瓊脂:PH為7.2+0.1 ;深度為4mm，一只9cm直徑的平板約需25ml培養(yǎng)基。6.2 抗生素紙片含量及有效期 :庫存的抗生素紙片儲(chǔ)存在 20 度 ,小量 使用抗生素紙片密封后存放于冰箱的冰格內(nèi)。 使用時(shí)取出 ,放置室溫 平衡后再開啟。6.3 菌落濃度 :挑取分純的菌落 5-10 個(gè)移

10、種于合適的液體培養(yǎng)基 ,35 度 46h 后 ,校正菌液濃度與標(biāo)準(zhǔn) 0.5 麥?zhǔn)媳葷峁芟嗤瑸橹埂?.4 將菌液均勻的涂好 ,每只 9cm 平極至多貼 7 張紙片 ,測試平板最 多兩只疊在一起 ,不得過多 ,量取抑菌環(huán)用毫米尺。6.5 參考菌種的抑菌環(huán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是 :藥物對(duì)該菌株的排菌環(huán)直徑 平均值+2 標(biāo)準(zhǔn)差:簡明的說 :將這個(gè)指標(biāo)換算成抑菌環(huán)直徑質(zhì)量控 制允許范圍。實(shí)驗(yàn)室連續(xù) 30 次監(jiān)測的結(jié)果允許最多 3 次超過質(zhì)量 控制范圍 ,并且這 3 次失控不應(yīng)該連續(xù)出現(xiàn)。如超出圍 ,成查明誤差 原因并予以糾正。6.6 質(zhì)控菌株:大腸埃希氏菌 ATCC25922 、大 腸埃希氏菌 ATCC35218（用于B內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑）;金黃色葡萄球菌ATCC25923 銅綠假單胞菌 ATCC27853 等。6.7 質(zhì)控測定次數(shù) :每批新的 M-H 瓊脂和含藥紙片必須用質(zhì)控菌株 進(jìn)行檢測。每大與臨床標(biāo)本一起測定質(zhì)控菌株以監(jiān)控整個(gè)過程,NCCLS 規(guī)定只有在符合以下條件時(shí)才可減少測定次數(shù)： 與常規(guī)標(biāo)本一起連續(xù)測定質(zhì)控菌株 30 日。 每種藥物與相應(yīng)的每種細(xì)菌的 30 個(gè)抑菌環(huán)直徑 （3 個(gè)結(jié)果超 出規(guī)定范圍）。達(dá)到以上要求以后 ,可執(zhí)行每周一次檢測。如發(fā)現(xiàn)有一個(gè)不符 合的結(jié)果 ,應(yīng)立即尋找原因 ,如果發(fā)現(xiàn)諸如質(zhì)控菌錯(cuò)誤、含藥紙片種 類錯(cuò)誤或標(biāo)準(zhǔn)菌種被污染等明顯的錯(cuò)誤,加