蘇丹紅ELISA快速檢測試劑盒

1、蘇丹紅ELISA快速檢測試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號：CSB-E12032f檢測范圍：1.56 ng/ml-100 ng/ml最低檢測限：0.39 ng/ml特異性：本試劑盒可用于快速檢測蘇丹紅。與對位紅有一定交叉反應。有效期：6個月預期應用：ELISA法定量測定雞蛋，辣椒粉，辣椒醬等樣品中的蘇丹紅殘留。說明 1試劑盒保存：-20（較長時間不用時）；2-8（頻繁使用時）。2濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 3中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。4剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。概述蘇丹紅

2、，又名“蘇丹”。蘇丹紅并非食品添加劑，而是一種化學染色劑。它的化學成份中含有一種叫萘的化合物，該物質(zhì)具有偶氮結(jié)構，由于這種化學結(jié)構的性質(zhì)決定了它具有致癌性，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用。1995年歐盟(EU)等國家已禁止其作為色素在食品中進行添加，對此我國也明文禁止。但由于其染色鮮艷，印度等一些國家在加工辣椒粉的過程中還容許添加蘇丹紅I。實驗原理本試劑盒采用免疫競爭法檢測蘇丹紅。微孔板上包被有抗蘇丹紅抗體。加入蘇丹紅酶結(jié)合物和蘇丹紅標準品或樣品，游離蘇丹紅與蘇丹紅結(jié)合物競爭微量反應板上的抗蘇丹紅抗體，沒有結(jié)合的酶結(jié)合物被洗去。再向反應孔中加入相應反應底物TMB，作用一定時間后，結(jié)合的酶結(jié)

3、合物將TMB轉(zhuǎn)化為藍色，轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蘇丹紅呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1. 已包被兔抗三聚氰胺抗體的酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊（96孔）。 2. 標準品（Standard）：2100ul/瓶。3. 樣品稀釋液(Sample Diluent)：120ml/瓶。4. 辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物（HRP Sudan）：1100ul/瓶（1：100）。5. 辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物稀釋液（HRP Sudan Diluent）：110ml/瓶。6. 底物溶液（TMB Substrate）

4、：110ml/瓶。 7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：120ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 8. 終止液（Stop Solution）：110ml/瓶（2N H2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1. 標準規(guī)格酶標儀2. 高速離心機3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱4. 超聲清洗器5. 離子交換小柱（PCX）6. 氮氣吹干儀7. 干凈的試管和Eppendof管8. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器9. 蒸餾水，容量瓶等標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中

5、，應做好詳細的記錄。最后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶濃度為100 ng/ml，以樣品稀釋液做系列倍比稀釋，分別稀釋100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml。樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml。辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔50ul），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物加990ul辣

6、根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。操作步驟實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物工作液。盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37反應30分鐘-1小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標

7、準品溶液。2. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。3. 依序每孔加底物溶液90ul，37避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。4. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。5. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。注：1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2. 每次實

8、驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8保存。標準品、辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、辣根過氧化物酶標記蘇丹紅結(jié)合物工作液。5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘

9、。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。計算以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數(shù)。6. 在配制標準品、