凍干培養(yǎng)基灌裝模擬試驗1

1、XXXXXXXX粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗是對粉針車間使用F2000/12/600型灌裝機在局部百級工作環(huán)境中進行凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程防止微 生物污染的水平可以達到可接受的合格標準的能力。通過檢查確認找出粉針車間進行凍干粉 針劑灌裝作業(yè)過程中的控制要求，為今后對粉針車間進行凍干粉針劑灌裝作業(yè)管理確定依 據(jù)。、該方案的實施由下述單位負責進行:實施部門職責生產(chǎn)技術(shù)部制訂粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗驗證方案，組織方案 的實施。負責各類相關(guān)文件的檢查及準備。負責出具驗證報告。設(shè)備部參與方案的制訂過程，參與方案的

2、實施，負責方案中各設(shè)施、設(shè)備的檢 查確認，負責出具驗證報告。質(zhì)量保證部參與方案的制訂過程，參與方案實施。負責關(guān)于各檢查項的落實。QC化驗室參與方案的制訂過程，參與方案實施。負責各檢查項的檢查，并出具檢 測報告。粉針車間參與方案的實施。配合方案的落實。二、方案實施單位責任人:實施部門責任人簽名設(shè)備部生產(chǎn)技術(shù)部質(zhì)量保證部QC化驗室粉針車間三、驗證小組成員:部門姓名部門姓名設(shè)備部質(zhì)量保證部設(shè)備部質(zhì)量保證部設(shè)備部質(zhì)量保證部生產(chǎn)技術(shù)部生產(chǎn)技術(shù)部QC化驗室QC化驗室QC化驗室粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間粉針車間凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗驗證方案制訂日期：方案制訂：

3、批準日期：方案批準：1.概括 ,1.1 目的 ,1.2 范圍 ,1.3 責任 , 2.確定可接受的合格標 , 3.培養(yǎng)基性能測試 , 3.1 微生物生長性能試驗 , 3.2 培養(yǎng)基無菌性試驗 ,4 模擬分裝用無菌粉末 , 4.1模擬分裝用無菌粉末應(yīng)具有的特性4.2 無菌性試驗 ,4.3 抑菌性試驗 ,4.4 溶解性試驗 ,5 模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制6 操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測6.1 模擬分裝使用西林瓶及膠塞無菌性檢測6.2 微生物控制與監(jiān)測 , 6.3 塵埃粒子監(jiān)測 ,7 取樣計劃及取樣點 ,7.1 取樣計劃 ,7.2 取樣點 ,8 模擬分裝 ,8.1 無菌粉針劑模擬分裝方法8

4、.2液體培養(yǎng)基制備及進入無菌分裝區(qū)方法8.3液體培養(yǎng)基分裝工具的選用及處理使用方法8.4無菌粉針劑模擬分裝試驗8.5液體培養(yǎng)基分裝 ,9 微生物培養(yǎng) ,9.1 陰性對照 ,9.2 陽性對照 , 9.3 試驗樣品培養(yǎng) , 10 試驗結(jié)果評價 , 11 驗證制度及再驗證時間安排12 確認方案執(zhí)行日期 ,1、概括凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗是在其他各個系統(tǒng)（諸如滅菌系統(tǒng)、公用系統(tǒng)、無 菌環(huán)境保持系統(tǒng)、設(shè)備驗證、設(shè)備清洗過程驗證等）驗證工作完成的基礎(chǔ)上進行的。采用培 養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗方法進行。1.1 、目的用和實際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境） ，向凍干制品容器（西林瓶） 內(nèi)灌裝

5、經(jīng)除菌過濾器過濾的培養(yǎng)基， 然后將此模擬制品在適當條件下培養(yǎng)， 以確認工藝過程 的可靠性。證明在凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的 水平達到可接受的合格標準的能力， 或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無菌性的可信限度達到可接受 的合格標準的證據(jù)。1.2 、范圍此驗證方案適用于粉針車間凍干粉針劑灌裝過程驗證。1.3 、責任生產(chǎn)技術(shù)部、質(zhì)量保證部、 QC 化驗室、粉針車間、設(shè)備部負責驗證方案的執(zhí)行，主要工作內(nèi)容如下：、編訂及實施驗證方案；、實施確認并提供確認資料；、匯編測試資料于最終報告內(nèi)；、協(xié)調(diào)參與驗證過程的人員和部門，確保驗證的各項要求； 將成功的結(jié)果及分裝過程的需求規(guī)范化，

6、并制定相關(guān)文件待核準下發(fā)。2、確定可接受的合格標準警戒限：可信限為95%寸污染概率大于0.05%;合格限：可信限為95%寸污染概率小于0.1%。3、培養(yǎng)基性能測試分裝量與污染控制數(shù)關(guān)系表模擬分裝數(shù)量/瓶污染控制數(shù)量/瓶模擬分裝數(shù)量/瓶污染控制數(shù)量/瓶30004742047436294小于162957751小于277529151小于3模擬分裝試驗采用胰胨大豆肉湯培養(yǎng)基， 通過下述試驗對培養(yǎng)基微生物生長性能進行確認。首先根據(jù)標準操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后備用。3.1微生物生長性能試驗將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支試管中，在一半數(shù)量的試管中接種枯草桿菌， 接種 量為V100CFU在另一半數(shù)量的試

7、管中接種白色念珠菌，接種量為 V100CFU接種后蓋塞、封口，將接種有枯草桿菌的試管放于3035°C下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的試管放于 2025C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少有50%以上接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長。3.2培養(yǎng)基無菌性試驗將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支無菌試管中，蓋塞、圭寸口。其中50支試管放于3035C下培養(yǎng)7天，同時將另外50支試管放于2025C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)各試管培養(yǎng)基中應(yīng)無任何微生物生長。4、模擬分裝過程操作規(guī)程及操作人員控制4.1、模擬分裝試驗中使用的西林瓶和膠塞的清洗、滅菌，分裝設(shè)備的清洗、消毒，與產(chǎn)品接觸的分裝設(shè)備部件的

8、清洗、滅菌、安裝過程必須遵循與實際生產(chǎn)操作相同的標準操作規(guī)程。4.2、灌裝機灌裝速度保持與正常凍干粉針劑灌裝及半壓膠塞生產(chǎn)時的速度相同。4.3、所有參加模擬試驗的操作人員均應(yīng)經(jīng)過GMP無菌操作、無菌更衣程序技術(shù)等相關(guān)知識的培訓(xùn)并經(jīng)考核合格。4.4、參加模擬試驗的操作人員數(shù)及人員構(gòu)成應(yīng)嚴格控制，非規(guī)定的驗證小組成員嚴禁在模 擬試驗過程中進入模擬試驗現(xiàn)場， 模擬試驗現(xiàn)場人員數(shù)不得超過 5人，人員的進入及退出應(yīng)嚴格執(zhí)行標準操作程序，減少不必要的人員進入及退出次數(shù)。 可進入模擬試驗現(xiàn)場的人員名部門姓名部門姓名設(shè)備部質(zhì)量保證部生產(chǎn)技術(shù)部QC化驗室QC化驗室粉針車間QC化驗室粉針車間粉針車間粉針車間粉針車

9、間粉針車間單如下:5、操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測進行模擬試驗過程中，對以下各項進行監(jiān)測。5.1、模擬試驗使用西林瓶及膠塞無菌性檢測:按第6條取樣計劃的規(guī)定要求，對模擬試驗使用的西林瓶及膠塞進行取樣， 檢測其無菌性，合格標準為各樣品不得存在無菌性不合格情況。5.2、微生物控制與監(jiān)測:、在模擬試驗過程中，對操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、 物數(shù)量進行監(jiān)測。其取樣方法、取樣頻率、取樣要求、取樣點分布見第前臂等部位的微生6條取樣計劃。合格標準：手套全部檢出菌數(shù)2個、霉菌1個；一個操作人員雙臂、前胸的3個取樣點檢出菌數(shù)之和10 個。、對無菌區(qū)墻壁、門、設(shè)備以及操作人員可能接觸的各種表面進行無菌程度

10、檢驗。其取樣方法、取樣點、取樣頻率見第6條取樣計劃。在進行取樣時其取樣面積應(yīng)保持在225cm。合格標準：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)3個、霉菌1個;萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)10個、霉菌2個，地面檢出菌數(shù)25個、霉菌3個。、對空氣中微生物數(shù)量進行監(jiān)測，其取樣方法、取樣點、取樣頻率見第6條取樣計劃。合格標準：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)1個；萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)10個、霉菌3個;、微生物數(shù)量監(jiān)測試驗所采用的培養(yǎng)基應(yīng)為經(jīng)過無菌及微生物生長性能檢驗合格的培養(yǎng)基。、污染調(diào)查、微生物鑒別方法、污染發(fā)生時應(yīng)采取的措施執(zhí)行相關(guān)標準操作程序。5.3塵埃粒子監(jiān)測按第6條取樣計劃的規(guī)定要求，對灌裝室進行空氣質(zhì)量監(jiān)測，其監(jiān)測結(jié)果應(yīng)能證明

11、關(guān)鍵 區(qū)域空氣質(zhì)量達到百級潔凈區(qū)的空氣質(zhì)量標準。6、取樣計劃及取樣點6.1取樣計劃:監(jiān)測項目取樣方法取樣頻率取樣要求模擬試驗西林瓶無菌檢查隨機取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10支模擬試驗使用膠塞無菌檢查隨機取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10枚操作人員無菌性檢查棉簽擦拭法模擬試驗開始前，試驗 進行一半時間，試驗結(jié) 束后，分別對操作人員 進行取樣監(jiān)測取樣時，被取樣的操作人員應(yīng)離開 分裝機，在灌裝室的一角將雙臂平 伸，靜止不動，取樣人員按棉簽擦 拭取樣法在最短時間內(nèi)取樣。每次 對同一操作人員進行取樣監(jiān)測時， 其取樣點應(yīng)不相同無菌灌裝區(qū)無菌性檢杳棉簽擦拭法模擬試驗開始前，試驗 進行一半時間，試

12、驗結(jié) 束后，分別根據(jù)取樣點 要求對無菌區(qū)進行取樣 監(jiān)測根據(jù)取樣點要求取樣，取樣面積固 定，每次取樣面積為25cm。每次應(yīng) 選擇不同位置取樣，其重點為操作 者可能接觸的各種表面?？諝馕⑸飻?shù)量監(jiān)測沉降平皿法每小時取樣一次根據(jù)取樣點分布圖布置培養(yǎng)皿，各 取樣點每小時更換取樣皿進行檢 測。灌裝機附近設(shè)置四個以上的取 樣平皿連續(xù)暴露取樣。另有一個平 皿應(yīng)放置于微生物監(jiān)測室情況最差 的部位。浮游菌采樣每30分鐘監(jiān)測一次取樣操作時應(yīng)由專人進行塵埃粒子監(jiān)測粒子計數(shù)器每30分鐘監(jiān)測一次監(jiān)測應(yīng)由專人按標準操作程序進行6.2取樣點: 、操作人員無菌性檢查取樣點：操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位。 、

13、無菌灌裝區(qū)無菌性檢查取樣點：其取樣重點為無菌灌裝區(qū)內(nèi)墻壁、門、設(shè)備表面以 及操作人員可能接觸的各種表面。每次取樣應(yīng)包括：一側(cè)內(nèi)墻壁，無菌灌裝區(qū)內(nèi)門把手，膠 塞清洗機開門螺旋，灌裝機上塞料斗，西林瓶滅菌烘干隧道出口處理瓶轉(zhuǎn)盤，灌裝機控制面 板，物料周轉(zhuǎn)桶、周轉(zhuǎn)托盤等處。 、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測沉降平皿法取樣點：取樣點見附件凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌 裝模擬試驗空氣微生物監(jiān)測沉降平皿取樣點分布圖 、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測浮游菌測試取樣點：按無菌灌裝區(qū)面積等分進行取樣，每個測 試點距離 1米，測試點距內(nèi)墻面 0.5 米，另外在分裝面、膠塞清洗機膠塞出口處、西林瓶滅 菌烘干隧道出口處分別增加一個測試點。 、塵埃

14、粒子監(jiān)測取樣點：按無菌灌裝區(qū)面積等分進行取樣，每個測試點距離1米，測試點距內(nèi)墻面 0.5 米，另外在分裝面、膠塞清洗機膠塞出口處、西林瓶滅菌烘干隧道出口處 分別增加一個測試點。7、模擬灌裝7.1 凍干粉針劑模擬灌裝方法：凍干粉針劑模擬灌裝方法采用將一定量的無菌液體培養(yǎng)基通過灌裝機灌裝于西林瓶中 并進行半壓膠塞，然后在凍干機內(nèi)進行凍干試驗并進行全壓膠塞，壓鋁蓋密封。模擬試驗量 為 5000 瓶。7.2 液體無菌培養(yǎng)基制備方法：將經(jīng)過第3項檢測合格的培養(yǎng)基在配制室內(nèi)按每 30g加1L注射用水的比例配制50L液體培養(yǎng)基備用。7.3 無菌粉針劑模擬灌裝試驗：7.3.1模擬灌裝試驗用西林瓶數(shù)量：按生產(chǎn)工

15、藝要求準備7000支無菌西林瓶。7.3.2模擬灌裝試驗用膠塞數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準備7000枚無菌膠塞。7.3.3模擬灌裝試驗用鋁蓋數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準備7000枚鋁蓋。7.3.4模擬灌裝試驗用周轉(zhuǎn)盤數(shù)量：按生產(chǎn)工藝對周轉(zhuǎn)盤進行清潔消毒，以每只周轉(zhuǎn)盤裝量290 支計算，準備 25 只潔凈周轉(zhuǎn)盤備用。7.3.5 模擬灌裝試驗灌裝量：每支西林瓶灌裝 7ml 液體培養(yǎng)基。7.3.6 液體培養(yǎng)基的除菌過濾：對在配制間配制好的液體培養(yǎng)基按正常生產(chǎn)工藝要求進行除 菌過濾并存放于無菌儲罐內(nèi)。7.3.7 灌裝機灌裝速度：灌裝機灌裝及半壓膠塞速度為 260瓶/分。7.3.8 模擬灌裝試驗操作流程：按凍干粉針劑

16、生產(chǎn)工藝流程進行。7.3.9 模擬灌裝試驗灌裝過程要求：在進行模擬灌裝試驗時，當灌裝進行至一半時，使設(shè)備 空轉(zhuǎn)一小時以上再繼續(xù)進行模擬灌裝試驗，完成剩余的試驗制品的灌裝。7.3.10 根據(jù) 5.1 項及 6項要求，在每臺灌裝機分裝完成 500瓶時，隨機抽取未分裝的西林瓶及膠塞 10 枚供檢測使用。7.3.11 凍干模擬試驗：培養(yǎng)基灌裝半壓膠塞以后，將半壓膠塞的樣品瓶轉(zhuǎn)移到凍干機內(nèi)，進行凍干的模擬試驗。試驗中，冷凍溫度不得低于3C。凍干時間設(shè)定為24小時，抽真空、全壓塞后按生產(chǎn)工藝要求進行鋁蓋密封作業(yè)。至此供試品已全部制備完成。7.3.12 取樣原則：由于培養(yǎng)基灌裝試驗分為兩個階段進行，因此將全

17、部樣品分為四個不同1-1 ”、“1-2”、“2-1”、時間段進行樣品標示，即第一階段灌裝試驗開始時、第一階段灌裝試驗結(jié)束時、第二階段灌 裝試驗開始時、第二階段灌裝試驗結(jié)束時四個時間。其標記法為“2-2 ”。標記點為周轉(zhuǎn)盤。8、微生物培養(yǎng)8.1 陰性對照：在模擬灌裝過程中，使用 20支潔凈試管灌裝 7ml 培養(yǎng)基，密封后進行現(xiàn)場用培養(yǎng)基無 菌性試驗。其 20瓶陰性對照品應(yīng)均不得長菌。8.2 陽性對照：為確認無菌灌裝容器中培養(yǎng)基的促菌生產(chǎn)能力， 取低濃度菌接種于進行挑戰(zhàn)性陽性試驗 用的4支對照試管中，2瓶接種濃度100個微生物/0.1ml的枯草桿菌芽抱；另2瓶接種濃 度100個微生物 /0.1ml

18、 的白色念珠菌。接種后將接種枯草桿菌芽抱的西林瓶放于 3035C下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的西林瓶放于 2025°C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少需有1支容器被證實有菌生產(chǎn)。如 2 個容器內(nèi)均沒有菌增殖，則應(yīng)在確認試驗操作有誤后，重復(fù)試驗1 次，此次試驗應(yīng)在 2 個容器內(nèi)均有菌生產(chǎn)的情況。8.3 試驗樣品培養(yǎng)：模擬灌裝生產(chǎn)的全部樣品在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，先在較低溫度（2025C）下培養(yǎng)7天，然后在較高溫度（3035C）下培養(yǎng)7天，較低溫度與較高溫度一般相差 10C。 在第三天和第七天之間至少觀察培養(yǎng)基灌裝品的微生物的生產(chǎn)情況一次， 并且在檢測期間的 最后一天至少再觀察一次， 并對污染的瓶中的微生物進行總結(jié)其特點。 若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)明確記錄樣品號及數(shù)量，同時應(yīng)檢查鋁蓋、膠塞的密封情況;若有破損應(yīng)記錄并檢查其破損原因。 對于微生物污染的樣品應(yīng)進行鑒別試驗， 鑒別的內(nèi)容至少應(yīng)包括菌落、 細胞形態(tài)學(xué)及革蘭染 色特性等。9、試驗結(jié)果評價評價無菌模擬灌裝試驗結(jié)果的主要指標之一是微生物污染水平， 如果試驗結(jié)果證明其污 染水平超過規(guī)定的合格限度（參見第 2 項規(guī)定），則應(yīng)立即停止生產(chǎn)，調(diào)查并記錄污染產(chǎn)生 的原因。在調(diào)查結(jié)束并采用相應(yīng)的措施后應(yīng)重