ICHQB分析方法驗證

1、Q2B分析方法驗證方法學(xué)簡介ICH 指南“關(guān)于分析方法驗證的術(shù)語”闡述了分析方法驗證中應(yīng)考慮的項目，本文件是 對 Q2A 的補充，其目的是對每一種分析方法的各種驗證項目提供指導(dǎo)和建議。在某些情況 下（如專屬性），為了確保原料藥和制劑的質(zhì)量，應(yīng)對一些綜合起來的分析方法的總體能力 進行研究。另外，文件對在新藥申請中必須要遞交的資料作了指導(dǎo)。所有驗證中收集的相關(guān)數(shù)據(jù)和驗證項目的計算公式都應(yīng)遞交并進行適當?shù)挠懻摗１局改衔刺岬降姆椒ǎ?也可應(yīng)用和采納。 申報者的責任應(yīng)是選擇最適合他們產(chǎn)品的驗證 方法和方案。但要切記，分析方法驗證的主要目的是證明其適合于預(yù)期目的。對于生物技 術(shù)產(chǎn)品和生物制品，由于它們的復(fù)

2、雜特性，在某些情況下，其分析方法的驗證可能與本文 中提到的方法不同。在整個方法學(xué)驗證研究過程中， 必須使用已完全鑒定并標示純度的參考物質(zhì)， 其純度要 求取決于預(yù)期用途。與Q2A 樣，為清楚起見，本文在各獨立的章節(jié)中考慮了不同的驗證項目，這些章節(jié)的 排列反映了建立和評估一種分析方法的過程。事實上在進行實驗設(shè)計時， 一些適當?shù)尿炞C項目通常可以同時考慮， 以對分析方法的能 力提供合理、全面的了解，如專屬性、線性、范圍、準確度和精密度。1 專屬性在鑒別檢查、雜質(zhì)和含量測定的方法學(xué)驗證中應(yīng)進行專屬性研究，證明專屬性的方法 取決于分析方法的預(yù)期目的。，在此情況般一種分析方法不太可能對某一特定的被分析物具有

3、專屬性（完全鑒定）下，建議采用兩種或兩種以上的分析方法以達到能鑒定的水平。11 鑒別合適的鑒別試驗應(yīng)能區(qū)別出可能存在結(jié)構(gòu)相似的化合物?？梢酝ㄟ^與已知參考物質(zhì)比較，從含有被分析物的樣品中得到的正結(jié)果和不含被分析物的樣品中得到的負結(jié)果來確定。此外，鑒別試驗也可以取與被測物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)的物質(zhì)來試驗而得不到正反應(yīng)來證實。在考慮可能會造成干擾的前提下，應(yīng)根據(jù)合理科學(xué)的判斷來選擇可能存在的干擾物。12 含量和雜質(zhì)測定在色譜方法中， 應(yīng)用典型的色譜圖來證明專屬性， 并在圖上恰當?shù)貥顺雒恳环N成分， 其 他分離技術(shù)也應(yīng)如此。在色譜方法中， 應(yīng)在一定程度上考察關(guān)鍵性的分離。 對關(guān)鍵性分離， 可用兩個洗脫程度 最

4、接近的化合物的分離度來證明具有專屬性。當用非專屬性方法測定含量， 可用其他輔助性的分析方法來證實整個方法的專屬性， 例 如：用滴定法來測定放行原料藥的含量，可結(jié)合用合適的雜質(zhì)檢查方法。下述方法均適用于含量和雜質(zhì)測定： 121 可以得到雜質(zhì)的情況對含量測定來說， 專屬性應(yīng)包括提供被分析物在雜質(zhì)和 （或） 輔料存在時能被區(qū)分的證 明，實際操作中可以在純物質(zhì)（原料或制劑）中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，與未加雜質(zhì)或 輔料的樣品測定結(jié)果比較，以證明其含量測定結(jié)果不受這些物質(zhì)的影響。對雜質(zhì)檢查來說，通過加入含有一定量雜質(zhì)的原料藥或制劑，證明各雜質(zhì)之間能分離， 并也能與樣品矩陣中其他組分分離。122 無法得到雜

5、質(zhì)的情況如果雜質(zhì)或降解物的對照品不能得到， 專屬性可以通過將含一定量的雜質(zhì)或降解物的樣 品測定結(jié)果與另一種成熟的方法測定結(jié)果比較，如藥典方法或經(jīng)驗證的其他方法（獨立的 方法）進行比較來證實。必要時，應(yīng)包括放置在強制降解試驗條件下，即光、熱、濕、酸 堿水解及氧化條件下的樣品的測定。對于含量測定，需要比較兩種方法的結(jié)果。對于雜質(zhì)檢查，要比較雜質(zhì)檔案。峰純度檢驗是很有用的，它顯示被測物色譜峰是單個還是多個成分（如二極管陣列、 質(zhì)譜）。2線性線性是在分析方法的范圍內(nèi) （見章節(jié) 3）對方法進行評價?？捎盟ㄗh的分析方法，直 接對原料藥（用標準儲備溶液稀釋）和（或）對分別稱取制劑組分的混合物進行測定，以

6、研究其線性。后者應(yīng)在方法的范圍內(nèi)進行研究。線性關(guān)系應(yīng)以信號對被分析物的濃度或含量做圖，根據(jù)圖形是否呈線性進行評價。如 果有線性關(guān)系，可用適當?shù)慕y(tǒng)計方法評價試驗結(jié)果，如通過最小二乘法進行線性回歸計算。在某些情況下為使分析含量和樣品濃度呈線性關(guān)系，在回歸分析前應(yīng)對測試數(shù)據(jù)進行數(shù)學(xué) 轉(zhuǎn)換。由線性回歸評估所測得的數(shù)據(jù)本身又有助于精確地評價線性的程度。遞交資料中應(yīng)含相關(guān)系數(shù)、y軸上的截距、回歸曲線的斜率、剩余方差，還應(yīng)包括數(shù)據(jù) 圖表。另外，分析實際數(shù)據(jù)點與回歸曲線的偏差也有助于對線性作評價。一些分析方法，如免疫測定法，在任何轉(zhuǎn)換后，均不能證明呈線性，在這種情況下， 分析的響應(yīng)值應(yīng)用樣品中被分析物的濃度（

7、數(shù)量）的適當函數(shù)來表示。為建立線性，建議至少用 5 個濃度。若用其他方法則應(yīng)證明其合理性。3 范圍特定的范圍一般是從線性研究中得到的，它依賴于分析方法的應(yīng)用目的。確定范圍的 方法是：樣品中含有被分析物的量在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)或在范圍末端，該分析方法均 能獲得良好的線性、精密度和準確度。以下是應(yīng)考慮的最小規(guī)定范圍：80%120%；對原料藥或成品藥（制劑）的含量測定；一般應(yīng)在測試濃度的對含量均勻度檢查：應(yīng)至少在測試濃度的70%130%之內(nèi)，超出此范圍，應(yīng)有正當理 由，主要是根據(jù)劑型的特點（如定量吸入劑） 對于溶出度試驗，應(yīng)為規(guī)定范圍的± 20%，例如：如果是控釋制劑，規(guī)定 1 小時后達

8、到 20%， 24 小時達到 90%，它的驗證范圍應(yīng)為標示量的 0！110%；對于雜質(zhì)測定，應(yīng)為雜質(zhì)的報告水平至標準規(guī)定的120%。對已知有異常功效的、有 毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì)，其檢測限度和定量限度應(yīng)與該雜質(zhì)必須被控制的水 平相當。注意：在研制階段進行雜質(zhì)檢查方法驗證時，有必要根據(jù)建議（可能）的 限度來考慮范圍；如果用一個試驗同時進行含量測定和純度檢查，且僅使用100%的標準品，線性范圍 應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報告水平（見相應(yīng) ICH 指南“新原料藥中的雜質(zhì)”和“新制劑中的雜質(zhì)”中“批雜質(zhì)含量的報告”章節(jié)）至含量指標的120%。4 準確度應(yīng)在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)建立準確度。41 含量 411 原料

9、藥列幾種方法可用于測定準確度：a)b)用該分析方法去測定已知純度的被分析物（如參照物質(zhì)） 將建議采用的分析方法的結(jié)果與另一種已完全驗證的分析方法的結(jié)果比較，后者的準確度是規(guī)定的和（或）是已定義的（獨立的方法，見節(jié)）c)準確度可以在精密度、線性和專屬性建立后推論而得。412 制劑a)b)列幾種方法可用于測定準確度：用該分析方法去測定按處方量制成的混合物， 其中已加入了已知量的待測定的原料藥；在不能獲得制劑所有組分的情況下， 可以接受的方法是可以將已知量的被分析物加入到制劑中，或者將測得結(jié)果與另一種已完全驗證的分析方法的結(jié)果比較，后 者的準確度是已知的（獨立的方法，見節(jié)）c） 準確度可以在精密度、

10、線性和專屬性建立后推論而得。42 雜質(zhì)（定量）準確度應(yīng)使用在樣品中（原料藥 / 制劑）加入已知量雜質(zhì)的方式來評價。在不能獲得含有某些雜質(zhì)和 （或） 降解產(chǎn)物的樣品的情況下， 可以考慮與其它獨立的方 法（見節(jié)）測得的結(jié)果比較?？梢允褂迷纤幍捻憫?yīng)因子。應(yīng)明確如何測定單個或總的雜質(zhì)， 如：相對于主要被分析物所占的重量百分比或面積百 分比。43 數(shù)據(jù)要求準確度的評價需要對至少能涵蓋所規(guī)定的線性范圍的 3 種濃度，至少測定 9 次（如按完 整分析步驟對 3 種濃度分別測定 3 次）。準確度可通過在樣品中加入已知量的被分析物測得的百分回收率或平均值與真實值的 差異及其置信區(qū)間來報告。5 精密度含量測定和

11、雜質(zhì)定量測定的驗證均包括對精密度的研究。51 重復(fù)性重復(fù)性應(yīng)使用以下方法之一評定：a） 在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)至少測定 9次（如 3種濃度/ 每種濃度重復(fù)測定 3次）；b） 在 100%的測試濃度，至少測定 6 次。52 中間精密度中間精密度的考察程度應(yīng)根據(jù)方法使用的環(huán)境而定， 申請者應(yīng)確定隨機事件對分析方法 精密度的影響。需研究的典型變化包括：日期、分析人員、儀器等，沒有必要逐個考察每 個因素。鼓勵使用試驗設(shè)計（矩陣法）重現(xiàn)性通過試驗室之間的試驗來評價，如果方法需要標準化，如收載到藥典中的方法，53 重現(xiàn)性則應(yīng)考慮重現(xiàn)性。這些資料不是上市申請文檔的一部分。54 數(shù)據(jù)要求在每一種精密度研究中都

12、必須報告標準偏差、相對標準偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間。6檢測限根據(jù)分析方法是否采用非儀器分析還是儀器分析，可用幾種方法來確定檢測限，除了面所列的方法外其他的方法也可能被接受。61 根據(jù)信噪比并以能準確測得被分析直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測限的測定是通過對一系列已知濃度分析物的樣品進行分析， 物的最小水平來建立。62 根據(jù)信噪比確定被該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。信噪比的測定是通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測試信號， 分析物可被可靠地檢測的最小濃度，當信噪比在 3： 1或 2： 1時的檢測限通常是可接受的。63 根據(jù)響應(yīng)值的標準差和斜率檢測限

13、（DL）表示為:式中：C：響應(yīng)值的標準偏差S :校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來估算，C的值可由多種途徑估算。如: 631 根據(jù)空白的標準偏差通過幾份空白樣品的分析， 并計算其響應(yīng)值的標準偏差， 以測定出分析背景響應(yīng)值的大 小。通過對含有DL范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來研究其標準曲線，回歸線的剩余標準偏差632 根據(jù)校正曲線或回歸線的 y 軸截距標準差都可作為標準差。64 數(shù)據(jù)要求必須同時提供檢測限和測定檢測限的方法。如果DL是根據(jù)直觀評估或信噪比得來的, 提供相關(guān)證明的色譜圖是可接受的。如通過計算或外推法得到檢測限的估算值，可對一系列接近或等于檢測限樣品的逐個 分析來驗證這一估算值

14、。7 定量限根據(jù)檢測方法是用非儀器分析還是儀器分析，可用幾種方法來測定定量限，除了下面 列出的方法外，其他方法也是可接受的。71 根據(jù)直觀評價確定的能被定直觀評價既可用于非儀器的分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限的測定一般通過對一系列含有已知濃度被分析物的樣品進行分析， 量測定的最小量，其測定結(jié)果應(yīng)有可接受的準確度和精密度。72 根據(jù)信噪比來確該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。信噪比的測定是通過比較含有已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測定信號，定被測物能夠準確定量的最小濃度。典型信噪比為10： 1。73 根據(jù)響應(yīng)值的標準偏差和斜率定量限度 （QL）表示為:式中：C：響應(yīng)值的標準偏差

15、S :校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來估算，C值的估算可由多種途徑得到。如:通過幾份空白樣品的分析， 并計算其響應(yīng)值的標準偏差， 以測定出分析背景響應(yīng)值的大731 根據(jù)空白的標準偏差小。732 根據(jù)校正曲線校正曲線的研究應(yīng)通過對幾份含有 QL水平被分析物的樣品的測試來進行?；貧w線的剩 余標準偏差或回收線的 y 軸截距標準偏差都可作為標準偏差。74 數(shù)據(jù)要求應(yīng)提供定量限及其測定方法?？赏ㄟ^分析一系列接近或等于定量限的樣品來驗證這一限度。8 耐用性在方法的開發(fā)階段應(yīng)對耐用性進行評估，它取決于所研究的分析方法的類型，表明在 方法參數(shù)范圍內(nèi)故意的變化下分析方法的可靠性。如果測量結(jié)果表明對分析條件的變化是敏感的，那么該分析條件就應(yīng)適當控制或在方，以確法中預(yù)先聲明。耐用性評估的結(jié)果建立了一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)（如分離度試驗） 保在任何時候使用該分析方法都是有效的。典型變化的例子：分析溶液的穩(wěn)定性， 提取時間。在