高效液相色譜法測定馬來酸桂哌齊特注射液有關(guān)物質(zhì)的含量 - 李理宇-

1、CBZ 與P B 所得值呈正態(tài)分布,其中CBZ 經(jīng)單測檢驗(yàn)的Pearso n r =0.881,P =0.000,直線回歸方程為:HP LC =1.852+0.725 F PIA ;PB 經(jīng)單測檢驗(yàn)的P earson r =0.984,P =0.000,直線回歸方程為:H P LC =-2.460+1.083 FPI A 。CBZ 與P B 2組測定值的散點(diǎn)圖分別見圖1,圖2 。圖1 CBZ 經(jīng)HPLC 、FPIA 法測定后的散點(diǎn)圖Fig 1 Scatterplot of CBZ by H PLC 、FPIA m ethod圖2 PB 經(jīng)HPLC 、FPIA 法測定后的散點(diǎn)圖Fig 2 Sca

2、tterplot of PB by H PL C 、FPIA meth od作者簡介李理宇,女,碩士,電話:010-*,E -mail:w ox ihuandah ai 4 討論本實(shí)驗(yàn)中CBZ 與P B 采用同一種H PL C 測定方法1-3,為文獻(xiàn)中最常采用的方法,適用性強(qiáng),重復(fù)性好。本實(shí)驗(yàn)所選數(shù)據(jù)均是患者服藥后的穩(wěn)態(tài)谷濃度,并且所有濃度均能夠覆蓋臨床監(jiān)測的所有低、中、高濃度范圍,這種選擇方法避免數(shù)據(jù)只集中在某一較窄的濃度范圍之內(nèi),使得統(tǒng)計(jì)結(jié)果能夠很好地解釋數(shù)據(jù)的變化趨勢。直線回歸分析結(jié)果顯示,無論是CBZ 還是P B,F PIA 法測定結(jié)果并不是單純地大于或小于HP LC 法測定結(jié)果。根據(jù)

3、統(tǒng)計(jì)計(jì)算公式,CBZ 濃度值從理論上計(jì)算,在小于6.73mg L -1之前,H PL C 法測定結(jié)果高于F PIA 法,在大于6.73mg L-1之后,則低于F PIA 法,與本實(shí)驗(yàn)實(shí)際測定結(jié)果總體吻合。同樣,PB 濃度值從理論計(jì)算,在小于9.64mg L -1之前,HP LC 法測定結(jié)果低于F PIA 法,在大于29.64mg L-1之后,則高于F PIA 法,而在9.6429.64mg L -1之間時(shí),2種測定方法所得的結(jié)果基本接近,與本實(shí)驗(yàn)實(shí)際測定結(jié)果也總體吻合。有國外文獻(xiàn)報(bào)道測定卡馬西平和苯巴比妥F PIA 與HP LC 比較結(jié)果,FP IA 法均比H PL C 法測定結(jié)果高4。國內(nèi)文

4、獻(xiàn)所得結(jié)果與國外文獻(xiàn)一致5。但這些文獻(xiàn)所收集的臨床樣本其濃度范圍較窄,均集中在中、低濃度范圍,而在高濃度區(qū)采集的樣本量少,使得統(tǒng)計(jì)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)有差別。本實(shí)驗(yàn)對卡馬西平2種方法測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算,2組濃度之間差異無顯著性(P =0.840,這主要與卡馬西平整體血藥濃度范圍窄有關(guān)。而苯巴比妥的2組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算時(shí),差異具顯著性(P =0.044,是否有臨床意義,應(yīng)該針對不同方法進(jìn)行臨床療效的評價(jià)。參考文獻(xiàn):1 陳秋虹,何林,曾明輝,等.H PLC 法同時(shí)測定血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的濃度J.西北藥學(xué)雜志,2001,16(1:3-4.2 陳希賢,呂建新,李東.高效液相色譜法同時(shí)測定人血清

5、中茶堿與苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平的含量J.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,1994,14(9:389-391.3 趙慧,邱雯,焦海勝,等.反相高效液相色譜法同時(shí)測定苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的血藥濃度J.衛(wèi)生職業(yè)教育,2006,24(3:118-119.4 W ilimow sk a J ,Gom llka E,Pasich A,et al .Comparis on of flu -orescence polarization imm unoassay an d high performance liq -uid chr om atography for determin ation of carbama

6、z epine con -centration in blood of poisoned patientsJ Przegl Lek ,2005,62(6:595-598.5 焦正,趙志剛,施孝金,等.比較H PLC 法和FPIA 法測定人血清中卡馬西平的血藥濃度J.中國臨床藥理學(xué)雜志,2004,20(4:291-294.收稿日期2009-11-05高效液相色譜法測定馬來酸桂哌齊特注射液有關(guān)物質(zhì)的含量李理宇1,張波1,2,張東娜1,丁建新1,王洪權(quán)1 (1.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100071;2.北京軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所,北京100071摘要

7、 目的:建立以H PL C 法測定馬來酸桂哌齊特注射液有關(guān)物質(zhì)的含量的測定方法。方法:色譜柱為迪馬-ODS,流動相為乙腈-0.05mo l L -1磷酸氫二鈉溶液(40 60,檢測波長230nm,流速為1.0mL min -1,進(jìn)樣量為20 L 。結(jié)果:馬來酸桂哌齊特在200800mg L -1(r =0.9999范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,有關(guān)物質(zhì)與主峰分離良好,3批樣品中有關(guān)物質(zhì)含量均小于1%。結(jié)論:本方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于該制劑的有關(guān)物質(zhì)的含量測定。關(guān)鍵詞 高效液相色譜法;馬來酸桂哌齊特注射液;有關(guān)物質(zhì)中圖分類號R 927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號1001-5213(20101

8、4-1244-03馬來酸桂哌齊特為新一代的哌嗪類鈣拮抗劑,對心腦血管類疾病、顱腦損傷及其他外周血管性疾病等均有良好療效1。本實(shí)驗(yàn)室已自行合成其原料,并制成注射劑。目前,尚未見馬來酸桂哌齊特注射液有關(guān)物質(zhì)分析的文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定有關(guān)物質(zhì)含量,方法操作簡單、專屬性強(qiáng)。1 材料Water s -2695高效液相色譜儀、2487紫外檢測器(均為美國沃特斯公司。馬來酸桂哌齊特注射液(規(guī)格:10mL 320mg ,本實(shí)驗(yàn)室提供,批號090401,090415,090429;馬來酸桂哌齊特對照品(純度:99.6%,本實(shí)驗(yàn)室,批號081101;乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。2 方法與結(jié)

9、果2.1 色譜條件 色譜柱:迪馬-O DS(250mm 4.60mm,5 m;檢測波長:230nm;流速:1mL min -1;流動相:乙腈-0.05mo l L -1磷酸氫二鈉溶液(40 60;進(jìn)樣量:20 L 。在此條件下,取 2.2 項(xiàng)下的溶液進(jìn)樣測定,理論塔板數(shù)按馬來酸桂哌齊特峰計(jì)算不低于5000,主成分峰與雜質(zhì)峰的分離度符合要求,空白輔料對測定沒有干擾,專屬性良好。見圖1。2.2 溶液的制備 溶液配制均嚴(yán)格避光操作。2.2.1 對照品溶液 精密稱取對照品適量,加流動相溶解并稀釋制成0.5g L -1的溶液,搖勻,作為對照品溶液。2.2.2 供試品溶液 取樣品溶液適量,加流動相溶解并稀

10、釋制成與對照品相同濃度的溶液,搖勻,作為供試品溶液。2.2.3 空白樣品溶液 取按處方比例及制備工藝中不含主藥的空白輔料適量,置100mL 棕色量瓶中,加流動相適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成空白樣品溶液。2.3 線性關(guān)系考察 避光操作。精密稱取馬來酸桂哌齊特對照品50mg,置50mL 棕色量瓶中,用流動相配制成1000mg L -1的貯備液。精密量取貯備液加流動相制成200,300,400,500,600,700,800mg L -1的溶液,分別依次注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以溶液濃度(C 為橫坐標(biāo),峰面積(A 為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行回歸處理,得回歸方程:A =23353C +868

11、59,r =0.9999。結(jié)果表明馬來酸桂哌齊特在200800mg L -1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4 專屬性試驗(yàn)2.4.1 高溫破壞 取馬來酸桂哌齊特注射液(批號0904293支,于105 烘箱中放置6h ,冷卻,加入流動相溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度約為0.32g L -1的溶液,按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。見圖1。2.4.2 酸破壞 取馬來酸桂哌齊特注射液(批號0904293支,置100mL 燒瓶中,加1mol L -1的鹽酸20mL ,加熱回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1氫氧化鈉中和后,加流動相稀釋至刻度,按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定

12、,記錄色譜圖。見圖1。2.4.3 堿破壞 取馬來酸桂哌齊特注射液(批號0904293支,置100mL 燒瓶中,加1mol L -1的氫氧化鈉20mL ,加熱回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1鹽酸中和后,加流動相稀釋至刻度,按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。見圖1。 圖1 高效液相色譜圖A.空白輔料;B.對照品;C.酸破壞后樣品;D.堿破壞后樣品;E.氧化破壞后樣品;F.高溫破壞后樣品;G.中間體圖;H.異構(gòu)體圖;1-馬來酸桂哌齊特峰;2-異構(gòu)體峰Fig 1 H PLC ch romatogramsA.b lan k excipients;B.tes

13、 t sam ple;C.sample undergoing acid destruction;D.sam ple under goin g alkali des tru ction;E.sample und ergoing ox -ygen destru ction ;F.sample un dergoing high tem perature destruction;G.intermediates;H.isomer;1-cinepazide m aleate;2-is omer2.4.4 氧化破壞 取馬來酸桂哌齊特注射液(批號0904293支,置100mL 燒瓶中,加30%過氧化氫溶液20

14、mL ,加熱回流2h,量取3mL ,置100mL 量瓶中,用1mo l L -1鹽酸中和后,加流動相稀釋至刻度,按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。見圖1。由圖1可知,各項(xiàng)專屬性試驗(yàn)中,馬來酸桂哌齊特主峰與異構(gòu)體及其他雜質(zhì)峰均分離很好。2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱取 2.2 項(xiàng)下對照品5份,用流動相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為0.5g L -1的溶液。按 2.1 項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測定6次,記錄色譜圖。結(jié)果,RSD 為0.24%。2.6 最低檢測限考察 取馬來酸桂哌齊特對照品加流動相逐級稀釋、測定,按信噪比為3(S/N =3作為最低檢測限,測得馬來酸桂哌齊特(以桂哌齊特計(jì)的檢出限為1.6

15、gL -1。2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在室溫下,取樣品溶液(批號090429適量分別置無色和棕色量瓶中,在0,1,2,3,4,6h 分別進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。結(jié)果,棕色量瓶中的供試品溶液峰面積的RSD 為0.19%,無色量瓶中的供試品溶液峰面積的RSD 為3.98%。表明對照品溶液在避光條件下6h 內(nèi)穩(wěn)定。2.8 馬來酸桂哌齊特注射液中有關(guān)物質(zhì)的含量測定 避光操作。取3批樣品,每份吸取約1mL ,置于100mL 棕色量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;精密量取供試品1mL ,置于100mL 棕色量瓶中,加流動相稀釋至刻度,作為1%的自身對照溶液。精密吸取對照溶液20 L ,進(jìn)樣測

16、定,調(diào)節(jié)儀器檢測靈敏度,使主成分峰的峰高約為記錄儀滿量程的20%;再精密量取樣品溶液和對照溶液各20 L ,進(jìn)樣測定,記錄色譜至主成分峰保留時(shí)間的2.5倍,以自身對照法2檢測樣品的有關(guān)物質(zhì),以對照溶液中的桂哌齊特峰計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的量。測定結(jié)果詳見表1。表1 有關(guān)物質(zhì)含量測定結(jié)果T ab 1 Content s o f the related substances批號異構(gòu)體含量/%其他雜質(zhì)含量/%0904010.0570.730904150.0570.810904290.0550.75由表1可知,3批馬來酸桂哌齊特注射液中有關(guān)物質(zhì):異構(gòu)體平均含量為0.056%,其他雜質(zhì)含量含量為0.76%。3 討

17、論馬來酸桂哌齊特注射液對光不穩(wěn)定,取本品3批,橫放置于光櫥內(nèi)離日光燈5cm 處照射,光照度4500L x 。于5,10d 后取樣,進(jìn)行外觀及有關(guān)物質(zhì)檢查,光照5,10d 與0d 比較,外觀顏色基本無變化,有關(guān)物質(zhì)增加。結(jié)果表明,馬來酸桂哌齊特對光不穩(wěn)定,雜質(zhì)的量有所增加,主藥含量下降,并結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)避光操作和避光保存。參考文獻(xiàn):1 趙平鴿.心腦血管病新藥 馬來酸桂哌齊特J.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué),2003,8(5:320-321.2 中國藥典.二部S.2005:附錄28,172.收稿日期2009-12-16作者簡介周麗,女,碩士,藥師,電話:0551-*,E -mail:cheriling 1

18、6正交試驗(yàn)法優(yōu)選紅旱蓮提取工藝周麗1,周亞球2,王效山2 (1.安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,安徽合肥230031;2.安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,安徽合肥230031摘要 目的:探討紅旱蓮主要有效成分黃酮類化合物的提取工藝。方法:采用正交試驗(yàn)法,以總黃酮、金絲桃苷的含量為評價(jià)指標(biāo),以乙醇濃度、溶媒用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素,對紅旱蓮乙醇回流提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果:最佳提取工藝為:10倍量80%乙醇,回流提取2次,每次3h 。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理,測定方法可行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。關(guān)鍵詞 紅旱蓮;總黃酮;蘆丁;金絲桃苷;提取工藝;正交試驗(yàn)中圖分類號R 943 文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號1001-521

19、3(201014-1246-03紅旱蓮,別名湖南連翹、黃花劉寄奴、旱蓮草等1-2,為藤黃科金絲桃屬植物黃海棠H y p er icum ascy r on L .的全草,其味微苦,性寒,歸肝經(jīng),具有解毒消腫,涼血止血之功效。以蘆丁、金絲桃苷為代表的黃酮類成分為紅旱蓮的主要有效成分3。本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法以乙醇濃度、溶媒用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素,優(yōu)選紅旱蓮乙醇回流的最佳提取工藝,為確定紅旱蓮的提取方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料6010型紫外可見分光光度計(jì)(安捷倫科技上海分析儀器有限公司;Water s 600型高效液相色譜儀及Water s 2487型檢測器(美國Water s 公司;依利

20、特C 18色譜柱(5 m,4.6mm 250mm,大連依利特分析儀器有限公司。紅旱蓮,購自合肥市和義堂中藥材飲片公司,產(chǎn)地為巢湖,由安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院鑒定教研室潘魯敏副教授鑒定;蘆丁對照品、金絲桃苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號分別為10080-200306、111521-200308;甲醇、乙腈為色譜純;其他試劑為分析純;水為自制注射用水。2 方法與結(jié)果2.1 紅旱蓮總黃酮含量測定2.1.1 三氯化鋁比色法測定條件4 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1mL 分別置25mL 量瓶中,加水至5mL ,準(zhǔn)確加入pH 4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液5mL 和0.1mo l L -1三氯化鋁3mL

21、,加水稀釋至刻度,搖勻,放置40min,410nm 測其吸光度,采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品含量。2.1.2 對照品溶液制備 精密稱定蘆丁對照品15.86mg ,加30mL 乙醇使溶解,加水定容至50mL ,即得每1mL 含蘆丁0.3172mg 的對照品溶液。2.1.3 供試品溶液制備 稱取紅旱蓮粉末(40目約1.0g ,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50mL,超聲提取1h,放冷,再稱定,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,即得供試品溶液。2.1.4 樣品含量測定 取紅旱蓮藥材3份,按供試品溶液制備方法制備樣品液,依法操作并顯色,測定吸光度,計(jì)算紅旱蓮藥材中總黃酮的含量,結(jié)果3份樣品的總黃酮含量分別為26.96,27.54,27.95mg g