丹參水溶性成分的提取與純化

1、33重慶中山醫(yī)院(400013;33重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院(4000102008年4月5日收稿丹參水溶性成分的提取與純化鄭奇3林琳33覃偉33關(guān)鍵詞:丹參;水溶性成分;提取;純化中圖分類(lèi)號(hào):R28315文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1006-0979(200805-0045-02丹參為唇形科植物丹參Salviz miltiorrhiza Bge 的干燥根及根莖,始載于神農(nóng)本草經(jīng),具有祛瘀止痛,活血通經(jīng),清心除煩之功效。它是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常用藥物之一,具有悠久的臨床應(yīng)用歷史。近幾十年來(lái),采用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法結(jié)合化學(xué)分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等多學(xué)科的技術(shù)手段對(duì)丹參進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究,取得了大量新的認(rèn)識(shí)和實(shí)

2、驗(yàn)結(jié)果,并開(kāi)發(fā)出一系列療效良好的臨床應(yīng)用藥物。1丹參水溶性成分對(duì)丹參化學(xué)及藥理學(xué)研究表明1:丹參中的有效成分有兩類(lèi),一類(lèi)是脂溶性丹參酮類(lèi)化合物,如丹參酮A 、隱丹參酮等;另一類(lèi)是水溶性的丹參酚酸類(lèi)成分。二十世紀(jì)早期的研究主要集中在以丹參酮為代表的脂溶性成分方面,把丹參酮A 作為唯一的藥效活性指標(biāo)成分。但越來(lái)越多的研究表明:丹參中水溶性成分具有多種多樣的生理活性。丹參水溶性主要有效成分為丹參素(dan shen su ,DSS 、原兒茶醛(protocatechuic aldehyde ,PAH 、原兒茶酸(protocatechuic acid ,PA 、迷迭香酸(Rosmarinic aci

3、d 、紫草酸(lithospermic acid 、丹參酸A 、B 、C 、D 、E 、F 、G 等。丹參素化學(xué)名為-3,4-二羥苯乳酸(-3,4-di 2hydroxybenyllactic acid ,是各種丹酚酸的基本化學(xué)結(jié)構(gòu),丹參素能擴(kuò)張腸系膜微動(dòng)脈,具有抗血小板聚集抗血栓形成促進(jìn)纖維蛋白降解及抗心肌缺血作用2。原兒茶醛能顯著增加冠狀動(dòng)脈血流量,對(duì)抗ADP 所致血小板聚集,并有廣譜抗菌作用。丹酚酸A (salvianolic acidA 是一分子丹參素與兩分子咖啡酸縮合而成,具有保護(hù)肝功能、抗糖尿型腎病等作用。丹酚酸B (salvianolic acidB 為三分子丹參素與一分子咖啡酸

4、縮合而成,具有抗心血管疾病、抗神經(jīng)性疾病等作用。丹酚酸C (salvianolic acidC 則為二分子丹參素縮合而成。丹參水溶性成分中的迷迭香酸,也是由一分子丹參素和一分子咖啡酸縮合而成,它通過(guò)清除或降低超氧化物歧化酶和過(guò)氧化酶的作用而起到護(hù)肝的作用3。2提取方法211水煎煮法:丹參的提取方法最常用的是水煎煮法。郝淑清等4采取不同時(shí)間組合煎煮丹參,測(cè)定水溶性成分的含量,表明115h 和1h 組合測(cè)得含量最高。唐昌炯在此基礎(chǔ)上改進(jìn)了提取工藝,在其它提取工藝基本相同的情況下,將丹參在用水提取前進(jìn)行酸堿處理,使丹參素的回收率有了明顯提高,可達(dá)216%5。212索氏提取:張文婷6等采用適量藥材粉末

5、,精密稱(chēng)定,以水作溶劑索氏提取16h 放冷、濾過(guò)、定容,測(cè)定其含量。陳彥7等采用了超聲、煎煮、索氏提取三種處理方法,采用高效液相色譜法,測(cè)定丹參藥材中丹參素的含量。結(jié)果表明,索氏提取可促進(jìn)水解完全,使測(cè)得的丹參素含量最高。索氏提取的方法如下:精密稱(chēng)取丹參粉末(過(guò)60目1g ,加水100ml 于圓底燒瓶中,用索氏提取器提取1618h 。213超聲提取:由于超聲提取法在藥材的前處理中普遍應(yīng)用,故陳彥7等采用超聲提取20min ,提取3次,溶劑為水(120提取。劉重芳8等超聲提取丹參素的工藝為50HZ ,1h ,12倍量。214回流提取:劉重芳8等以丹參素、原兒茶醛、丹參酮A 為指標(biāo)提取量綜合考慮,

6、丹參如采用回流提取法,以50%乙醇10倍量回流2次,每次115h 的方法較好。215動(dòng)態(tài)溫浸法:劉重芳8等經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明,采用動(dòng)態(tài)溫浸法提取,以90,20倍量水,提取3h 的方法為好。216滲漉法:劉重芳8等以水為溶劑,滲漉液收集24倍量的指標(biāo)成分含量高。且冰凍的效果比不冰凍的好,即丹參粗粉,加適量的水,使丹參被水浸沒(méi),置冰箱冷凍。待結(jié)冰后取出,冰溶化后裝滲漉筒,收集滲出液。劉重芳8等經(jīng)上述提取方法的比較,以水溶性成分為指標(biāo),采用傳統(tǒng)的水煎法的提取效率較好。3純化311醇沉:醇沉工藝在丹參水溶性成分的純化中應(yīng)用廣泛,不同醇沉濃度對(duì)丹參有效成分含量影響也較大,70%醇沉法在沉去大量雜質(zhì)同時(shí),水溶性酚

7、酸損失50%以上,丹參酮A 則損失2/3以上,原兒茶醛亦有損失;60%醇沉法丹參酮A 稍有損失;而50%醇沉法中各有效成分基本不損失9。所以,丹參的第一步醇沉濃度為50%最為適宜。制備復(fù)方丹參注射液時(shí),為了提高澄明度,醇沉濃度可提高到60%。但此工藝仍有較多不足,由于丹參酚酸在水溶液中不穩(wěn)定,在提取時(shí)受熱而易破壞。醇沉造成的損失高達(dá)30%。312醋酸乙酯萃取:張榮泉等10在提取液中,用稀鹽酸調(diào)節(jié)p H =2,用醋酸乙酯萃取4次(分別為藥材原粉的115倍,115倍,112倍,112倍,合并萃取液,回收乙酸乙酯。313大孔樹(shù)脂吸附:周永剛11等采用SIPI905型大孔樹(shù)脂改進(jìn)了丹酚酸B 的純化工藝

8、,具有吸附快,吸附容量大,洗脫率高等優(yōu)點(diǎn),比傳統(tǒng)的水醇法制備工藝具有非常明顯的優(yōu)勢(shì),可以顯著提高丹酚酸B 的收率和純度,而且方法操作簡(jiǎn)單,樹(shù)脂再生簡(jiǎn)便,適合工業(yè)化生產(chǎn),可有利促進(jìn)丹參制542008年5期劑的發(fā)展,具有實(shí)用價(jià)值。王志平12等選用D -101,D -101+,H107,D301,D17的5種大孔樹(shù)脂中,經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明,D301能夠選擇性富集丹參提取液中丹參素和原兒茶醛,使經(jīng)樹(shù)脂處理的丹參水提液出膏率較未經(jīng)樹(shù)脂處理的水提取液降低10倍,固體膏中有效成分的量提高8倍。314高速逆流色譜:高速逆流色譜(HSCCC 是一種基于液-液多級(jí)逆流萃取建立的色譜體系,沒(méi)有固相載體,避免了待分離樣品與固

9、相載體表面產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)而變化和不可逆吸附;高速逆流色譜可以直接純化粗制樣品;尤其適于分離極性較大的組分。顧銘13等用國(guó)產(chǎn)高速逆流色譜分離純化丹參,具有可行性。參考文獻(xiàn)1陳向榮,陸京伯,石汗平1丹參的藥理作用研究新進(jìn)展J 1中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志12001,21(1:44-45.2杜冠華,張均田1丹參水溶性有效成分丹酚酸研究進(jìn)展J 1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床12000120(5:394-398.3趙淑娟,章國(guó)瑛,劉滌等1丹參水溶性酚酸類(lèi)化合物藥理及生物合成途徑研究進(jìn)展J 1中草藥,2004,35(3:341-344.4郝淑清,李靜,等1丹參制劑中酚酸類(lèi)成分的含量測(cè)定J 1中草藥11993;24(10:5275唐

10、昌炯1丹參素提取工藝的探索J 1華西藥學(xué)雜志,1998,13(2:117.6張文婷,壽優(yōu)芳,陳碧蓮,等1丹參水溶性制劑中丹參素和原兒茶醛含量的考察J 1中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志12001;18(4:303-305.7陳彥,賈曉斌,施亞芳,等1不同提取方法測(cè)定丹參藥材中丹參素含量的比較研究J 1江蘇中醫(yī)藥12003,24(6:55-56.8劉重芳,張鈺泉,戴居云,等1丹參不同提取工藝比較J 1中成藥11999,21(8:385-388.9張玲,于宗淵,徐新剛,等1丹參水醇法提取工藝的研究J 1中成藥11995;17(5:1.10張榮泉,王德仁,張蓉,等1丹參水溶性成分提取工藝研究J 1中藥材1200

11、1,24(11:818-819.11周永剛,李翔,趙亮,等1大孔樹(shù)脂吸附法提取丹酚酸B 的應(yīng)用研究1藥學(xué)實(shí)踐雜志12003,21(6:339-341.12王志平,劉玉強(qiáng),范晉勇,等1大孔吸附樹(shù)脂富集丹參中水溶性成分的研究1中草藥12003,34(10:908-909.13顧銘,歐陽(yáng)藩,蘇志國(guó)1高速逆流色譜法分離純化丹參并嘗試制定中藥指紋圖譜1生物工程學(xué)報(bào)12003,19(6:710-714.3成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中心(6100832008年4月5日收稿苯妥英鈉的合成路線的改進(jìn)鄧晶晶3李婷婷3尤思路3摘要:目的:對(duì)苯妥英鈉合成路線進(jìn)行改進(jìn)。方法:在第一步縮合反應(yīng)中用無(wú)毒的VB1代替劇毒的氰化物

12、,第二步氧化反應(yīng)中用FeCl36H2O 代替濃硝酸,最后進(jìn)行環(huán)和反應(yīng)。結(jié)論:上述改進(jìn)具有操作簡(jiǎn)單、收率高、產(chǎn)品質(zhì)量好、污染低、耗能低等優(yōu)點(diǎn),具有很好的工業(yè)化前景。關(guān)鍵詞:苯妥英鈉;VB 1;FeCl 36H 2O中圖分類(lèi)號(hào):R97116文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1006-0979(200805-0046-02苯妥英鈉(Phenytoin S odium 又名大侖丁,是二苯乙內(nèi)酰脲類(lèi)鈉鹽,是抗癲癇大發(fā)作的首選藥物。常用于抗癲癇、抗心律失常、抗三叉神經(jīng)痛、抗輕度高血壓1。因此,具有開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用的重大意義。苯妥英鈉的合成過(guò)程一般是以苯甲醛為原料經(jīng)安息香縮合,氧化和環(huán)化三步反應(yīng)制得。在傳統(tǒng)制備中,第1步安息香縮合反應(yīng)中常用氰化物作為催化劑進(jìn)行,但因?yàn)榍杌锛扒杌岬闹露拘詷O強(qiáng),致毒作用極快,空氣中氰化氫含量達(dá)3/100000,即可在數(shù)分鐘內(nèi)致人死亡,大大增加了危險(xiǎn)性;第2步二苯乙二酮的合成中用濃硝酸氧化,產(chǎn)生大量的NO 2氣體,腐蝕嚴(yán)重。因此我們改用VB 1(即硫胺代替氰化物進(jìn)行第1步反應(yīng),用FeCl 3作為氧化劑進(jìn)行第2步反應(yīng),具有安全、高效、綠色環(huán)保的優(yōu)點(diǎn),可作為苯妥英鈉的實(shí)際合成方案。1材料與方法111儀器與試劑:循環(huán)水式真空泵(SH21(III 、三