無菌檢查法驗證方案

1、浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司浙江紅雨醫(yī)藥用品有限公司無菌檢驗方法驗證方案及報告 驗證方案申請人: 日期: 年 月 日驗證方案審核人: 日期: 年 月 日驗證方案審批人: 日期: 年 月 日1 概述 無菌檢查法是為了檢查藥典要求無菌的醫(yī)療器械產(chǎn)品是否無菌而建立的檢查法， 是作為批準(zhǔn)無菌產(chǎn)品放行的檢驗或監(jiān)督部門對無菌產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督中的一個重要項目。它是根據(jù)用于實驗的培養(yǎng)基中是否有微生物生長來判定樣品的無菌性 ， 液體培養(yǎng)基變渾濁一般表明樣品受微生物的污染?；谖⑸镂廴镜牟痪鶆蛐?，使無菌檢查法結(jié)果的可信度受許多因素制約， 如抑菌因素、檢查法、檢驗量、檢查用的培養(yǎng)基質(zhì)量、操作環(huán)境、無菌技術(shù)等。檢驗方法的驗

2、證是現(xiàn)代質(zhì)量保證體系中關(guān)系到質(zhì)控技術(shù)、方法、手段的科學(xué)性、準(zhǔn)確性的重要組成部分 ，是保證檢驗結(jié)果的公正、 科學(xué)、準(zhǔn)確的基礎(chǔ) 。 2 驗證目的 對本公司所采用的直接接種無菌檢查法進(jìn)行分析驗證，以證明所采用的方法適合于本公司產(chǎn)品的無菌檢查。3 實驗原理 直接接種法是通過加入一定的抑菌中和劑，以方便而快捷地中和抑菌劑，消除抑菌作用，從而消除抑菌作用對無菌檢查的影響。 本實驗通過設(shè)計對照試驗對直接接種法所加入的抑菌劑的中和效果進(jìn)行驗證，從而得出直接接種法無菌檢驗的有效性。4 驗證范圍實用于本公司所采用的直接接種法進(jìn)行的無菌檢驗過程驗證。5 執(zhí)行程序文件編碼文件名稱存放部門HY-QC-012無菌檢驗操作

3、規(guī)程品管部 6 職責(zé) 姓名職務(wù)職責(zé) 劉傳杰經(jīng)理負(fù)責(zé)驗證方案的批準(zhǔn)實施、驗證報告的批準(zhǔn)周德標(biāo)QC驗證方案、驗證報告的起草并負(fù)責(zé)驗證過程中現(xiàn)場的監(jiān)控及取樣張思東QC負(fù)責(zé)按制訂無菌檢驗規(guī)程實施檢驗和驗證實驗7 驗證內(nèi)容 建立樣品組、對照組及菌種活性檢查組，接種菌株到指定培養(yǎng)基，培養(yǎng)2472小時，比較觀察菌落的生長狀況，得出結(jié)論。8 驗證指示物本實驗所用菌種為購于 浙江省食品藥品檢驗研究所 標(biāo)準(zhǔn)菌株:金黃色葡萄球菌、白色念球菌、大腸埃希菌及生孢梭菌。9 實驗過程 （1）培養(yǎng)基的配制 用于大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 用于白色念球菌的改良馬丁培養(yǎng)基 用于生孢梭菌的流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 （2

4、）供試品的制備 創(chuàng)可貼供試品：將包裝好的創(chuàng)可貼打開，用剪刀將創(chuàng)可貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。 無菌敷貼供試品：將包裝好的無菌敷貼打開，用剪刀將無菌敷貼剪碎，放入100mlpH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。（3）供試菌液的制備 大腸埃希菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)19小時的大腸埃希菌培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約10-510-8之間,混勻備用。 金黃色葡萄球菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)19h小時的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約0-510-8之間,混勻備用。 白色念球菌菌液：取經(jīng)25.5

5、培養(yǎng)72小時的白色念珠菌真菌斜面培養(yǎng)物，加入生理鹽水4ml洗下孢子，吸出轉(zhuǎn)移至空試管作為原液，取1ml加9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6，取1.2ml加生理鹽水9ml，混勻備用。 生孢梭菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)18h的生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6，混勻備用。 （3）實驗設(shè)計實驗樣品組：按照本公司常規(guī)微生物檢驗方法進(jìn)行，加入抑菌中和劑，最后接入已知量的菌株（100cfu），培養(yǎng)觀察。陽性對照組：以0.1%的蛋白胨代替供試品，加入抑菌中和劑，最后接入同樣量的菌株，培養(yǎng)觀察。陰性對照組：取與實驗樣品組等量的供試品，加入與中和劑等量的生理鹽水，最后接

6、入已知量的菌株（100cfu），培養(yǎng)觀察菌種活性檢查組：直接將菌種接種到培養(yǎng)基上，培養(yǎng)觀察。10 標(biāo)準(zhǔn)與判斷 1. 如果實驗樣品組與陽性對照組的微生物計數(shù)相似，表明所用中和劑（中和劑類別及用量）具有足夠的中和效力； 2. 如果陽性對照組與菌種活性檢查組的微生物生長數(shù)量相似，表明所用的中和劑不影響微生物的生長。 3. 陰性對照組微生物生長量應(yīng)低于實驗組，才能證明供試劑有抑菌性，否則該實驗無意義。 4. 樣品組的平均菌檢計數(shù)結(jié)果不得低于對照組的70%，否則直接否定無菌檢驗方法。11 檢驗與記錄無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO: 供試品： 實驗時間： 試驗組名 檢驗菌種實驗樣品組陽性對照組陰

7、性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期： 年 月 日12 編寫驗證報告（1）根據(jù)驗證方案設(shè)計實驗； （2）統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)編寫驗證報告。13 再驗證周期及日常監(jiān)測 （1）無菌檢查按所生產(chǎn)的每批次進(jìn)行日常監(jiān)測； （2）當(dāng)無菌檢查日常監(jiān)測出現(xiàn)不符合標(biāo)準(zhǔn)時，必須進(jìn)行再驗證； （3）當(dāng)無菌檢查方法發(fā)生改變和生產(chǎn)工藝發(fā)生改變時，必須重新驗證； （4）本驗證方案有效期為1年。14 驗證結(jié)果與評價 實驗人對驗證實驗結(jié)果做好相關(guān)記錄并進(jìn)行科學(xué)性評價；15 驗證方案的批準(zhǔn) 驗證小

8、組審閱所有結(jié)果及評價分析意見，同意驗證結(jié)果，簽字并按此結(jié)論實施。直接接種無菌檢查法驗證報告一 實驗?zāi)康?對本公司所采用的直接接種無菌檢查法進(jìn)行分析驗證，以證明所采用的方法適合于本公司產(chǎn)品的無菌檢查。二 實驗原理 直接接種法是通過加入一定的抑菌中和劑，以方便而快捷地中和抑菌劑，消除抑菌作用，從而消除抑菌作用對無菌檢查的影響。 本實驗通過設(shè)計對照試驗對直接接種法所加入的抑菌劑的中和效果進(jìn)行驗證，從而得出直接接種法無菌檢驗的有效性。三 實驗步驟1、.培養(yǎng)基的配制 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基16.5g，加入500ml純化水，緩慢加熱使其完全溶解。 白色念球菌用

9、的改良馬丁培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取改良馬丁培養(yǎng)基14.5g，加入500ml純化水，在加入6g瓊脂粉，加熱使其溶解。生孢梭菌用的流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基：準(zhǔn)確稱取流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基14.5g，加入500ml純化水，在加入6g瓊脂粉，加熱使其溶解。 將上述配制好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋中115，30min。2、供試品的制備 創(chuàng)可貼供試品：將包裝好的創(chuàng)可貼打開，用剪刀將創(chuàng)可貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。 無菌敷貼供試品：將包裝好的無菌敷貼打開，用剪刀將無菌敷貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。 3、供試菌液

10、的制備：大腸埃希菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)19小時的大腸埃希菌培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約10-510-8之間,混勻備用。金黃色葡萄球菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)19h小時的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至約10-510-8之間,混勻備用。白色念球菌菌液：取經(jīng)25.5培養(yǎng)72小時的白色念珠菌真菌斜面培養(yǎng)物，加入生理鹽水4ml洗下孢子，吸出轉(zhuǎn)移至空試管作為原液，取1ml加9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6，混勻備用。生孢梭菌菌液：取經(jīng)35培養(yǎng)18h的生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)物1ml，加9ml生理鹽水，10倍稀釋至10-6，混勻備用。4 、分別取上述兩種供試

11、品100ml，加入抑菌中和劑，接入100cfu菌株（大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念球菌及生孢梭菌分別進(jìn)行實驗），再接種到每種菌株所需的上述培養(yǎng)基中，作為實驗樣品組。5 、用0.1%的蛋白胨溶液代替供試品進(jìn)行同上步驟操作，作為實驗陽性對照組。6、取與實驗樣品組等量的供試品，加入與中和劑等量的生理鹽水，再同第4步操作，作為陰性對照組。7、 取100ml 0.1%蛋白胨溶液，不加中和劑直接接種等量菌株，再接種到培養(yǎng)基上，作為菌種活性檢查組。8 、將接種好的培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及生孢梭菌培養(yǎng)溫度為35，白色念球菌培養(yǎng)溫度為25.5，培養(yǎng)數(shù)天后，觀察并記錄菌落數(shù)。四 實

12、驗結(jié)果記錄無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO:1 供試品：創(chuàng)可貼 實驗時間： 試驗組名 檢驗菌種實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期： 年 月 日無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO:2 供試品：創(chuàng)可貼 實驗時間： 試驗組名 菌種實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期

13、： 年 月 日無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO:3 供試品：創(chuàng)可貼 實驗時間： 試驗組名 菌種實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期： 年 月 日無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO:4 供試品：無菌敷貼 實驗時間： 試驗組名 菌種實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期： 年 月 日無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/皿）NO:5 供試品：無菌敷貼 實驗時間： 試驗組名 菌種實驗樣品組陽性對照組陰性對照組活性檢查組 大腸埃希菌12345平均 金黃色葡萄球菌12345平均白色念球菌12345平均生孢梭菌12345平均結(jié)論： 實驗人： 日 期： 年 月 日 復(fù)核人： 日 期： 年 月 日無菌檢查驗證實驗數(shù)據(jù)表（菌落數(shù)/