納豆激酶基因 畢赤酵母 克隆 表達(dá) 發(fā)酵論文

1、我納豆激酶基因論文：納豆激酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá)【中文摘要】納豆是日本傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,在日本已經(jīng)食用有兩千年的歷史。1987年日本的須見(jiàn)洋行等人首次從納豆中分離出了具有纖溶活性的蛋白激酶,并將之命名為納豆激酶(nattokinase,NK)。該酶為堿性絲氨酸蛋白酶,由枯草牙孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)生,具有很強(qiáng)的溶血栓能力。目前心血管疾病已成為了人類健康的最大威脅之一,溶栓酶是治療心血管疾病的有效方法。納豆激酶是目前一種不錯(cuò)的溶栓物質(zhì),因其與傳統(tǒng)的溶栓劑相比該酶具有安全性好、半衰期長(zhǎng)、口服有效等優(yōu)點(diǎn)而受到了廣泛的關(guān)注。國(guó)內(nèi)外血多學(xué)者對(duì)納豆激酶進(jìn)行了發(fā)酵、分離純化、克隆表達(dá)等研究。它的等電點(diǎn)為8.

2、6±0.3,成熟肽由275個(gè)氨基酸組成,相對(duì)分子質(zhì)量27 KDa。由于納豆激酶的溶栓功能,目前主要將其發(fā)展為溶栓類藥物和溶栓類保健品。它的獲得主要有兩種途徑:一是發(fā)酵分離,通過(guò)改良菌種和優(yōu)化納豆生產(chǎn)工藝等方法來(lái)提高納豆中納豆激酶活性;另外通過(guò)基因工程方法,將納豆激酶基因?qū)氲教囟ǖ谋磉_(dá)宿主中來(lái)提高納豆激酶產(chǎn)量。本研究從本實(shí)驗(yàn)室保存的一株高溶栓的納豆桿菌N07出發(fā),提取納豆激酶總基因組DNA,通過(guò)Primer 5設(shè)計(jì)引物,利用PCR手段擴(kuò)增獲得了納豆激酶長(zhǎng)為825bp的.【英文摘要】Natto is the Japanese traditional fermented food and

3、 has a very long history of at least 2,000 years. Nattokinase was first found and named by Hiroyuki Sumi in 1987. It is a serine proteinase of natto produced in the process of soybean fermentement, which was found to have high fibrinolytic activity.At present cardiovascular disease has become one of

4、 the biggest threats of human health. Streptokinase is an effective method for the treatment of cardiovascular disease.Now nattokinase becomes a hot study .【關(guān)鍵詞】納豆激酶基因 畢赤酵母 克隆 表達(dá) 發(fā)酵【英文關(guān)鍵詞】nattokinase gene Picchia pastoris Cloning expression fermentation【目錄】納豆激酶基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá)中文摘要5-7英文摘要7-8第一章 文獻(xiàn)綜述1

5、1-211 納豆及納豆激酶11-141.1 納豆111.2 納豆激酶11-14 納豆激酶理化性質(zhì)11-12 納豆激酶基因及蛋白結(jié)構(gòu)12-13 納豆激酶克隆表達(dá)研究進(jìn)展13-142 納豆激酶與血栓14-162.1 血栓14-152.2 溶栓劑15-162.3 納豆激酶溶栓機(jī)理163 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)16-203.1 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)16-173.2 表達(dá)菌株17-183.3 表達(dá)載體18-193.4 外源基因在畢赤酵母中分泌表達(dá)19-204 本研究的目的與意義20-21第二章 納豆激酶基因的克隆21-291 材料21-222 方法22-253 結(jié)果與分析25-274 小結(jié)27-29第三章 重組載體pPICZaA/NK 的構(gòu)建29-361 材料29-302 方法30-323 結(jié)果32-354 小結(jié)35-36第四章 重組酵母發(fā)酵研究36-481 材料36-372 方法37-393 結(jié)果39-474 小結(jié)47-48第五章 納豆激酶的分離純化及性質(zhì)研