HPLC法測定清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

1、趙保華，賀秀霞，徐麗珍*，楊世林 【摘要】 目的 建立清火梔麥片中對穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯測定的HPLC法。方法 外標法，DiamonsilTMC18色譜柱（150mm4.6mm，5m）;流動相：甲醇-0.4%冰醋酸水溶液（46：64）；檢測波長225nm和250nm；流速1ml/min。結(jié)果 穿心蓮內(nèi)酯的線性范圍為0.1120.391g（r=0.9997），平均回收率為99.8%，RSD=1.8% (n=5)；脫水穿心蓮內(nèi)酯的線性范圍為0.2210.773g (r=0.9996)，平均回收率為98.7%，RSD=0.5% (n=5)。結(jié)論 方法準確、靈敏，可作為清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯及脫

2、水穿心蓮內(nèi)酯的定量分析方法。 【關(guān)鍵詞】 片劑；穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯；高效液相色譜 【Abstract】 Objective To determine the content of andrographolide、dehydroandrographolide in Qinghuozhimai tablets by HPLC. Methods An external standard method by HPLC with DiamonsilTMC18 column as fixed phase and methanol-0.4%HAC(46:64) as mobile phase was

3、 adopted. The detection wavelength was 225nm、250nm and the flow rate was 1.0ml/min.Results The linear range for andrographolide was 0.1120.391g(r=0.9997).The average recovery of tablets sample was 99.8% and RSD was 1.8% (n=5);the linear range for dehydroandrographolide was 0.2210.773g(r=0.9996). The

4、 average recovery of tablets sample was 98.7% and RSD was 0.5% (n=5).Conclusion The method is simple and accurate， which can be adoptable for quantitative analysis of andrographolide、dehydroandrographolide of Qinghuozhimai tablets. 【Key words】 tablets; andrographolide;dehydroandrographolide;HPLC 清火梔

5、麥片1是由穿心蓮2、梔子、麥冬三味藥經(jīng)提取精制而成，具有清熱解毒，涼血消腫等功效，主要用于咽喉腫痛、發(fā)熱、牙痛、目赤等。但其質(zhì)量標準無兩種有效成分的同時測定方法35。為完善質(zhì)量控制標準，本文選擇采用穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯作為測定對象，建立了用HPLC同時測定清火梔麥片中穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的方法。 1 儀器、試劑和樣品 Waters高效液相色譜儀，600型泵，996型紫外檢測器，million2010數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。 甲醇（色譜純），冰醋酸（分析純），水為重蒸水；清火梔麥片由江西匯仁集團提供。穿心蓮內(nèi)酯（0797-200105）、脫水穿心蓮內(nèi)酯（854-9902）對照品由中國藥品生物制

6、品檢定所提供，經(jīng)高效液相色譜法歸一化法測定純度為99.5%和99.0%。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱DiamonsilTM（鉆石），C18，150mm4.6mm，5m;流動相：甲醇-0.4%冰醋酸水溶液（46：64）；流速1ml/min；柱溫25。檢測波長225nm和250nm。 2.2 樣品制備及方法可行性考察 2.2.1 對照品溶液 取穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，甲醇溶解，制成濃度為穿心蓮內(nèi)酯20g/ml和脫水穿心蓮內(nèi)酯50g/ml的混合對照品溶液，備用。 2.2.2 樣品溶液制備 取本品20片，除去糖衣，研細，混勻。取粉末約0.5g，精密稱定，置25ml

7、容量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理30min，放置至室溫，用甲醇定容，搖勻，用0.45m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。 2.2.3 陰性樣品溶液制備 另取不含穿心蓮藥材的陰性樣品*不含穿心蓮藥材的陰性樣品：按清火梔麥片配方（刪除穿心蓮藥材），采用該片劑制備工藝制得的樣品，照供試品溶液項下操作制備成陰性樣品溶液。 2.2.4 測定方法 分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液10l注入HPLC儀，繪制色譜圖，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的理論塔板數(shù)均不小于4000。樣品中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯與相近峰分離清晰完全，穿心蓮內(nèi)酯分離度為1.5，脫水穿心蓮內(nèi)酯分離度為2.0。且陰性樣品在相同位置無干

8、擾。見圖1。 圖1 對照品樣品及陰性對照品的HPLC圖譜2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯混合對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分別置10ml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，混勻。穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液濃度分別為11.16、16.74、22.32、27.90、33.48、39.06g/ml，脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液濃度分別為22.08、33.12、44.16、55.20、66.24、77.28g/ml，分別取10l注入HPLC儀。以峰面積為縱坐標，對照品量為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程分別為：穿心蓮內(nèi)酯：Y=2.19X-5.84，r=0.9997

9、；脫水穿心蓮內(nèi)酯：Y=1.53X-5.10，r=0.9996。線性范圍：穿心蓮內(nèi)酯：0.1120.391g；脫水穿心蓮內(nèi)酯：0.2210.773g。 2.4 儀器精密度和樣品穩(wěn)定性、重現(xiàn)性試驗 在相同色譜條件下，分別精密吸取穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品的混合溶液10l，注入HPLC儀，重復進樣5次，測定對照品溶液峰面積積分值，結(jié)果見表1。- 28 焦靈利，倪孟祥，陳日，等. 頭孢唑林鈉聯(lián)合舒巴坦鈉對產(chǎn)酶和非產(chǎn)酶菌的體內(nèi)抗菌活性J. 中國藥師，2000,3(5):26629 Gavalda J, Torres C, Tenorio C, et al. Efficacy of ampicillin plus ceftriaxone in treatment of expeimental endocarditis due to Enterococcus faecalis strains highly resistant to aminoglycosides J. Antimicrob Ag