固相萃取_高效液相色譜法測定糧谷中多種磺酰脲除草劑殘留量_百

1、2009年 6月 第 30卷第 6期食品研究與開發(fā) 相比 , 由于前處理比儀器分析方法簡單 , 且后續(xù)的檢測 可實現(xiàn)大量樣本的同步檢測 , 可縮短大量的檢測時間 , 另外 , 該方法具有成本低 , 操作簡便 , 敏度也能達(dá)到儀 器分析方法 。 因此 , 該方法一經(jīng)在農(nóng)獸藥殘留檢測中 應(yīng)用 , 就得到了各個機構(gòu)的關(guān)注和認(rèn)可 , 目前已經(jīng)成為 國際上農(nóng)獸藥殘留量檢測中比較通用的方法 。 運用本 方法對牛肉和牛奶中玉米赤霉醇?xì)埩袅康臋z測表明 , 該方法能從玉米赤霉醇含量為 1.0g/kg 的動物性產(chǎn) 品中檢測出玉米赤霉醇成分 , 最低檢測限附近的添加 回收率在 72.4%98.6%之間 。 通過與玉

2、米赤霉醇結(jié)構(gòu) 類似物和相關(guān)激素類獸藥進行抗體結(jié)合反應(yīng) , 表明該 試劑盒對玉米赤霉醇 、 玉米赤霉酮 、 玉米赤霉烯酮 、 -玉米赤霉烯醇和 -玉米赤霉醇均有交叉反應(yīng) 。 因此在 檢測中應(yīng)該注意該試劑盒的特異性不高 , 如果遇到可疑樣品或者陽性樣品還是應(yīng)該用儀器法進行確證 。 參考文獻 :1朱蓓蕾 . 動物性食品藥物殘留 M.上海 :上?？茖W(xué)技術(shù)出版社 ,1994:72-982中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第 235號 . 動物性食品中獸藥最高殘 留限量 S.20023Anton F Erasmuson, Bryan G Scahill, David M West. Natural Zeranol

3、in the Urine of Pasture -Fed Ainmals J.J.Agric. Food Chem,1994, 42:2721-27254Thomas R Covey, Dominque Silvestre, Michael K Hoffman, et al. A Gas Chromatographic/MassSpectrometric Screening, Confirmation, and Quantification Method for Estrogenic CompoundsJ.BIOMEDI-CAL AND ENVIRONMENTAL MASS SPECTROME

4、TRY, 1988, 15:45-56收稿日期 :2008-11-16葛寶坤, 趙孔祥, 王云鳳, 陳其勇, 高健會, 王偉 (天津出入境檢驗檢疫局, 天津 300456固相萃取 -高效液相色譜法測定糧谷中多種磺酰脲除草劑殘留量作者簡介 :葛寶坤 (1968, 男 (漢 , 高工 , 研究方向 :食品安全檢測技術(shù)研究 。摘要:樣品中殘留的磺酰脲除草劑, 采用 SPE-C18和 GCB 預(yù)柱, 進行提取和凈化, 利用適當(dāng)?shù)南疵撊軇滔噍腿≈细患慕M分進行選擇性淋洗,通過高效液相色譜的紫外檢測器進行分析測定,外標(biāo)法定量;結(jié)果:在 0.02mg/kg0.5mg/kg加標(biāo)范圍內(nèi), 方法的回收率為

5、74.8%105.3%, 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.36%6.33%; 可同時檢測 大米 、 小麥 、 大麥 、 高粱 、 蕎麥等糧谷中的氯磺隆 、 苯磺隆 、 芐嘧磺隆 、 甲磺隆 、 環(huán)胺磺隆 、 乙基氯嘧磺隆 、 嘧啶磺隆 、 吡啶磺隆 、 苯胺磺隆 、 煙嘧磺隆 、 氟嘧磺隆 、 苯醚磺隆等磺酰脲類除草劑 。 關(guān)鍵詞:磺酰脲類除草劑; 固相萃取; 高效液相色譜法; 紫外檢測! SPE-HPLC DETERMINATION OF SULFONYLUREA HERBICIDE RESIDUES IN CEREALS GE Bao-kun, ZHAO Kong-xiang, WANG Yun-fe

6、ng, CHEN Qi-yong, GAO Jian-hui, WANG Wei(TianjinEntry-Exit Inspection and Quarantine Bureau , Tianjin 300456, ChinaAbstract:One method was build to determine 12sulfonylurea herbicides in cereals by Solid phase extraction-high performance liquid chromatography. Methods The residues of sulfonylurea he

7、rbicides in sample were extracted by acetonitrile and cleaned by SPE (C18and GCB. After separated by HPLC, these compounds were detected by UV detection and quantified by external standard. Results The average recoveries in spiked samples ranged from 74.8%to 105.3%and relative standard deviations be

8、tween 2.36%and 6.33%. The method could simultaneously determine Chlorsulfuron, Tribenuron-methyl, Bensulfuron-methyl, Metsulfuron-methyl, Cyclosulfuron, Chlorimuron -ethyl, Flazasulfuron, Pyrazosulfuron -ethyl, Ethametsulfuron -methyl, Nicosulfuron, Primisulfuron and Triasulfuron in cereals such as

9、rice, wheat, barley, sorghum, buckwheat,etc. The method is simple, rapid, accurate , sensitive and easy to be promoted and applicated. Key words:sulfonylurea herbicide; SPE; HPLC; UV檢測分析1272009年 6月 第 30卷第 6期 食品研究與開發(fā)圖 1色譜條件下 , 標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.1Standard chromatograph1. 煙嘧磺隆 (6.0min 2. 甲磺隆 (11.2min 3. 氯磺隆 (1

10、2.2min 4. 胺苯磺 隆 (14.0min 5. 醚苯磺隆 (16.2min 6. 芐嘧磺隆 (20.6min 7. 吡啶磺 隆 (21.5min 8. 苯磺隆 (23.2min 9. 啶嘧磺隆 (27.9min 10. 乙基氯 嘧磺隆 (30.8min 11. 環(huán)胺磺隆 (34.2min 12. 氟嘧磺隆 (37.3min 。除草劑是人類在與雜草危害斗爭中發(fā)明創(chuàng) 造出 的一種強有力的法寶 。 磺酰脲類除草劑是一類新型 、 高效 、 廣譜 、 安全的除草劑 , 被廣泛用于禾谷作物防除 闊葉雜草及某些禾本科雜草 , 以提高農(nóng)作物 產(chǎn)量 1-2; 但同時也帶來環(huán)境和食品的污染 3-4。 因此

11、 , 除草劑的 殘留檢測越來越受到世界各國的重視普遍關(guān)注 。 由于 大多數(shù)磺酰脲類除草劑屬于長殘效除草劑 , 在土壤和 農(nóng)作物中的持效期長 5, 美國 、 日本等發(fā)達(dá)國家對不同 農(nóng)產(chǎn)品中磺酰脲類除草劑 均制定了最高殘留限量標(biāo) 準(zhǔn) 。 我國對此類除草劑殘留衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定 , 目前尚 不健全 , 在農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測存在很多問題 , 其 中檢測手段及方法是不容回避的問題 。 有針對性地選 擇我國糧谷生產(chǎn)過程中使用的和我國及主 要出口國 已設(shè)定殘留限量要求的磺酰脲類 除草劑作為研究對 象 , 建立固相萃取 -高效液相色譜法檢測糧谷中多種 磺酰脲類除草劑殘留的方法 。1材料與方法 1.1儀器WATE

12、RS 高 效 液 相 色 譜 儀 , 配 有 紫 外 檢 測 器 (UVD; 色譜科 12孔固相萃取裝置 ; BUCHI 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 器 ; IKA T-25高速均質(zhì)器 ; 日立離心機 。1.2試劑丙酮 、 乙腈 、 正己烷均為液相色譜純 ; 冰乙酸為優(yōu) 級純 ; 氯化鈉 、 無水硫酸鈉 , 均為分析純 , 無水硫酸鈉用 前在 550 灼燒 4h 后冷卻備用 。瓦 里 安 公 司 :ENVI TM -18(ODS 硅 膠 預(yù) 柱 (1g 、ENVI-Carb (GCB 石墨碳預(yù)柱 (250mg 。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品 :氯磺隆 、 苯磺隆 、 芐嘧磺隆 、 甲磺隆 、 環(huán)胺磺隆 、 乙基氯嘧磺隆 、 嘧啶

13、磺隆 、 吡啶磺隆 、 胺苯磺 隆 、 煙嘧磺隆 、 氟嘧磺隆 、 苯醚磺隆 。 純度 98%,CHEM.SERVICE 公司產(chǎn)品 。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 :精確稱取上述所列適量的12種磺酰脲類除草劑標(biāo)準(zhǔn)品 , 分別用丙酮配制成濃 度為 0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液 , 儲備液保存于 4 冰箱中 , 可使用半年 。 根據(jù)需要用乙腈配制成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 , 保存于 4 冰箱中 , 可 使 用 一 個月 。1.3原理樣品中殘留的磺酰脲類除草劑 , 采用 SPE-C18和 GCB 預(yù) 柱 , 進 行 提 取 和 凈 化 , 利 用 適 當(dāng) 的 洗 脫 溶 劑 對 固 相 萃 取 柱 上 富

14、 集 的 組 分 進 行 選 擇 性 淋 洗 , 通 過高效液相色譜的紫外檢測器進行分析測 定 , 外標(biāo) 法定量 。稱取經(jīng)粉碎混均后樣品 15.0g (過 20目篩 , 于100mL 離心管中 , 加入 20mL 水和 40mL 乙腈 , 高速均 質(zhì) 3min , 于 3000r/min下離心 10min , 將上清液全部 通過 ENVI TM -18硅膠預(yù)柱 , 將濾液轉(zhuǎn)移至 250mL 的分 液漏斗中 , 加入 6gNaCl , 振搖 3min , 取乙腈層 20mL , 加入 10g 無水硫酸鈉 , 過濾至雞心瓶中 , 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 蒸發(fā)至干 。用 5%的丙酮正己烷 (5+95 3mL

15、充分溶解殘渣 , 轉(zhuǎn) 移 至 離 心 管 中 離 心 5min , 取 上 清 液 2mL , 通 過ENVI-Carb 石墨碳預(yù)柱 , 用 2%丙酮 正己烷 3mL 淋 洗 , 棄去洗脫液 , 然后用 3種不同比例 的丙酮正己烷 分 3步依次洗脫并分別收集 :1 5%丙酮正己烷 9mL 洗 脫 , 收 集 洗 脫 液 于 試 管 A 中 , 2 20%丙 酮 正 己 烷9mL 洗脫 , 收集洗脫液于試管 B 中 , 3 50%丙酮正己烷15mL 洗脫 , 收集洗脫液于試管 C 中 。 在氮吹下將上述 3種收集液吹干 , 分別準(zhǔn)確加入 0.5mL 的乙腈 , 搖勻 , 供 HPLC 分析使用

16、。m A u檢測分析1282009年 6月 第 30卷第 6期食品研究與開發(fā)空白試驗除不稱取試樣外 , 均按上述步驟進行 。2結(jié)果與討論2.1方法檢出限和回收率稱取經(jīng)粉碎混均后的大米樣品約 15.0g (過 20目篩 , 分別以 0.02、 0.10、 0.50mg/kg的水平添加 12種磺 酰脲類除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 , 按本方法進行加標(biāo)回 收試驗 , 每個水平的添加樣品分別重復(fù)試驗 7次 , 在0.02mg/kg添加水平的平均回收率為 74.8%103.4%, 在 0.1mg/kg添加水平的平均回收率為 75.2%105.0%, 在 0.5mg/kg添 加 水 平 的 平 均 回 收 率

17、為 85.3%105.3%, 其中氯磺隆 3個添加水平的平均回收率在 73.0%78.1%之間 。 2.2方法的線性范圍和測定低限分 別 取 適 量 的 12種 磺 酰 脲 類 除 草 劑 標(biāo) 準(zhǔn) 儲 備 溶 液 , 氮 氣 吹 干 , 用 乙 腈 配 制 成 系 列 工 作 溶 液 , 按 本 法色譜條件測定 , 12種磺酰脲類除草劑在 0.1g/mL10g/mL范圍均呈良好的線性 , 其相關(guān)系數(shù)均 大 于 0.999。稱取經(jīng)粉碎混均后的系列大米樣品約 15.0g (過20目篩 , 將混合標(biāo)準(zhǔn)使用液依次稀釋后加入 , 按照測 試方法測定樣品加標(biāo)結(jié)果 , 根據(jù)信躁比 S/N 3對應(yīng)的 樣品加標(biāo)

18、濃度和取樣量 , 計算方法最低檢出濃度 , 結(jié) 果除嘧啶磺隆 、 苯磺隆 、 吡啶磺 隆的最低檢測限為0.02mg/kg外 , 均為 0.01mg/kg。 2.3方法的適用范圍為了確定適用性 , 采用空白樣品和添加樣品的對 照 , 研究小麥和高粱樣品中的雜質(zhì)對檢測的干擾和影 響 。 研究表明該方法可適用于大米 、 小麥 、 大麥 、 高粱 、 谷子 、 蕎麥等脂肪含量相對較少的糧谷類 。2.4提取方法的確定根據(jù)研究對象糧谷樣品的基質(zhì)特點 , 重點研究了極性相對較強的乙腈和甲醇的提取效果 , 結(jié)果乙腈的 提取效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于甲醇 。 為了避免植物組織中油脂 、 色素和弱極性雜質(zhì)的影響 , 選擇了極性

19、相對較強的乙 腈作為提取溶劑 。 糧谷樣品中含水量低 , 為提高提取 效率 , 預(yù)先向樣品中加入適量的水之后 , 再用乙腈 提 取 , 試驗證明 , 采用乙腈 -水 (2+1 中性溶劑體系進 行 樣品提取 , 取得了很好的提取效率 。2.5凈化方法的確定為了排除樣品中脂肪 、 色素和其它弱極性雜質(zhì)的干擾 , 選用對弱極性物質(zhì)有較高吸附容量的 ENVITM-18硅膠預(yù)柱 , 進行樣品提取液的凈化 。 通過硅膠預(yù)柱 凈化后 , 提取液中大部分的脂肪 、 色素和弱極性雜質(zhì)被 保留在 ENVITM-18硅膠預(yù)柱上 , 使樣品提取液中的 干擾物質(zhì)得以充分凈化 。 石墨化碳黑 (GCB 是一種無 論在極性

20、基質(zhì)或非極性基質(zhì)中 , 對極性和非極性有機 化合物均有較強富集作用的新型吸附填充材料 , 它能 有效地去除色素 、 大部分低極性雜質(zhì)和脂肪酸等干擾 物 4。 利用 GCB 這種較為廣泛的吸附特征 , 將 ODS 的 提取溶液通過 ENVI-Carb (GCB 石墨碳預(yù)柱 , 富集樣 液中的待測組分 , 以適當(dāng)極性的溶劑選擇性地提取各 組分 , 實現(xiàn)了多種組分的分離檢測 。 為了保證各組分 被選擇性地洗脫下來 , 實現(xiàn)多種組分的分組檢測 , 采用 不同極性的洗脫溶劑和淋洗量對 ENVI-Carb (GCB 石 墨碳預(yù)柱的提取效果進行了探討 , 從而確定采用丙酮 -正 己 烷 (5+95 混 合 溶 劑 作 為 起 始 溶 劑 , 然 后 采