老年口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)及分析

1、老年口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)及分析    老年口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白的表達(dá)及分析    腫瘤防治雜志 2000年第4期第17卷 基礎(chǔ)研究    作者：郭玲玲盛江筠張永格李紅    單位：郭玲玲李紅(山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科濟南市250012)；盛江筠(山東醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院濟南市250012)；張永格(河北省衡水衛(wèi)校衡水市053000)    關(guān)鍵詞：口腔疾??；鱗狀細(xì)胞

2、癌；癌基因；免疫組織化學(xué)    【摘要】目的：探討老年口腔鱗狀細(xì)胞癌組織細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法：采用微波處理LSAB法，分析62例老年口腔鱗癌手術(shù)切除石蠟包埋組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax和p53蛋白表達(dá)情況。另取正常老年人口腔粘膜做對照。結(jié)果：bcl-2陽性率48.38%，在分化程度高者高表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)(P0.05)；p53陽性率為32.26%，多見于中、低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P0.05)；bax的表達(dá)在不同分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面未顯示有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：表明細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax

3、及p53蛋白與老年口腔鱗癌的發(fā)生及生物學(xué)行為有關(guān)。    中圖分類號：R739.85文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A    文章編號：1009-4571(2000)04-0353-03    Experssion and Analysis of Apoptosis-Related Gene Products in the Tissue of Old Pral Sqsuamous Cacinoma    Guo Ling-ling,SHENG Jiang-

4、yun,et al.    (Dept.of Pathology,Shandong Medical University,Jinan 250012)    【Abstract】Objective：To evaluate the expression pattern of apoptosis-related factors and compare the expression with clinicopathological findings in senile oral squamous carcinoma (OS

5、C).Methods：62 cases of senile OSC were examined by using immunohistochemistry.Results：bcl-2 stainning was detected in 48.38% senile OSC.p53 expression was linked with high histological grade and found in 32.26% senile OSC.Conclusions:Poptosis-related factors bcl-2 and p53 were involved in some biolo

6、gical behaviour of senile OSC and they may play an important role in the development of senile OSC.    【Key words】oral disease;squamous carcinoma;oncogenes;immunohistochemistry    腫瘤的發(fā)生、發(fā)展不僅取決于細(xì)胞的增殖速率，而且與細(xì)胞凋亡的相對比率有關(guān)。研究表明，bcl-2、bax和p53參與細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控。為探討這些基因與老年口腔鱗癌

7、的發(fā)生、臨床病理特征及生物學(xué)行為的關(guān)系，筆者利用免疫組化LSAB法檢測了其在老年口腔鱗癌組織中的表達(dá)情況。    1材料與方法    1.1研究對象    收集山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科19881996年老年口腔鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本62例?；颊吣挲g6078歲，平均68.7歲。其中牙齦癌39例，口底癌11例，舌癌6例，口唇癌4例，軟腭癌2例。術(shù)后病理組織學(xué)分級、級分別為28例、25例和9例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者13例，另取正?？谇徽衬?例做對照研究。試劑bcl-2和bax單克隆抗體為Sa

8、nta Cruz Biotechnology公司產(chǎn)品。p53(DO-1)為DAKO公司產(chǎn)品，LSAB試劑盒為Vector產(chǎn)品。    1.2實驗方法    免疫組化采用LSAB法。切片厚4 m。bcl-2、bax和p53單抗工作濃度均為140。bcl-2陽性對照為涎腺腺樣囊性癌組織，bax和p53陽性對照為肺鱗癌組織，陰性對照以PBS代替一抗進(jìn)行。    1.3結(jié)果判定    bcl-2和bax以胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，呈片狀、巢狀

9、(圖1)或散在分布。按顯色有無及陽性細(xì)胞多少分為兩個等級。陰性：無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)3%，陽性：陽性細(xì)胞數(shù)3%，正常對照組6例口腔粘膜中4例基底層細(xì)胞有散在陽性細(xì)胞。p53陽性：細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖2)，無胞核內(nèi)棕黃色顆粒為陰性。        圖1口底中分化鱗狀細(xì)胞癌，bcl-2陽性，    陽性著色位于細(xì)胞漿(LSAB×100)    圖2舌中分鱗狀細(xì)胞癌，p53陽性    

10、陽性著色，位于細(xì)胞核(LSAB×200)    1.4統(tǒng)計學(xué)處理    用2檢驗。    2結(jié)果    免疫組化結(jié)果見表1。bcl-2和bax蛋白免疫組化染色陽性位于細(xì)胞漿。bcl-2表達(dá)在、和級分化組織中陽性率分別為57.14%、52%和11.11%，呈遞減趨勢，差異具有顯著性(P0.05)；在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，bcl-2表達(dá)率分別為15.38%和55.10%，有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。bax在、和級分化的癌組織中陽性率

11、分別為39.29%、60%和44.4%，沒有統(tǒng)計學(xué)差異。在有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，bax陽性分別為46.15%、55.10%，其在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于bcl-2，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。p53在、級癌組織中陽性率分別為10.71%、44%和66.67%，呈遞減趨勢，三者之間差異具有顯著性(P0.05)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)增強，陽性率為69.23%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率為26.53%，差異有顯著性(P0.05)。    表1bcl-2、bax和p53表達(dá)與口腔鱗癌病理指標(biāo)的關(guān)系      

12、;      病理    n    bcl-2    bax    p53            +    %    +    % 

13、;   +    %            組織分化                28    16    57.14    11

14、    39.29    3    10.71                25    13    52    15    60  

15、60; 11    44                9    1    11.11    4    44.44    6    66.67

16、0;           淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移            有    13    2    15.38    6    46.15   &#

17、160;9    69.23            無    49    27    55.10    27    55.10    13    26.53&#

18、160;           注：各指標(biāo)內(nèi)比較P0.05。3討論    bcl-2是近年來發(fā)現(xiàn)的一種原癌基因，它的基因產(chǎn)物可以阻斷細(xì)胞程序性死亡，而不影響細(xì)胞增殖1。bcl-2是正常細(xì)胞所攜帶的基因，通過基因變更或移位后，使之表達(dá)增強2。本組實驗在正常口腔粘膜上皮基底細(xì)胞呈散在陽性，在口腔鱗癌中與分化程度呈正相關(guān)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組bcl-2高表達(dá)，提示bcl-2基因的過度表達(dá)可能是腫瘤發(fā)生的早期事件?？谇击[癌發(fā)生的早期，bcl-2表達(dá)抑制了細(xì)胞的凋

19、亡過程。    p53基因是調(diào)控細(xì)胞凋亡的重要基因。野生型p53可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，突變型p53則抑制細(xì)胞的凋亡3。一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)，突變型p53可下調(diào)bcl-2的表達(dá)，成為bcl-2的調(diào)控因子4，5。p53過度表達(dá)能在蛋白及mRNA水平上下調(diào)bcl-2表達(dá)，說明野生型p53可在轉(zhuǎn)錄水平上抑制bcl-2。本研究p53在正?？谇徽衬り幮?，而多見于中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例；p53表達(dá)與bcl-2呈負(fù)相關(guān)，與文獻(xiàn)報道一致，表明p53水平與腫瘤的惡性表型及生物學(xué)行為呈正相關(guān)，提示p53過度表達(dá)可作為老年口腔鱗癌患者預(yù)后不良的腫瘤標(biāo)志物。  &#

20、160; Bax是bcl-2家族成員之一，在細(xì)胞內(nèi)可與bcl-2形成異二聚體。bax/bcl-2比值對決定細(xì)胞接受信號刺激后存活與否起關(guān)鍵的作用，bax過度表達(dá)細(xì)胞死亡，bcl-2過度表達(dá)則細(xì)胞存活，因而認(rèn)為bax是一種細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子6。曾昕7等報道口腔鱗癌組織bax蛋白表達(dá)弱于異常增生。本研究中，bax在老年口腔鱗癌組織中陽性率為53.23%。未發(fā)現(xiàn)其與bcl-2之間的關(guān)系，其確切價值尚待進(jìn)一步研究。    參考文獻(xiàn)：    1Nunez G,Londan L,Hockenbery V,et al.Deregulated Bcl-2 gene expression sselectively prolongs suvival of growth factor deprived hematopoietic cell linesJ.J Immunol,1990,144:36023604.    2Korsmeyer SJ,et al.Bcl-2 initiates a new category of oncogenes. reglator of cell deathJ. Blood,1992,80:879880.