胰蛋白酶的活力的測定 ppt課件

1、胰蛋白酶的活力的測定胰蛋白酶的活力的測定一、酶的化學(xué)本質(zhì)一、酶的化學(xué)本質(zhì) 概念概念 是一類生物催化劑。是一類生物催化劑?；瘜W(xué)本質(zhì)化學(xué)本質(zhì) 絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，某些絕大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，某些RNARNA或或DNADNA也具也具有催化活性。有催化活性。二、酶的化學(xué)組成二、酶的化學(xué)組成蛋白質(zhì)的酶單純蛋白質(zhì)的酶全酶酶蛋白apoenzyme輔助因子cofactor輔助因子輔助因子 輔基輔基/輔酶輔酶小分子有機(jī)化合物、金屬離子，直接參小分子有機(jī)化合物、金屬離子，直接參與反響。直接對電子、原子或某些化學(xué)集團(tuán)起傳送作用。與反響。直接對電子、原子或某些化學(xué)集團(tuán)起傳送作用。酶蛋白酶蛋白 決議反響特異性專注性。決議反

2、響特異性專注性。 一種輔助因子可與多種酶蛋白結(jié)合；一種酶蛋白只能與一一種輔助因子可與多種酶蛋白結(jié)合；一種酶蛋白只能與一種輔助因子結(jié)合。種輔助因子結(jié)合。三、酶的活性中心三、酶的活性中心 必需基團(tuán)必需基團(tuán) 酶分子中與催化作用直接相關(guān)、不可酶分子中與催化作用直接相關(guān)、不可短少的化學(xué)基團(tuán)。短少的化學(xué)基團(tuán)。 活性中心活性中心 酶分子中必需基團(tuán)相對集中，構(gòu)成一酶分子中必需基團(tuán)相對集中，構(gòu)成一定空間構(gòu)造區(qū)域，與催化作用直接相關(guān)。定空間構(gòu)造區(qū)域，與催化作用直接相關(guān)。 活性中心結(jié)合部位 底物催化部位底物的鍵在此處被打斷或構(gòu)成新的鍵用于判別和確定酶活型中心的主要方法：用于判別和確定酶活型中心的主要方法：1、專注性

3、研討、專注性研討 經(jīng)過研討酶的專注性底物的構(gòu)造特點(diǎn)，經(jīng)過研討酶的專注性底物的構(gòu)造特點(diǎn)，來判別來判別 和確定活性中心的構(gòu)造特點(diǎn)。和確定活性中心的構(gòu)造特點(diǎn)。2、酶側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾法、酶側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾法 酶分子中可以被化學(xué)修酶分子中可以被化學(xué)修飾的基團(tuán)飾的基團(tuán) 很多，如巰基、羥基、咪唑基、氨基很多，如巰基、羥基、咪唑基、氨基及羧基及羧基 等。等。四、酶的命名與分類四、酶的命名與分類 習(xí)慣命名法習(xí)慣命名法 按催化反響類型分類按催化反響類型分類 脫氫酶、脫羧酶、銜接酶、脫氫酶、脫羧酶、銜接酶、聚合酶等。聚合酶等。 按組織來源及性質(zhì)分類按組織來源及性質(zhì)分類 胃蛋白酶胃蛋白酶/胰蛋白酶，酸胰蛋白酶，酸

4、性性/堿性磷酸酶等。堿性磷酸酶等。 國際系統(tǒng)分類國際系統(tǒng)分類 酶原與酶原激活酶原與酶原激活 無活性的酶前身物稱酶原。由無活性酶原無活性的酶前身物稱酶原。由無活性酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚悦傅倪^程稱酶原激活。轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚悦傅倪^程稱酶原激活。 同工酶同工酶 分子構(gòu)造不同、理化性質(zhì)也不同，但催化同一化分子構(gòu)造不同、理化性質(zhì)也不同，但催化同一化學(xué)反響的一組酶，如乳酸脫氫酶學(xué)反響的一組酶，如乳酸脫氫酶LDHLDH。 別位酶別位酶 多亞基組成，其中有催化亞基、有調(diào)理亞基，小多亞基組成，其中有催化亞基、有調(diào)理亞基，小分子化合物結(jié)合調(diào)理亞基后分子構(gòu)象改動，引起催化活性改動。分子化合物結(jié)合調(diào)理亞基后分子構(gòu)象改動，引起催化

5、活性改動。五、酶的活力測定五、酶的活力測定 酶活力enzyme activity，是指酶催化一定化學(xué)反響的才干。 酶活力單位國際單位 規(guī)范形狀下，每分鐘使一微克分子作用物發(fā)生轉(zhuǎn)變的酶量。人們普遍 采用是習(xí)慣用法，如a-淀粉酶，可用每小時催化1克可溶性淀粉所需求的酶量來表示。 胰蛋白酶活力單位的定義規(guī)定為：以胰蛋白酶活力單位的定義規(guī)定為：以BAEE為底物反響液為底物反響液pH8.0，25，反響體積，反響體積3.0ml，光徑，光徑1厘米的條件下，測定厘米的條件下，測定 A253，每分，每分鐘使鐘使 A253添加添加0.001，反響液中所參與的酶量為一，反響液中所參與的酶量為一BAEE單位。單位。

6、初速度初速度 研討酶反響的動力學(xué)以酶促反響的初速度為研討酶反響的動力學(xué)以酶促反響的初速度為準(zhǔn)準(zhǔn)酶活力與酶反響速度 時間02468101214161805101520時間產(chǎn)物量系列1以N-苯甲酰-L精氨酸乙酯為底物，用紫外吸收法進(jìn)展測定的原理是：N苯甲酰L精氨酸乙酯英文縮寫為BAEE在波長253nm下的紫外吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于苯甲酰L精氨酸英文縮寫為BA。在胰蛋白酶的催化下，隨著酯鍵的水解，苯甲酰L精氨酸逐漸增多，反響體系的紫外吸收宜隨之相應(yīng)添加。操作方法操作方法 取取2 2個光程為個光程為1 1厘米的帶蓋石英比色杯，厘米的帶蓋石英比色杯，分別參與分別參與2525予熱過的予熱過的2.8ml2.8ml底物溶液。向一只比底物溶液。向一只比色杯中參與色杯中參與0.2ml 0.001mol/L HCl0.2ml 0.001mol/L HCl，作為空白，校，作為空白，校正儀器的正儀器的253nm253nm處光吸收零點(diǎn)。再在另一比色杯中處光吸收零點(diǎn)。再在另一比色杯中參與參與0.2ml0.2ml待測酶液，立刻混勻并記時，每半分鐘待測酶液，立刻混勻并記時，每半分鐘讀數(shù)一次，共讀讀數(shù)一次，共讀3434分鐘。分鐘。 繪制酶促反響動力學(xué)曲線，從曲線上求出繪制酶促反響動力學(xué)曲線，從曲線上求出反響起始點(diǎn)吸