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1、微量蛋白沉淀濃縮試劑系列產(chǎn)品Protein Precipitation Kit Series貨號:P060053產(chǎn)品及特點本系列產(chǎn)品用于微量沉淀濃縮蛋白質(zhì)樣品,其原理是通過酸或有機溶劑使蛋白質(zhì)變性,溶解度降低,在離心條件下沉淀,而達到蛋白變性、蛋白濃縮、蛋白去鹽的目的。他們還有一個重要的用途是去除污染的鹽離子和其他小分子。本系列產(chǎn)品名單如下:產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱最低濃度備注ATCA蛋白沉淀濃縮試劑5ug/mLBTCA-DOC蛋白沉淀濃縮試劑1ug/mL樣品不得含SDSCTCA-丙酮蛋白沉淀濃縮試劑5ug/mL2D膠樣品制備D酮蛋白沉淀濃縮試劑5ug/mL規(guī)格及成分名稱及編號 成份 20次包裝 TC
2、A蛋白沉淀濃縮試劑 81217A 溶液 A 0.4 mL 溶液 B 10 mL 使用手冊1份TCA-DOC蛋白沉淀濃縮試劑 81217B 溶液 A 0.4 mL 溶液 B 2 mL 使用手冊1份TCA-丙酮蛋白沉淀濃縮試劑 81217C 溶液 A 8 mL 溶液 B 0.4 mL 使用手冊1份丙酮蛋白沉淀濃縮試劑 81217D 溶液 A 20 mL 使用手冊1份運輸及保存 常溫運輸和保存,有效期一年。使用方法一:TCA 蛋白沉淀濃縮試劑使用手冊1、將 200 L 需要沉淀濃縮的蛋白樣品(濃度不低于5ug/mL)轉(zhuǎn)移到一個自備的1.5 mL 塑料離心管中。2、加入 20 L 溶液A,渦旋激烈震蕩
3、10-30 秒混勻。3、冰上放置 30 分鐘或-20放置15 分鐘(過夜放置也可)。4、室溫 12000-15000×g 離心15 分鐘。5、小心移棄上清液,得沉淀。6、在沉淀中加入 500 L 溶液B,輕輕混勻。7、室溫 12000×g 離心15 分鐘。8、小心移棄上清液,得沉淀。9、短暫離心,小心移棄殘留上清液后,將有沉淀物的離心管敞開放置在冰上,空氣晾干。一般需要10 分鐘左右。10、樣品放4保存或立即電泳檢測。二:TCA-DOC 蛋白沉淀濃縮試劑使用手冊1、將 200 L 需要沉淀濃縮的蛋白樣品(濃度不低于1ug/mL,不得含SDS)轉(zhuǎn)移到一個自備的1.5 mL 塑
4、料離心管中。2、加入 20 L 溶液A,渦旋激烈震蕩10-30 秒混勻。3、室溫放置 10 分鐘。4、加入 10 L 溶液B,輕輕混勻。5、室溫 12000×g 離心5 分鐘。6、小心移棄上清液,得沉淀。7、短暫離心,小心移棄殘留上清液后,將有沉淀物的離心管敞開放置在冰上,空氣晾干。一般需要10 分鐘左右。8、樣品放 4保存或立即電泳檢測。三:TCA-丙酮蛋白沉淀濃縮試劑使用手冊1、將 200 L 需要沉淀濃縮的蛋白樣品溶液轉(zhuǎn)移到一個自備的1.5 mL 塑料離心管中。2、加入 400uL 溶液A,渦旋激烈震蕩10-30 秒混勻。3、-20放置 2 小時分鐘(過夜放置也可)。4、427
5、0000×g 離心10 分鐘。5、小心移棄上清液,得沉淀。將有沉淀物的離心管敞開放置在冰上,空氣晾干。一般需要10 分鐘左右。6、在沉淀中加入 50 L 溶液B 溶解沉淀。7、樣品放 4保存或立即電泳檢測。四:丙酮蛋白沉淀濃縮試劑使用手冊1、將 200 L 需要沉淀濃縮的蛋白樣品溶液轉(zhuǎn)移到一個自備的1.5 mL 塑料離心管中。2、加入 1mL 在-20預冷的溶液A,渦旋激烈震蕩10-30 秒混勻。3、-20放置 10 分鐘(對濃度低于5ug/mL 的樣品可以過夜放置)。4、室溫 12000×g 離心15 分鐘(對濃度低于5ug/mL 的樣品可以將離心改為27000×
6、;g 離心15 分鐘)。5、小心移棄上清液,得沉淀。6、將有沉淀物的離心管敞開放置在冰上,空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。7、樣品放 4保存或立即電泳檢測。技術資料TCA 與蛋白質(zhì)TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個方面的作用:在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶性鹽.作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構象發(fā)生改變,暴露出較多的疏水性基團,使之聚集沉淀.隨著蛋白質(zhì)分子量的增大,其結構復雜性與致密性越大,TCA 可能滲入分子內(nèi)部而使之較難被完全除去,在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質(zhì)結構發(fā)生酸水解而形成碎片,而且隨時間的延長這一作用愈加明顯.電泳圖譜顯示,BSA,HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象,這可能是由于TCA 的結合,使SDS與蛋白質(zhì)的結合量產(chǎn)生偏差,從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性,造成遷移率的不一致.我們認為在電泳時使用TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時,對于分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì),要
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