水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范編制說明

1、本文格式為word版，下載可任意編輯水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范編制說明 水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范 地方標(biāo)準(zhǔn)編寫編制說明 （草案） 水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范 地方標(biāo)準(zhǔn)起草小組 二二年三月六日 水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范 地方標(biāo)準(zhǔn)編寫編制說明 一、工作簡況 （一）任務(wù)來源 2021年3月6日，由江西省農(nóng)業(yè)廳、江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物愛護(hù)討論所申請地方標(biāo)準(zhǔn)的立項(xiàng)，依據(jù)江西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局下達(dá)的2021年度第一批江西省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目方案的通知（贛質(zhì)監(jiān) 20210328）制定本標(biāo)準(zhǔn)。(待定)。 （二）起草單位 起草單位：江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物愛護(hù)討論所。 二、制定標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義 水稻穗腐病是由層出

2、鐮刀菌 fusarium proliferatum ，有性態(tài)為藤倉赤霉菌（ gibberella fujikuroi ）為主要致病菌侵染引起的一種水稻穗期病害。層出鐮刀菌可以侵染多種植物，如玉米、水稻、高粱等糧食作物，以及蘆筍、海棗、芒果等經(jīng)濟(jì)作物。該病原菌還能產(chǎn)生多種真菌毒素（如伏馬毒素、鐮刀菌素、鐮刀酸、比卡菌素等），通過食物鏈傳播對人和牲畜的健康造成極大危害。如層出鐮刀菌產(chǎn)生的伏馬毒素可引起馬腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫綜合癥，還可能誘發(fā)人類食道癌和神經(jīng)管型缺陷病。水稻穗腐病不僅導(dǎo)致水稻品質(zhì)的降低，也給食品平安帶來重大隱患。因此，掌握水稻穗腐病的發(fā)生和危害具有重要意義。 在生產(chǎn)中，由于水稻穗腐

3、病發(fā)生在水稻生長中后期，田間防治的操作難度較大，通常不進(jìn)行特地針對穗腐病的防治；此外，水稻穗腐病的致病菌類型比較簡單，侵染途徑多樣，病害發(fā)生受到氣候影響，這些因素導(dǎo)致噴施藥劑難以達(dá)到抱負(fù)的防治效果。因此，篩選和利用抗性品種成為掌握水稻穗腐病危害最為經(jīng)濟(jì)有效的重要措 施，而抗病性鑒定是獲得抗源種質(zhì)材料的基礎(chǔ)，規(guī)范、簡便、有效的抗性鑒定方法是保障。為使水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范和統(tǒng)一，有必要制定水稻穗腐病抗性鑒定的技術(shù)規(guī)范，以滿意當(dāng)前科研和生產(chǎn)實(shí)際需求。 近年來，國內(nèi)外學(xué)者在水稻穗腐病討論及抗性鑒定工作較少，在全省范圍內(nèi)尚未制定過統(tǒng)一的水稻穗腐病抗性鑒定的地方標(biāo)準(zhǔn)。因此，制定一套水稻穗腐病抗性鑒定

4、技術(shù)規(guī)范，對指導(dǎo)我省水稻穗腐病抗性鑒定生產(chǎn)實(shí)踐具有重要意義。 三、主要起草過程 國家重點(diǎn)研發(fā)方案課題"江西雙季稻區(qū)水稻化肥減施增效技術(shù)集成與示范'(2021ydf0202108)、國家重點(diǎn)研發(fā)方案課題"江西雙季稻區(qū)水稻主要病蟲害綠色防控'（2021yfd0300707）、國家重點(diǎn)研發(fā)方案課題"江西省稻瘟病菌致病力分化與綠色防控討論'(2021yfd0301604-02)、江西省水稻產(chǎn)業(yè)體系（jxars-0204）等項(xiàng)目的資助下，對水稻穗腐病的致病菌進(jìn)行了較為具體的討論，建立了水稻穗腐病抗性鑒定方法，經(jīng)多年和多地的觀看與討論表明，水稻品種（組

5、合）間對穗腐病的抗感差異明顯。因此，制定一套水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范，來指導(dǎo)我省水稻穗腐病抗性鑒定生產(chǎn)實(shí)踐。 1、水稻穗腐病由層出鐮刀菌（ fusarium proliferatum ）、澳大利 亞 平臍 蠕 孢菌 （ bipolaris australiensis ）、新月 彎 孢菌（ curvularia lunata ）和細(xì)交鏈孢菌（ alternaria tenuis ）復(fù)合侵染。經(jīng)過致病力測定，確定了層出鐮刀菌為優(yōu)勢致病菌。 2、依據(jù)江西的氣候變化規(guī)律，確定了可以滿意病害發(fā)生需要的最佳播種時(shí)間、接種時(shí)間和病情調(diào)查時(shí)間。 3、在反復(fù)驗(yàn)證的基礎(chǔ)上，制定了以病情指數(shù)作為品種群體抗性的評價(jià)

6、標(biāo)準(zhǔn)。 4、多年的對比試驗(yàn)表明，依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)鑒定的品種抗感性與大田生產(chǎn)上品種抗感表型基本全都。因此，本標(biāo)準(zhǔn)制定科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)，在國內(nèi)同類標(biāo)準(zhǔn)中居先進(jìn)水平。 四、與國內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的 對比 目前尚無水稻穗腐病的相關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，本標(biāo)準(zhǔn)是基于試驗(yàn)討論結(jié)果的基礎(chǔ)上制定的，對于指導(dǎo)水稻抗病鑒定及抗病育種具有重要指導(dǎo)意義。 五、制定（修訂）標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系 本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)gb/t1.1-2021的規(guī)章起草。 六、主要條款的說明 （一）定義和術(shù)語的確定 對于水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)的定義，至今在國內(nèi)外都是不存在統(tǒng)肯定義的。通過對國內(nèi)外文獻(xiàn)的檢索，結(jié)合前期的討論基礎(chǔ)和閱歷的積累，本標(biāo)準(zhǔn)定義了

7、 8 個(gè)術(shù)語，有助于對本標(biāo)準(zhǔn)的理解和執(zhí)行。 3.1 水稻穗腐?。?rice spikel et rot disease ）：由層出鐮刀菌（ fusarium proliferatum ）、澳大利亞平臍蠕孢菌（ bipolaris australiensis ）、新月彎孢菌（ curvularia lunata ）和細(xì)交鏈孢菌（ alternaria tenuis ）復(fù)合侵染，引起水稻穗部產(chǎn)生壞死和枯萎癥狀的真菌病害，其中層出鐮刀菌為優(yōu)勢致病菌。水稻穗腐病在抽穗揚(yáng)花期感染，初期上部小穗穎殼尖端或側(cè)面產(chǎn)生橢圓形小斑點(diǎn)，后漸漸擴(kuò)大至谷粒大部或全部。谷粒初期為紅褐色或鐵銹色，后漸漸變成黃褐色或褐色，水

8、稻成熟時(shí)變成黑褐色，局部病穗伴有灰白色霉層。在本標(biāo)準(zhǔn)"附錄 a'中增加了"水稻穗腐病田間典型癥狀'的相關(guān)描述。 3.2 分別物（ isolate ）：從發(fā)病部位通過人工培育、純化、再接種和分別等方法獲得的病原物的培育物。 3.3 致病性 （ pathogenicity ）：病原物所具有的破壞寄主和引起病變的力量。 3.4 花粉充實(shí)完成期（ the se of pollen mother cell enriched ）：花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂完成后，四分體分散并收縮成不 規(guī)章形；隨后花粉外殼漸漸形成，花粉內(nèi)容物漸漸充實(shí)，到內(nèi)容物布滿之前為花粉內(nèi)容物充實(shí)期。該時(shí)期內(nèi)

9、外稃縱向伸長接近停止，橫向則快速增大。雄蕊雌蕊快速增長，柱頭上依次消失羽毛狀突起，而穎片退化。 5 3.5 單細(xì)胞花粉期 （ the microspore pollen se ）：該時(shí)期處于花粉充實(shí)完成期，花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂完成產(chǎn)生的四分體解散，4 個(gè)小孢子分散成游離狀態(tài)，每個(gè)小孢子含 1 個(gè)細(xì)胞核。此期之初，細(xì)胞核位居.，為"單核中位'。不久，隨著小孢子長大與液泡化，細(xì)胞大部為液泡所占，細(xì)胞核移至一側(cè)，為"單核靠邊'。 6 3.6 人工接種 artif icial inoculation ：在相宜發(fā)病條件下，通過人工操作將人工繁殖的接種體接于植物體適當(dāng)部位

10、。 3.7 抗性評價(jià) evaluation of resistance ：依據(jù)采納的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別植物寄主對特定病害反應(yīng)程度和反抗水平的描述。 8 3.8 病情指數(shù) disease index ：全面評價(jià)發(fā)病率與嚴(yán)峻度兩者的綜合指標(biāo)。 （二） 病原物分別方法 條款"4.1'中規(guī)定了從發(fā)病稻穗上，切取病組織，用常規(guī)組織分別法分別水稻穗腐病病原物。分別物的形態(tài)學(xué)鑒定主要參照真菌鑒定手冊、the genus fusarium the fusarium laboratory manual、 fusarium species-an illustrated manual for ident

11、ification浙江鐮刀菌志，分子生物學(xué)鑒定采納鐮刀菌ef 基因特異引物和層出鐮刀菌 pro 基因特異引物進(jìn)行擴(kuò)增，將所得 的序列與已發(fā)表的基因序列進(jìn)行比對。分別菌株應(yīng)符合附錄 a 的規(guī)定。確認(rèn)為層出鐮刀菌（ fusarium proliferatum ，有性態(tài)：gibberella fujikuroi ）后，采納單孢分別法進(jìn)行分別物純化，經(jīng)科赫（koch）法則驗(yàn)證后，保存?zhèn)溆谩?（三） 病原物保存方法 條款"4.3'中規(guī)定了將層出鐮刀菌接種于 pda 斜面培育基上，28 下培育 7 d，置 4 冰箱內(nèi)保存；或在斜面上加一層滅菌礦物油（超過斜面頂部 1 cm）后置于冰箱或室

12、溫保存。 （四） 接種體的繁殖 條款"4.2'中規(guī)定了將 5105個(gè)/ml 分生孢子液作為田間接種物。該方法能保證各個(gè)接種物攜帶相像的菌量。將層出鐮刀菌接種于 pda 平板培育基上，置于恒溫培育箱 28 培育 3 d 后，自菌落邊緣切取菌餅，接種于 100 ml 的 yepd 培育基，在振蕩搖床中 28培育 3 d，過濾菌絲，用滅菌的三級水配成濃度為 5105個(gè)/ml 的分生孢子懸浮液，可用于田間接種。 為選擇最佳的孢子濃度注射接種，利用 10 倍稀釋法分別將層出鐮刀菌配制成一系列濃度梯度接種感病品種秀水 09，測定結(jié)果表明，穗腐病的發(fā)生率隨著孢子濃度的增加而增加，當(dāng)孢子濃度

13、 5104個(gè)/ml、5105個(gè)/ml、5106個(gè)/ml、5107個(gè)/ml 時(shí)，穗腐病的發(fā)生率分別為 59.2%、92.0%、95.7%和 100%，但高濃度孢子懸浮液 5106個(gè)/ml、5107個(gè)/ml 注射時(shí)，往往造成白穗現(xiàn)象。因此，為便利注射接種鑒定結(jié)果的比較，同時(shí)又能使寄主充分發(fā)病，故選用孢子濃度 5105個(gè)/ml 較為相宜。 七、重大看法分歧的處理依據(jù)和結(jié)果 本標(biāo)準(zhǔn)征求了4家單位的看法，這些單位類型包括大專院校、科研單位和基層技術(shù)推廣部門。沒有重大看法分歧，僅對部分細(xì)節(jié)和文字描述規(guī)范提出了修改看法。本標(biāo)準(zhǔn)已按看法進(jìn)行了修改完善 八、作為推舉性或強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的建議及其理由 水稻穗腐病抗性鑒定技術(shù)規(guī)范是針對我省水稻穗腐病發(fā)生現(xiàn)狀和綠色防控要求研發(fā)制訂的一項(xiàng)有有用價(jià)值的重要技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。它的規(guī)范應(yīng)用將有助于推動(dòng)我省水稻穗腐病鑒定及