重癥肌無力胸腺淋巴細(xì)胞亞群表型的變化

1、重癥肌無力胸腺淋巴細(xì)胞亞群表型的變化摘要： 目的研究重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺的T、B淋巴細(xì)胞亞群表型，并分析與其外周血的相關(guān)性。 方法應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，檢測了59例MG患者，包括30例伴胸腺病變患者外周血的淋巴細(xì)胞亞群表型。另外，對8例MG患者的胸腺和外周血經(jīng)體外培養(yǎng)后進(jìn)行檢測。 結(jié)果(1)MG患者外周血輔助性T細(xì)胞(Th，CD4+)異常增高，病程6個月以內(nèi)、伴胸腺增生者Th細(xì)胞均明顯增多；(2)MG胸腺和外周血中經(jīng)乙酰膽堿受體(AChR)刺激后活化的Th細(xì)胞(CD4+/CD25+)、CD5B細(xì)胞(CD5/CD19+)明顯增多，且外周

2、血CD5B細(xì)胞與自身血清乙酰膽堿受體抗體(AChRAb)滴度顯著相關(guān)(P0.05)，CD4、CD56+/CD16+顯著高于和低于正常對照組(P0.05)，CD56+/CD16+明顯低于正常對照組(P0.05)。(3)11例伴胸腺瘤MG患者PB CD4+明顯高于正常對照組(P0.05)，19例伴胸腺增生MG患者CD56+/CD16+明顯低于正常對照組(P0.05)，CD4+高于正常對照組(P0.05)，39例病程在6個月以上MG組CD56+/CD16+低于正常對照組(P0.05)。(6)3例MG患者胸腺摘除術(shù)后(術(shù)后病理證實1例為胸腺增生,另2例為胸腺瘤) PB淋巴細(xì)胞亞群改變結(jié)果顯示，CD3+

3、、CD4+、CD19+分別有不同程度的下降，CD8+增高，CD16+/CD56+則變化不顯(表1)。表1MG患者胸腺摘除術(shù)后PB淋巴細(xì)胞亞群的變化Table 1The changes of PB lymphocyte subpopulation of MG patients after Tx (%)CaseClinicalscoreCD3+CD4+CD8+CD19+CD16+/CD56Patient 1Before Tx1859.8338.3619.5814.6810.421 week after Tx652.6532.5123.4116.0411.344 weeks after Tx252.

4、3831.3025.419.0011.16Patient 2Before Tx1163.7642.1021.7914.8213.781 week after Tx952.4036.3723.6113.7814.754 week after Tx346.2732.3527.797.7314.38Patient 3Before Tx2566.9044.9027.9014.2314.531 week after Tx854.3737.9228.2516.2312.744 weeks after Tx447.7034.3027.798.2312.602.28例MG患者與對照組胸腺及PB經(jīng)不同抗原刺激后

5、T、B淋巴細(xì)胞亞群的變化2.2.18例MG組與對照組胸腺及PB 經(jīng)不同抗原刺激后T、B淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD25+、CD8+/CD25+、CD5-B細(xì)胞(CD5-/CD19+)之間的比較：經(jīng)AChR刺激后,MG組胸腺以及PB CD8+、CD8+/CD25+、CD19+略高于對照組(P0.05)，MG患者PB CD4+明顯高于對照組(P0.05)，胸腺以及PB CD4+/CD25+、CD5-/CD19+顯著高于對照組(P0.01和P0.05)。2.2.38例MG患者PB CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD25+、CD8+/CD25+、CD5-/CD

6、19+與自身血清AChRAb相關(guān)性分析: 經(jīng)AChR刺激后，CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD25+、CD8+/CD25+與血清AChRAb無顯著相關(guān)性(P0.05)，而CD5-/CD19+與血清AChRAb呈正相關(guān)(r=0.915,P0.01)。2.2.42例MG患者治療前后PB 活化淋巴細(xì)胞亞群的改變：治療后PB AChR特異應(yīng)答性CD4+/CD25+、CD5-/CD19+分別有不同程度的下降，CD8+/CD25+變化則不顯著(表2)。 表2MG患者胸腺摘除術(shù)后PB經(jīng)AChR刺激后淋巴細(xì)胞亞群的變化Table 2The changes of PB lymphocyte subp

7、opulation of MG patients by the stimulation of AChR after Tx (%)CaseClinical scoreCD4+CD4+/ CD25+CD8+CD8+ /CD25+CD19+CD5-/ CD19+Patient 1Before Tx938.912.8622.461.5314.462.39After Tx330.831.4822.291.6311.731.23Patient 2Before Tx1044.243.2220.761.1511.732.08After Tx428.091.5320.411.0610.161.133討論 在本研

8、究中，未經(jīng)免疫抑制劑或Tx治療的MG患者PB 存在T淋巴細(xì)胞亞群的表型異常，即MG組CD4+亞群異常增高，Tx后有所減少, 提示Th細(xì)胞 (CD4+)在MG的發(fā)病過程中起重要作用，與以往研究結(jié)果基本一致8。MG病程6個月以內(nèi)者CD4+亞群明顯增高,則提示急性發(fā)病的MG PB Th細(xì)胞存在異常的免疫應(yīng)答。有文獻(xiàn)報道，將MG患者純化的PB B細(xì)胞分別與其T細(xì)胞、T細(xì)胞加重組白細(xì)胞介素-2(reconstituted interleukin-2，rIL-2)、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD8加rIL-2、CD4細(xì)胞加rIL-2體外培養(yǎng)后測定了其上清液AChRAb水平。結(jié)果示：(1)與T細(xì)胞組比較，

9、去CD4細(xì)胞組、去CD8細(xì)胞組AChRAb水平分別降低和無差異；(2)加入rIL-2后，只有去CD4細(xì)胞組的AChRAb水平降低，表明CD8+細(xì)胞存在功能障礙，造成Ts細(xì)胞功能障礙，CD4+/CD8+功能失調(diào)，使機(jī)體處于一種相對免疫增強(qiáng)狀態(tài)。但也有動物試驗表明，僅CD4+亞群作為Th細(xì)胞在MG中發(fā)揮了重要作用，而CD8+細(xì)胞則無作用9。MG 組PB CD8+亞群與對照組比較差異不明顯，與以往結(jié)果不同8,這可能與本研究中所用熒光標(biāo)記抗體與以往不同有關(guān),而本研究中MG患者于Tx后隨臨床病情好轉(zhuǎn),動態(tài)觀察其CD8+亞群有所增多,提示CD8+亞群可能主要作為Ts細(xì)胞在MG的恢復(fù)過程中發(fā)揮作用。胸腺增生

10、和胸腺瘤亞組中的結(jié)果表明:胸腺增生和胸腺瘤MG患者在Th細(xì)胞(CD4+)、自然殺傷細(xì)胞(CD16+/CD56+)的異常程度方面有一些差異,提示兩者發(fā)病過程可能存在不同的免疫學(xué)機(jī)制。在本研究中CD19+與AChRAb滴度不相關(guān)則可能與CD19+代表總B細(xì)胞，而非代表AChR特異反應(yīng)性B細(xì)胞有關(guān)。以往研究發(fā)現(xiàn)，MG患者PB 存在AChR特異反應(yīng)性T細(xì)胞，這些T細(xì)胞均表達(dá)典型的Th細(xì)胞(CD3+、 CD4+ 、 CD8-)。在MG胸腺內(nèi)亦發(fā)現(xiàn)大量的AChR特異反應(yīng)性T細(xì)胞10，CD25是位于淋巴細(xì)胞膜上的IL-2受體亞單位(mIL-2R)，而mIL-2R的表達(dá)是T淋巴細(xì)胞活化增殖所必需。本研究結(jié)果表

11、明:與對照組比較，MG胸腺和PB 中經(jīng)AChR刺激后CD4+亞群增多,而活化的Th細(xì)胞(CD4+/CD25+)則明顯增多。以往多通過淋巴細(xì)胞增殖實驗(即3H摻入法)觀察AChR特異反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞，其不足在于未能進(jìn)一步揭示T細(xì)胞亞群的具體改變，而本研究結(jié)果直接證實了胸腺細(xì)胞在AChR刺激后，不但Th細(xì)胞增多顯著，而且活化的Th細(xì)胞(CD4+/CD25+)增多更為顯著。CD5分子是表達(dá)在B淋巴細(xì)胞上的淋巴細(xì)胞分化抗原，CD5-B細(xì)胞出現(xiàn)于B細(xì)胞發(fā)育后期，能夠參與經(jīng)典的T細(xì)胞依賴的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生高親和性特異性抗體。在本研究中，胸腺經(jīng)AChR刺激后PB CD5-B細(xì)胞(CD5-/CD19+)明顯增多

12、，且PB CD5-B細(xì)胞與自身血清AChRAb滴度顯著相關(guān)(P0.01)，提示CD5-B細(xì)胞可能與MG的發(fā)病過程關(guān)系密切，較B細(xì)胞(CD19+)更能直接反映AChRAb的產(chǎn)生程度，對此尚需進(jìn)一步研究。基金項目：衛(wèi)生部研究基金資助項目(94-1-091)作者簡介：劉廣志(1970-)，男，青島市人，博士，主治醫(yī)師，主要從事神經(jīng)免疫學(xué)研究。通訊地址：衛(wèi)生部北京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100730。劉廣志(北京天壇醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 北京 100050)許賢豪(北京天壇醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 北京 100050)侯世芳(北京天壇醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 北京 100050)張星虎(衛(wèi)生部北京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科， 北京 100730

13、)參考文獻(xiàn)：1 Rapoport B,Portolano S,McLachlan SM, et al. Combinational libraries: new insight into organ-specific autoantibodiesJ. Immunol Today, 1995,16:43-49.2 王秀云,許賢豪,王紅,等. 重癥肌無力病人的臨床絕對計分法和相對計分法J. 中華神經(jīng)科雜志, 1997,2:87-90.3 涂來慧,邵福源,張仁琴,等. 用雙抗體免疫沉淀法檢測重癥肌無力患者血中乙酰膽堿受體抗體J. 中華神經(jīng)精神科雜志, 1985,6:330-334.4 Hertlin

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