淺談殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌表面疏水性的影響

1、淺談殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌表面疏水性的影響    核心提示：中文摘要：目的:研究殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌細(xì)胞表面疏水性的影響,從而進(jìn)一步了解殼寡聚糖影響細(xì)菌黏附的機(jī)制。方法:使用不同濃度(10-2、10-1、1g/L)的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌,并采用微生物黏著碳?xì)浠衔锓y(cè)試細(xì)胞表面疏水性。結(jié)果:隨殼寡聚糖濃度增加,變形鏈球菌ATCC25175細(xì)胞表面疏水性.中文摘要：目的:研究殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌細(xì)胞表面疏水性的影響,從而進(jìn)一步了解殼寡聚糖影響細(xì)菌黏附的機(jī)制。方法:使用不同濃度(10-2、10-1、1g/L)的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌,并采用微生物黏著

2、碳?xì)浠衔锓y(cè)試細(xì)胞表面疏水性。結(jié)果:隨殼寡聚糖濃度增加,變形鏈球菌ATCC25175細(xì)胞表面疏水性有顯著性降低。結(jié)論:殼寡聚糖可能通過降低細(xì)菌表面疏水作用而抑制變形鏈球菌的黏附。     作者簡介：周智（1971 -），男，漢族，四川內(nèi)江人。博士生（導(dǎo)師：胡德渝），講師，主治醫(yī)師。殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌表面疏水性的影響周 智，范 旭，李 雪，胡德渝 （四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610041） 摘 要 目的：研究殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌細(xì)胞表面疏水性的影響，從而進(jìn)一步了解殼寡聚糖影響細(xì)菌黏附的機(jī)制。方法：使用不同濃度（10 -2、10 -1、1 g

3、/ L）的殼寡聚糖溶液處理變形鏈球菌，并采用微生物黏著碳?xì)浠衔锓y(cè)試細(xì)胞表面疏水性。結(jié)果：隨殼寡聚糖濃度增加，變形鏈球菌 ATCC 25175 細(xì)胞表面疏水性有顯著性降低。結(jié)論：殼寡聚糖可能通過降低細(xì)菌表面疏水作用而抑制變形鏈球菌的黏附。關(guān)鍵詞變形鏈球菌；疏水性；殼寡聚糖牙體牙髓牙周病學(xué)雜志，2005，15（6）：309 （College of Stomatology，Sichuan University，Chendu 610041，China） Abstract AIM：To study the effect of chitooligosaccharide on cell - surfac

4、e hydrophobicity of StreptococcusKey wordsStreptococcus mutans；hydrophobicity；chitooligosaccharideChinese Journal of Conservative Dentistry，2005，15（6）：309變形鏈球菌（ Streptococcus mutans，S. mutans）是口腔中主要的致齲菌，具有較強(qiáng)的黏附于牙面的能力，而細(xì)菌胞體表面疏水性（ cell surface hydro-始黏附中起重要作用。研究證實(shí)，殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌的生長代謝有一定的抑制作用，并對(duì)黏附有一定影響1 -

5、3。本研究采用微生物黏著碳?xì)浠衔锓ǎ瑴y(cè)試不同濃度的殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌胞體表面疏水性的影響，旨在探求殼寡聚糖是否影響變形鏈球菌的非特異性疏水作用，并進(jìn)一步了解殼寡聚糖影響變鏈菌黏附的相關(guān)機(jī)制。 1 材料和方法 1. 1 實(shí)驗(yàn)菌株及主要試劑 生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。殼聚糖，平均相對(duì)分子質(zhì)量 Mr 為 104，山東濟(jì)南海得貝海洋生物工程有限公司提供。十六烷（Fluka，進(jìn)口分裝）。 PUM緩沖液4：含 K2HPO4?3H2O 22. 2 g / L，本實(shí)驗(yàn)采用 BHI（Biomerieux Sa，法國）液體培?903?牙體牙髓牙周病學(xué)雜志（Chin J Conserv Dent）2005，15（

6、6）轉(zhuǎn)載養(yǎng)基。將 S. mutans ATCC 25175 凍干菌株復(fù)蘇，并接種于 BHI血瓊脂平板，在 37厭氧（800 mL / L N2、及生化實(shí)驗(yàn)鑒定為純培養(yǎng)物后，挑取單菌落至 BHI液體培養(yǎng)基中，37厭氧（800 mL / L N2、100 mL / L殼寡聚糖對(duì) S. mutans ATCC 25175 表面疏水性 CSH的影響：實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組?？瞻讓?duì)照組的菌體用 PUM 緩沖液處理，實(shí)驗(yàn)組使用 3 個(gè)濃度的殼寡聚糖處理，即：10 -2、10 -1及本實(shí)驗(yàn)采用微生物黏著碳?xì)浠衔锓ǎ╩icro-鏈球菌表面疏水性。將培養(yǎng)好的細(xì)菌懸液以洗滌 3 次，每次 3 mL。以 PU

7、M 緩沖液為空白對(duì)照，分光光度計(jì)（日本島津，UV - 1601 型）660 nm波長下，用 PUM 緩沖液調(diào)整各管菌液濃度 A 值為入濃度為 10 -2、10 -1及 1 g / L 的殼寡聚糖溶液濃度后的菌液加入 400 ?L 十六烷，震蕩 60 s，使充 分混勻，靜置 15 min，使分層。取水相，分光光度計(jì) 上 660 nm波長測(cè)定吸光度（A）值。各濃度均平行測(cè) 5 管，每管分別測(cè) 3 次，記錄平均值。按下列公式計(jì)算細(xì)菌細(xì)胞表面疏水率，疏水率 = （初始 A660 -加十六烷后 A660）×100% /初始 A660。 使用 SPSS 11. 5 統(tǒng)計(jì)軟件，用單因素方差分析 （

8、ANOVA），比較各組總體均數(shù)間差別有無統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義；用 Tukey檢驗(yàn)方法進(jìn)行組間樣本均數(shù)的兩兩比較。殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌表面疏水性的影響見表 1。如表所示：S. mutans ATCC 25175 細(xì)菌表面疏水性隨殼寡聚糖濃度增加而降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，各濃度組與空白對(duì)照組相比均有顯著性差異 （P < 0. 05）；殼寡聚糖各濃度組間也有顯著性差異 （P < 0. 05）。 表 1 不同濃度殼寡聚糖對(duì) S. mutans ATCC 25175表面疏水性的影響濃度（g / L） 樣本數(shù) 疏水率（%）變形鏈球菌在牙齒表面黏附定植，是其形成菌斑并產(chǎn)生致齲作用的前提條件。目前認(rèn)為：變形鏈球

9、菌在牙面的黏附過程，受到包括有諸如鈣橋作用、靜電引力作用、疏水作用，以及細(xì)菌表面特異性黏附素與受體的特異性結(jié)合等多種機(jī)制的影響。疏水性是指非極性溶液或溶質(zhì)在極性水中所呈現(xiàn)的不穩(wěn)定狀態(tài)，從而引起一系列熱能和分子重新分布及排列的變化6。疏水作用是以分子間彼此相近結(jié)構(gòu)的配合為基礎(chǔ)。細(xì)菌表面疏水性（cell宿主反應(yīng)的因素之一，與細(xì)菌對(duì)口腔組織的黏附、細(xì)菌之間的集聚，以及細(xì)菌的抗吞噬有關(guān)。疏水作用在介導(dǎo)變形鏈球菌黏附過程中起著一定的作用。表面疏水性越強(qiáng)的細(xì)菌黏附力越強(qiáng)7。研究表明，細(xì)菌細(xì)胞表面附著器（ adhesins），如 SpaA、器（ receptors）也具有疏水性。CSH 的強(qiáng)弱與細(xì)菌表面蛋白

10、、菌毛、脂磷壁酸、莢膜等附著器有關(guān)，被認(rèn)為與細(xì)菌的特異性黏附相關(guān)5，8。吸附對(duì)二甲苯 p - xylene 能力的影響，發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過與對(duì)二甲苯的親和力隨殼寡聚糖濃度增高而下降。研究所觀察到的殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌細(xì)胞表面疏水性的抑制作用，提示殼寡聚糖可能對(duì)變形鏈球菌細(xì)菌表面的疏水性分子表達(dá)有抑制作用1。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨殼寡聚糖濃度增高（10 -2 1 g / L），變形鏈球菌的細(xì)胞表面疏水性有顯著性的下降。這一結(jié)果與 Tarsi等的研究一致。?013? 牙體牙髓牙周病學(xué)雜志（Chin J Conserv Dent）2005，15（6）我們推測(cè)殼寡聚糖對(duì)變形鏈球菌的黏附抑制可能有多個(gè)原因：通過攜帶

11、的正電基團(tuán)與細(xì)菌表面攜帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)結(jié)合，而改變細(xì)菌表面電荷分布，從而影響表面疏水性物質(zhì)（如表面蛋白）而改變其構(gòu)型，影響細(xì)菌的疏水性。殼寡聚糖可能通過對(duì)細(xì)菌生長代謝的抑制作用，而影響并改變細(xì)菌對(duì)物體表面的黏附性能。有研究表明，殼聚糖對(duì)變形鏈球菌的生長代謝有抑制作用3。但上述結(jié)果是否由于殼寡聚糖特異性，影響了細(xì)菌表面的某類疏水性物質(zhì)所致，尚待進(jìn)一步研究論證。 參考文獻(xiàn)： 1 Tarsi R，Corbin B，Pruzzo C，et al. Effect of low molecular weight2 Virga C，Beltramo D，Landa C，et al. A comparative

12、 study in vivo3 張雅萍，楊圣輝. 甲殼胺影響變鏈菌酸性代謝產(chǎn)物的研究J.北京口腔醫(yī)學(xué)，2001，9（1）：4 - 54 Rosenberg M，Gutnick D，Rosenberg E. Adherence of bacteria to5 陳罕，樊明文，邊專，等. 變形鏈球菌表面蛋白不同表達(dá)株的疏水性研究J.口腔醫(yī)學(xué)縱橫雜志，1997，13（4）：195 - 1976 Dill KA. The meaning of hydrophobicity J. Science，1990，250 （4978）：297 - 298 7 周學(xué)東，主編. 口腔生物化學(xué)M.成都：四川大學(xué)出版社，

13、8 周學(xué)東，肖曉蓉，主編.口腔微生物學(xué)M.成都：四川大學(xué)出版社，= =基層園地氫氧化鈣在下頜化膿性根尖周炎中的臨床應(yīng)用張春燕 （山東省立醫(yī)院口腔科，山東 濟(jì)南 250021） 氫氧化鈣作為一種根管消毒藥物，在根管治療中得到廣泛應(yīng)用。筆者近年來收治 20 例下頜慢性根尖周炎患者，應(yīng)用碘仿氫氧化鈣糊劑封藥后，控制感染，使患牙得以治愈。性尖周炎患者，共計(jì) 16 例 20 個(gè)患牙，經(jīng)常規(guī)根管預(yù)備，沖洗，F(xiàn)C封藥無效，根管內(nèi)或竇道反復(fù)有膿性分泌物，X線片示根尖周密度減低。應(yīng)用氫氧化鈣糊劑（上海第二醫(yī)科大學(xué)張江生物材料有限公司，散劑為氫氧化鈣，溶液為丙二醇和水）加入少量碘仿（5 : 1）調(diào)拌均勻成稠糊狀，

14、擴(kuò)大針將其導(dǎo)入至根尖部，盡量充滿根管，允許少量超充。磷酸鋅水門汀暫封或玻璃離子水門汀充填。術(shù)后 1 周到 4 個(gè)月復(fù)診。竇道口無分泌物，行根管充填。3 例 5 個(gè)患牙術(shù)后 2 周復(fù)診，根管內(nèi)無滲出，無叩痛，行根管充填。根尖囊腫者同時(shí)行根尖刮治術(shù)。其余 3 例 3 個(gè)患牙分別于術(shù)后 1、2、4 個(gè)月后復(fù)診，至根管內(nèi)無滲出，無叩痛，竇道愈合，X線片示根尖稀疏區(qū)縮小，行根管充填。近年來，氫氧化鈣作為一種根管內(nèi)封藥，在多種牙髓及根尖周疾病的治療中得以廣泛應(yīng)用，它在殺滅微生物和減輕兩次約診之間的癥狀，以及減低對(duì)根尖組織的毒性等方面表現(xiàn)出優(yōu)良的效果。有研究表明，氫氧化鈣具有高效的抗厭氧菌作用，對(duì)內(nèi)氏放線菌和衣氏放線菌也有殺菌效能，還能顯著降低 G -內(nèi)毒素的生物活性，還可以抑制根尖組織溶解和尖周組織的吸收，誘導(dǎo)根尖周骨缺損的修復(fù)。本組中下頜慢性根尖周炎病例均經(jīng)常規(guī)封藥無效。使用的氫氧化鈣粉劑與丙二醇和水調(diào)勻后成稠糊狀，較易導(dǎo)入根管。丙二醇作為一種黏性賦形劑也是可溶于水的物質(zhì)，但是釋放離子的速度較慢，可維持較長的時(shí)間。加入碘仿，X線顯示彌散點(diǎn)狀致密影像，可以觀察充填情況。同時(shí)，碘仿具有殺菌和使細(xì)胞產(chǎn)生氧化的作用，且作用持久，對(duì)組織無刺