血液成分的制備

1、血液成分的制備邱艷北京市紅十字血液中心一、血液成分的制備（一）血液成分的制備原理人體血液經(jīng)過抗凝處理后 稱為全血，全血離心后主要分為三層，自上而下依次為血漿層、白膜層和紅細(xì) 胞層。血漿層主要包含血漿、水、蛋白質(zhì)、鹽類和各種離子等；白膜層主要包括 富含血小板區(qū)、富含淋巴細(xì)胞區(qū)、富含單核細(xì)胞區(qū)和富含粒細(xì)胞區(qū)，這些有形 細(xì)胞比重接近，因此聚集在白膜層；紅細(xì)胞層可簡(jiǎn)單分為年輕紅細(xì)胞和正常紅 細(xì)胞，由于二者處于紅細(xì)胞的不同生長(zhǎng)時(shí)期，因此比重略有差別。根據(jù)全血離心后分層的原理，可以將各層中不同的血液成分分離、制備成 成分血，這樣就可以合理利用血液資源，滿足患者對(duì)不同成分血的需求，提高 治療效果。（二）血液

2、成分的分離策略目前血液成分的分離策略主要有離機(jī)血液成分 分離和聯(lián)機(jī)血液成分分離。離機(jī)分離策略在血液成分的制備過程中不需要獻(xiàn)血者同步參與，先將從獻(xiàn) 血者身上采集到的全血放入無菌袋，然后再進(jìn)一步離心、分離為成分血；而聯(lián) 機(jī)分離策略要求獻(xiàn)血者必須配合醫(yī)務(wù)工作者，同步參與血液成分制備，即一邊 采集獻(xiàn)血者的全血，一邊分離成分血。三）血液成分的分離方法1、離機(jī)血液成分分離有兩種方法，一種是將采集到的全血放入無菌多連袋中，離心后用手工方法將其分為不同的成分血。其優(yōu)點(diǎn)是比較經(jīng)濟(jì)，操作簡(jiǎn)單。7/ 7（ 1）重復(fù)性較差；（PRP和濃縮血小板（但也有下列缺點(diǎn)：（2）去血小板血漿（PPP、富含血小板的血漿 PC制品中

3、易污染其他細(xì)胞；（3）必須配備血袋封口 機(jī)；( 4)對(duì)血液成分的重量無法設(shè)立對(duì)照和記錄；( 5)制備濃縮血小板較為 困難；( 6)無法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和條行碼識(shí)別處理。另一種方法是將采集到的血液放入無菌多連袋，離心后用自動(dòng)血液分離機(jī) 將其分離并裝入別的無菌袋中。其優(yōu)點(diǎn)如下：( 1)可以進(jìn)行條形碼識(shí)別、數(shù)據(jù)記錄和血液分離過程中的信息傳遞，對(duì)整 個(gè)分離過程進(jìn)行控制；( 2)可以自動(dòng)封閉血袋；( 3)高性能的光學(xué)傳感器保 證了分離的重復(fù)性；(4)離心后確保高純度成分制備；(5)PPP PRP和PC 中細(xì)胞污染少；( 6)制備快速。但其需要預(yù)先的資金投入，而且在制備過程中，要根據(jù)不同機(jī)構(gòu)使用的血 袋和采血量

4、，制定離心曲線，以保證符合自動(dòng)血液分離機(jī)在血液分離過程中的 需要。2、聯(lián)機(jī)血液成分分離也有兩種方法，一種是在血液分離過程中，獻(xiàn)血者與 單采血漿機(jī)始終相連，機(jī)器將收集到的獻(xiàn)血者的血液離心并抽提出需要的血液 成分，把它裝入其他無菌血袋，同時(shí)將不需要的血液成分回輸給獻(xiàn)血者。其優(yōu)點(diǎn)為：(1)可以收集到血漿、PC和紅細(xì)胞(RBC (特別是存在同種異體免疫風(fēng) 險(xiǎn)時(shí))，而且血液成分質(zhì)量較高；( 2)如果有額外的液體回輸作為補(bǔ)償，每個(gè) 獻(xiàn)血者一次最多可以提供 600ml 血漿；( 3)一位獻(xiàn)血者可以為一位患者輸入足 夠的血小板。其缺點(diǎn)為：( 1 )需要專門耗材的復(fù)雜儀器和專業(yè)人員進(jìn)行操作；( 2)血液收集過程

5、 需要 30分鐘到 2 小時(shí)(制備濃縮血小板)；( 3)大量帶有抗凝劑的血液回輸 給獻(xiàn)血者，使獻(xiàn)血者存在休克危險(xiǎn)；( 4)耗材成本高；( 5)單采血漿機(jī)不能 排除對(duì)供血者的副作用和危險(xiǎn)，由于處理過程長(zhǎng)(長(zhǎng)達(dá) 2 小時(shí))，獻(xiàn)血者會(huì)感 覺寒冷和神經(jīng)緊張，長(zhǎng)時(shí)間存在體外循環(huán)，獻(xiàn)血者會(huì)出現(xiàn)皮膚潮紅、口干、對(duì)抗凝劑反應(yīng)的危險(xiǎn)以及塑料消耗品引起輸血反應(yīng)的危險(xiǎn)；（6）招募獻(xiàn)血者更困難。另一種方法是利用細(xì)胞分離機(jī)將采集的血液離心、分離為不同的血液成分 并裝入其他無菌血袋。四）血液成分的制備策略血液成分制備有四種不同的策略。FFP）。第一種策略是先將采集到的全血過濾，29004000g重度離心1020分 鐘，分

6、別得到少白細(xì)胞的濃縮紅細(xì)胞和新鮮冷凍血漿（濃縮紅細(xì)胞經(jīng)過進(jìn)一步處理，可以制備成懸浮紅細(xì)胞、洗滌紅細(xì)胞和輻照 紅細(xì)胞。新鮮冰凍血漿可以進(jìn)一步制備成普通液體血漿、冷沉淀凝血因子和缺乏忸因子的血漿。第二種策略是全血不經(jīng)過過濾，直接重度離心后，將分離到的濃縮紅細(xì)胞制備成紅細(xì)胞添加液、洗滌紅細(xì)胞和輻照紅細(xì)胞。其他同第一種策略。第三種策略是全血不經(jīng)過過濾，直接重度離心，制備成部分少白細(xì)胞的紅 細(xì)胞（可進(jìn)一步制備成懸浮紅細(xì)胞、洗滌紅細(xì)胞和輻照紅細(xì)胞）、缺乏血小板 的血漿（可制備成新鮮冰凍血漿，并進(jìn)一步制備成普通液體血漿、冷沉淀物、 缺乏因子的血漿和凝固因子）和白膜層。歐洲人的白膜層加入部分血漿，100013

7、00g離心610分鐘或275g離心 35分鐘，可制備部分缺少白細(xì)胞的血小板。第四種策略是全血經(jīng)過 1000 1300g 輕度離心 6 10 分鐘，制備成部分少 白細(xì)胞的紅細(xì)胞和PRP （美國(guó)人）。前者可進(jìn)一步制備成紅細(xì)胞添加液、洗滌紅細(xì)胞和輻照紅細(xì)胞，后者經(jīng) 2900 4000g 重度離心 10 20 分鐘，可制備濃縮血小板，去血小板血漿可進(jìn) 步制備成普通液體血漿、冷沉淀凝血因子和缺乏 忸因子的血漿。二、血液成分的臨床應(yīng)用(一)血液成分的分類1、美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)血液標(biāo)準(zhǔn)成分種類美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)( AABB血液標(biāo)準(zhǔn)中的血液成分共有 26 種，分別如下：( 1 )全血( whole blood )( 2)

8、輻照全血( whole blood irradiated )( 3) 紅細(xì)胞( red blood cells)( 4)輻照紅細(xì)胞( RBCs irradiated)( 5)冰凍解凍去 甘油紅細(xì)胞( RBCs frozen and deglycerolized ( 6)少白細(xì)胞紅細(xì)胞( RBCs leukocytes reduced)( 7)復(fù)壯紅細(xì)胞( RBCs rejuvenated)( 8)冰凍解凍去甘 油復(fù)壯紅細(xì)胞( RBCs rejuvenated frozen and deglycerolized ( 9)洗滌紅細(xì)胞 (RBCs washed ( 10)單采紅細(xì)胞( RBCs ph

9、eresis ( 1 1 )單采少白細(xì)胞紅細(xì) 胞(RBCs leukocytes reduced pheresjs (12)血小板(platelets) (13)輻照血 小板( platelets irradiated )( 15)混合血小板( platelets pools)( 16)單采血小 板( platelets aphaeresis)( 17)輻照單采血小板( platelets aphaeresis irradiated )( 18)單采少白細(xì)胞血小板( platelets apheresis leukocytes reduced)( 19)單采粒細(xì)胞( Granulocytes

10、apheresis)( 20)輻照粒細(xì)胞( Granulocytes irradiated )( 21)冷沉淀凝血因子( antihemophilic factor cryoprecipitated )( 22)新鮮冰凍血漿( fresh frozen plasma)( 23)冷沉淀后冰凍血漿( plasma cryoprecipitated reduced)( 24)冰凍血漿( plasma frozen)( 25)液體血漿( Liquid plasma)( 26)病毒滅活血漿( Solvent/detergent-treated pooled plasma)其中，(1)( 11)主要是紅細(xì)

11、胞類制品，(12)( 18)主要是血 小板類制品，( 26)主要是血漿類制品。21)2、我國(guó)血液制品種類按照我國(guó)全血成分血質(zhì)量要求，我國(guó)的血液產(chǎn)品 可分為血液制劑、造血干細(xì)胞和血液制品。臨床供應(yīng)的血液制劑主要是全血和成分血，成分血包括紅細(xì)胞類成分血、 病原體滅活血漿、濃縮血小板、新鮮冰凍血漿、泠沉淀凝血因子、輻照成分血 和單采成分。其中，紅細(xì)胞類成分血包括濃縮紅細(xì)胞、懸浮紅細(xì)胞、濃縮少白細(xì)胞紅細(xì)胞、懸浮少白細(xì)胞紅細(xì)胞、洗滌紅細(xì)胞和冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞。單采成分血包括單采血小板、單采少白細(xì)胞血小板、單采粒細(xì)胞、單采新 鮮冰凍血漿和單采紅細(xì)胞。二）血液成分的臨床應(yīng)用1、洗滌紅細(xì)胞不同國(guó)家的洗滌紅細(xì)

12、胞制備標(biāo)準(zhǔn)也不同，美國(guó)的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 250350ml（450ml 全血制備），血細(xì)胞比容為0.60 0.80，白細(xì)胞V 5X 106單位，強(qiáng)調(diào)洗滌紅細(xì)胞的目的是除去血漿部分。我國(guó)的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 125ml士 1%（ 200ml全血制備）、 250ml ± m （400ml全血制備），紅細(xì)胞回收率 > 7%，白細(xì)胞清除率> 8規(guī), 血漿蛋白清除率> 9%。2、輻照血液紅細(xì)胞輻照紅細(xì)胞的適應(yīng)證包括：（1）消除輸血相關(guān)的移植物抗宿主病患病風(fēng)險(xiǎn)；（ 2）適用于先天性免疫 缺陷患者、骨髓和器官移植患者、新生兒患者，強(qiáng)烈放化療患者、輸入直系親 屬血受血者等。美

13、國(guó) AABB 23版標(biāo)準(zhǔn)要求對(duì)血液制劑中心點(diǎn)的照射劑量不得少于25Gy（2500cGy,對(duì)血液制劑任何點(diǎn)的照射劑量不得少于15Gy（ 1500cGy）,輸送照射劑量要定時(shí)進(jìn)行確認(rèn)，銫 137每年確認(rèn)一次，鈷 60 每半年確認(rèn)一次。3、解凍紅細(xì)胞我國(guó)的制備標(biāo)準(zhǔn)要求血容量為 200ml± 1%0（200ml 全血制 備）、400ml士 1%（ 400ml全血制備），紅細(xì)胞回收率 > 80%解凍紅細(xì)胞殘留 白細(xì)胞< 1%解凍紅細(xì)胞殘留血小板< 1%解凍紅細(xì)胞甘油含量< 10g/L解凍紅 細(xì)胞游離血紅蛋白含量 < 1g/L解凍紅細(xì)胞體外溶血試驗(yàn) < 50%

14、美國(guó)AABB23版標(biāo)準(zhǔn)要求紅細(xì)胞回收率 > 80%4、少白細(xì)胞制備工藝的質(zhì)量控制原則為：（ 1 ）制備應(yīng)在血液制劑貯存前盡快進(jìn)行，以減少輸注副反應(yīng)，這樣可避免白細(xì)胞在凋亡或壞死之前在4C儲(chǔ)存時(shí)釋放降解物，導(dǎo)致細(xì)胞碎片在室溫釋放細(xì) 胞因子；（ 2）病床邊用濾器過濾除去白細(xì)胞，由于白細(xì)胞儲(chǔ)存后會(huì)產(chǎn)生緩激肽 等其他血管擴(kuò)張物，不能用過濾方法除去，會(huì)造成嚴(yán)重的輸血低血壓反應(yīng)，所 以制備應(yīng)在血液中心進(jìn)行，血液中心可以提供質(zhì)量控制，監(jiān)控濾過操作和濾器 失控狀態(tài)；（ 3）質(zhì)量管理體系保證制備的文件記錄。5、血小板對(duì)血小板質(zhì)量影響較大的因素包括：（1）分離方法，擠白膜（Buffy Coat BQ法和富含

15、血小板血漿（PRP法對(duì) 其有不同影響；（ 2）保存狀態(tài)，儲(chǔ)存容器要有充分的通氣性；保存溫度是一個(gè) 質(zhì)量管理的重要指標(biāo)，研究表明冷藏保存的血小板雖然凝集能力及止血效果能 保持良好，但輸血后的壽命極短，因?yàn)榈蜏乜墒寡“宓慕Y(jié)構(gòu)之一 微管發(fā) 生解離，導(dǎo)致血小板形態(tài)改變，造成血小板壽命縮短，能引起這種變化的起始 溫度約為15C18C，所以現(xiàn)在通常在20C24C下保存；振蕩方式也會(huì)影響 血小板質(zhì)量，顛倒轉(zhuǎn)動(dòng)型振蕩對(duì)血小板的再游離效果較好，也可充分保持 pH 值，對(duì)血小板的負(fù)擔(dān)較強(qiáng)，容易損傷血小板，往返型水平振蕩對(duì)血小板損傷較 少，一般進(jìn)行5060CPM的水平振蕩即可維持pH在6.5以上。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定振動(dòng)頻率

16、為60次/min，振幅5cm;（3）保存介質(zhì)，常用的是 ACD-B；（ 4）血漿留量，濃縮血小板在保存期不斷代謝產(chǎn)酸，導(dǎo)致血漿pH 不斷降低，使?jié)饪s血小板的保存環(huán)境處于酸化環(huán)境，因此一定量的血漿可以緩沖濃 縮血小板 pH 不斷降低，以保持血小板活性，因此，濃縮血小板容量對(duì)維持血小 板耐受低 pH 值是必要的；（ 5）血小板濃度，血小板濃度越高，其代謝越旺 盛， pH 值降低越明顯， pH 為6.97.4時(shí)，血小板形態(tài)無明顯改變，聚集功能大于儲(chǔ)存前的45%，pH 為6.56.8以下時(shí)，血小板形態(tài)開始從圓盤狀向球狀變化， pH為6.0 以下時(shí)，血小板產(chǎn)生不可逆變化；（ 6）紅、白細(xì)胞污染，大量的紅細(xì) 胞和白細(xì)胞可以使血小板在保存期間 pH 值下降。6、新鮮冰凍血漿在-8C以下可保存1年，大部分凝血因子都保持著與新 鮮時(shí)相近的值，而第TO、第K、第刈因子為70%80%,最不穩(wěn)定的第忸因子 則降到 65%左右。輸血時(shí)各種凝血因子都有止血作用，因而制備和儲(chǔ)存條件很重要。我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)要求在全血采集后 6小時(shí)（全血保養(yǎng)液為ACD或