藥品微生物限度檢查結(jié)果影響因素分析及控制方法

1、藥品微生物限度檢查結(jié)果影響因素分析及控制方法blueski 推薦 2010-3-4出處:來(lái)自網(wǎng)上作者:房宇輝董艷麗摘要:微生物限度檢查法系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程 度的一種檢查方法 ,包括染菌量及控制菌的檢查 ,是對(duì)生產(chǎn)單位所用的藥品原料、器具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。由于 微生物限度檢查程序繁瑣 ,操作嚴(yán)格,檢查周期長(zhǎng) ,干擾因素多等原因都會(huì)造成檢驗(yàn)結(jié)果誤差 ,這樣難微生物限度檢查法系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程度的檢 查方法 ,包括染菌量及控制菌的檢查 ,是對(duì)生產(chǎn)單位所用的藥品原料、器具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操

2、作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。由于微生物限度 檢查程序繁瑣 ,操作嚴(yán)格 ,檢查周期長(zhǎng) ,干擾因素多等原因都會(huì)造成檢驗(yàn)結(jié)果誤差 ,樣難以對(duì)生產(chǎn)做出系統(tǒng)、科學(xué)的管理?，F(xiàn)就微生物檢查時(shí) ,容易引起誤差的幾方面原因以及控制方法分析如下。1 實(shí)驗(yàn)者主觀因素及操作技能中的誤差1.1 無(wú)菌觀念淡薄一些操作者認(rèn)為 ,微生物限度范圍定得寬 ,多幾個(gè)、少幾個(gè)菌對(duì)結(jié)果影響不大 ,因此操作馬虎、隨意 ,這樣容易造成供試品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡 ,從而不能真實(shí)的反映供試品的染菌情況。因此每一個(gè)檢驗(yàn)者應(yīng)明確的了解,在檢驗(yàn)過(guò)程中的每一個(gè)環(huán)節(jié) ,每個(gè)空間 ,每個(gè)操作,每個(gè)工具及材料 ,沒(méi)滅菌者都是帶菌者

3、,都會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不確定影響 ,因而應(yīng)牢固的建立無(wú)菌觀念。1.2 操作技能中誤差一些操作者在操作不熟練 ,及實(shí)驗(yàn)條件控制不嚴(yán)格 ,細(xì)節(jié)不夠注意 ,每次操作前的消毒處理必須徹底 ,不得留有死角 ,對(duì)實(shí)驗(yàn)所用器具根據(jù)材料的性質(zhì)進(jìn)行相應(yīng)的滅菌 ;開(kāi)啟供試品包裝的工具 ,如剪刀、砂輪等也應(yīng)消毒 ,實(shí)驗(yàn)用的器具 如吸管應(yīng)清洗干凈 ,滅菌,放液時(shí)不得接觸液面 ,每 ml 樣品必須放盡 ,否則影響細(xì)菌記 數(shù)的準(zhǔn)確性 ;這些細(xì)小環(huán)節(jié)都有可能污染供試品的可能 ,使平皿染菌數(shù)增多 ,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn) 誤差 ,所以應(yīng)該對(duì)實(shí)驗(yàn)每個(gè)環(huán)節(jié)都要考慮 ,分析 ,根據(jù)本單位具體情況建立個(gè)系統(tǒng)、科學(xué)的操作規(guī)范(SOP正確熟練的掌握無(wú)菌

4、技術(shù)及操作規(guī)范是準(zhǔn)確完成檢驗(yàn)結(jié)果、得 出可靠結(jié)論的基本條件。2 操作環(huán)境不符合要求帶來(lái)的誤差按無(wú)菌要求 ,無(wú)菌室應(yīng)由無(wú)菌操作間和兩個(gè)緩沖間組成 ,操作間與緩沖間之間應(yīng) 有樣品傳遞箱 ,操作間和緩沖間的門(mén)不應(yīng)直對(duì) ;操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道 ,無(wú)菌室的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi) ,室內(nèi)六壁應(yīng)光滑平整 ,能耐受清洗消毒 ;無(wú)菌室的溫濕度和潔 凈級(jí)別應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤 ,并有相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備 ,由于條件限制 ,一些單位的無(wú)菌室在設(shè)計(jì)上不符合要求 ,缺少傳遞箱 或緩沖設(shè)備不健全 ,在操作中傳遞物品不方便 ,人員的頻繁走動(dòng)增加了染菌機(jī)會(huì)。無(wú)菌操作臺(tái)或凈化工作臺(tái)要定期檢測(cè)其潔凈度 ,確保達(dá)到 100 級(jí)。潔凈級(jí)別及檢查方

5、法通常采用塵粒數(shù)及浮游菌數(shù)或沉降菌數(shù)測(cè)定法,凈化工作臺(tái)中的高效及中效過(guò)濾器應(yīng)根據(jù)檢測(cè)情況 ,必要時(shí)及時(shí)換處理。這項(xiàng)工作在各單位檢驗(yàn)工作中應(yīng)得到足夠重視 ,確保操作臺(tái)達(dá)到規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)。3 標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇和保存及管理不當(dāng)引起的誤差微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制必須要有標(biāo)準(zhǔn)菌株并且其生物學(xué)特征必須典型穩(wěn)定,如形態(tài)變異、菌落變異 ,耐藥性變異等均可使平板中細(xì)菌呈叢集或分散不均。這是由于藥品微生物限度檢查其檢查對(duì)象具有以下特征 :(1 能繁殖的活細(xì)胞生物 ,活性易變 性;(2數(shù)量少而且分布不均勻 ;(3 多數(shù)處于受損狀態(tài) ;(4生存環(huán)境多樣性及復(fù)雜性。菌種保藏與管理應(yīng)有完整的程序 ,保藏的菌種必須具備該菌種的詳

6、細(xì)歷史及有 關(guān)資料。一般是首先填寫(xiě)菌種卡片 ,登記菌種名稱(chēng)編號(hào) ,來(lái)源歷史 ,形態(tài)特征 ,生化與血清學(xué)鑒定 ,以及菌種傳代次數(shù)、最宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、保藏方法、貯存條件及保藏地址等 1 。4 培養(yǎng)基靈敏度下降引起的誤差數(shù)單位使用干粉培養(yǎng)基 ,使用較方便 ,但由于其極易吸潮 ,如存放不當(dāng)出現(xiàn)凝塊 ,則其凝固性較差，應(yīng)避免使用。新鮮配制的培養(yǎng)基應(yīng)在2C 20C避光保存，但不得凍結(jié),保存時(shí)間不得過(guò) 2周。硫乙醇鹽流體培養(yǎng)基儲(chǔ)存過(guò)程中 ,若氧化還原層超過(guò) 1/5,須經(jīng)水浴加熱煮沸10min方可使用，但只限一次。否則可使培養(yǎng)基中糖、微生物和氨基 酸受到破壞 ,影響質(zhì)量。5 滅菌方法不當(dāng)造成的實(shí)驗(yàn)誤差高壓

7、消毒滅菌法是最常用最有效的滅菌方法 ,為了保證高壓滅菌的質(zhì)量確實(shí)達(dá)到高壓消毒的目的 ,首先要選擇合格的壓力蒸氣滅菌器 ,其次操作人員必需了解滅菌 器的原理并遵守其操作規(guī)程 ,特別要排盡鍋內(nèi)的冷空氣 ,否則雖然壓力達(dá)到 ,而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求 ,滅菌就可能不徹底。根據(jù)消毒物品的特性確定合格的時(shí)間和溫度一般情況下，含有糖分的培養(yǎng)基溫度需控制在115C 1520min,不含糖分的培養(yǎng)基溫度控制在121 r 1520min,而含菌的培養(yǎng)基（使用過(guò)溫度需控制在121C 30min左右2,此外每次使用時(shí) ,應(yīng)放入必要的監(jiān)視指標(biāo)。6 菌落數(shù)計(jì)數(shù)錯(cuò)誤6.1 當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)小而密集時(shí) ,極易發(fā)生計(jì)數(shù)誤差菌落計(jì)數(shù)時(shí)

8、應(yīng)仔細(xì)觀察,對(duì)供試品顆粒、培養(yǎng)基沉淀物、氣泡等要嚴(yán)格觀察 ,必要時(shí)借助放大鏡或低倍顯微鏡直接觀察或挑取可疑物涂片鏡檢 ,也可以適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)一步觀察。6.2 菌落蔓延生長(zhǎng)成片或發(fā)生重疊影響計(jì)數(shù)藥典規(guī)定菌落如蔓延生長(zhǎng)成片,不宜計(jì)數(shù)。這是由于平皿濕度過(guò)大 ,利于動(dòng)力菌游動(dòng) ,促使菌落蔓延。某些劑型如蜜丸、水丸最易形成片狀菌。防止的方法有：0.001%TTC瓊脂法、開(kāi)蓋干燥法或換陶瓦蓋 法。6.3不同的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)樣品細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果的影響樣品經(jīng)24h培養(yǎng)后，有的菌落很小，容易漏掉，培養(yǎng)48h后,菌落不但變大，而且還有很多新生長(zhǎng)出來(lái)的菌落，培養(yǎng)72h后，菌落數(shù)增加不多，但菌落明顯變大，而且混雜的霉菌生長(zhǎng)旺盛，影響結(jié)果的觀察計(jì)數(shù)。同時(shí)這也是一些樣品經(jīng)72h培養(yǎng)后細(xì)菌總數(shù)技術(shù)有明顯增加的一個(gè)原因。培 養(yǎng)24h和培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)結(jié)果有明顯差異，后者合格率明顯降低，所以在規(guī)定的培養(yǎng)環(huán) 境下,應(yīng)嚴(yán)格遵守培養(yǎng)時(shí)間 ,以便真實(shí)的反映出樣品中細(xì)菌總數(shù)的水平?？傊幤返奈⑸锵薅葯z查是保證藥品質(zhì)量的重要指標(biāo),實(shí)驗(yàn)者要有高度的職業(yè)道德和科學(xué)態(tài)度 ,嚴(yán)格按操作規(guī)范操作 ,減少或避免實(shí)驗(yàn)中的可能造成的誤差