血清乙型肝炎病毒e抗原檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、血清乙型肝炎病毒e抗原檢測(cè)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)（ELISA）1 .原理在微孔條上預(yù)包被被純化乙肝e抗體（HBeAb）,配以酶標(biāo)記抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測(cè)人血清（或血漿）中乙肝e抗原（HBeAg）o2 .標(biāo)本采集2.1 1采集前病人準(zhǔn)備：受檢者應(yīng)空腹2.2 標(biāo)本種類：血清或血漿2.3 標(biāo)本要求：采集病人靜脈血3nli（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過(guò)4小時(shí)，分離血清備用。3 .標(biāo)本儲(chǔ)存：2-8保存不應(yīng)超過(guò)1周，-20不應(yīng)超過(guò)3個(gè)月，-70C長(zhǎng)期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。4 .標(biāo)本運(yùn)輸：密封，室溫運(yùn)輸。5 .標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：污染、標(biāo)本量不足、嚴(yán)重溶血或。測(cè)檢項(xiàng)此作宜不本標(biāo)

2、血脂.6 .試劑6.1 試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒6.2 試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司。6 .3包裝規(guī)格：96Test/Kit6.4 試劑盒組成：HBeAg微孔板,HBeAg酶標(biāo)記抗原,HBeAg陽(yáng)性對(duì)照血清,HBeAg陰性對(duì)照血清，濃縮洗滌液，底物A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。6.5 試劑儲(chǔ)存條件及有效期：2-8C避光保存，有效期9個(gè)月。7 .儀器設(shè)備7.4 儀器名稱：自動(dòng)酶標(biāo)儀7.5 儀器廠家：KHB7.6 儀器型號(hào)：ST3608 .操作步驟8.4 平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫。存封袋封自以時(shí)及者余，后封開(kāi)板孔，微）2518-（.8.5 配液：濃縮洗

3、滌液配制前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解），濃縮洗滌液和蒸儲(chǔ)水或去離子水按1：19稀釋后使用。8.6 編號(hào)：將微孔條固定于支架，按序編號(hào)。8.7 加樣：分別用加樣器在對(duì)照孔中加入陰、陽(yáng)性對(duì)照血清各50?1于相應(yīng)孔中。8.8 加醐：分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體50?1,輕拍混勻。8.9 溫育：置37溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。8.10 洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時(shí)間）。8.11 顯色：每孔加入底物A、B各50。1,輕拍混勻，置37暗處15分鐘。8.12 終止：每孔加終止液50?1,混勻。8.10測(cè)定：用酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450/630nm測(cè)定各

4、孔0D值(用單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)需設(shè)空白記并，定測(cè)成完內(nèi)鐘分30,孔一照對(duì).錄結(jié)果)。9 .結(jié)果判斷與分析9.4 臨界值(C.0.)的計(jì)算：臨界值二陰性對(duì)照孔0D值NX2.1,陰性對(duì)照0D均值大于0.1時(shí)應(yīng)重新試驗(yàn)，小于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。9.5 結(jié)果判定：樣品0D值S/C.0二1者為HBeAg陽(yáng)性樣品0D值S/C.01者為HBeAg陰性10 .質(zhì)量控制:每次試驗(yàn)用含量為2NCU/ml的HBeAg質(zhì)控血清同步檢測(cè),S/C0值應(yīng)在控制范圍內(nèi)；如失控，則要檢查試劑效期、儲(chǔ)臧溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗(yàn)使其在控。11 .參考范圍：陰性或陽(yáng)性12 .臨床意義：HBeAg陽(yáng)性可作

5、為體內(nèi)HBV處在復(fù)制狀態(tài)及血清具有傳染性的一個(gè)標(biāo)志；持續(xù)陽(yáng)性則揭示轉(zhuǎn)為慢性。o好性異特，高度敏靈：能性作操3.1.14 .方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗原的含量沒(méi)有一定正相關(guān)。15 .注意事項(xiàng)15.1 每板建議設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照血清各兩孔，設(shè)空白對(duì)照時(shí)，不加樣品及酶標(biāo)記抗體，其余各步相同。15.2 洗滌時(shí)各孔均須加滿，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈。15.3 加試劑前應(yīng)將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應(yīng)棄去12滴。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準(zhǔn)確。注意勿將試劑滴在孔壁上。15.4 所有樣品都應(yīng)按傳染源處理。15.5 封口膜使用說(shuō)明15.5.1 微孔板拆封后，在取出當(dāng)天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受潮。在封存時(shí)，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部,以免影響其透光性。其免避可，口孔蓋覆膜口封以，時(shí)育溫板孔微15.5.2他因素對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的非預(yù)期的影響。15.6 不同品名、不同批號(hào)的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。16 .當(dāng)檢測(cè)系統(tǒng)（儀器）不能工作時(shí)，所采取的補(bǔ)救措施:應(yīng)保證所有操作步驟正確無(wú)誤；可以比對(duì)陰陽(yáng)對(duì)照，肉眼判讀；無(wú)法準(zhǔn)確判讀者，應(yīng)留樣待系統(tǒng)正常后復(fù)查。17 .參考文獻(xiàn)：中