高效液相色譜法測定苯甲酸的不確定度分析報告

1、食品（金標特級生抽）中苯甲酸含量測量不確定度評定報告報告編號：NT-BQ-2010-02編制：日期：年 月日批準：日期：年 月日濟寧耐特食品有限公司品管部實驗室食品（金標特級生抽）中苯甲酸含量測定測量不確定度評定報告一、概述1 樣品編號：100771 ;環(huán)境條件：溫度20C ;相對濕度40%2. 檢測儀器設備：2.1高效液相色譜儀 Waters e2695設備編號SB-05-082,定量重復性0.7%;2.2分析天平XS105,設備編號SB-05-087,精細量程041g,最小分度值0.00001g, 050g 示值誤差為±）.00001g；2.3 A級刻度吸管，1mL，允差為

2、77;0.007mL;2.4 A級容量瓶，100 mL，允差為±0.1mL;2.5 A級容量瓶，50mL ,允差為±）.05mL3. 檢測試劑：3.1苯甲酸標準品：購自中國藥品生物制品檢定所；3.2乙酸銨（分析純）、色譜級甲醇、超純水。4. 檢測依據(jù)：GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的測定5. 檢測人員：相麗新6. 檢測時間：2010年12月02日二、檢測原理依據(jù)GB/T5009.29-2003,樣品經(jīng)前處理后，進高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時間和峰面積進行定性和定量。三、測量步驟3.1苯甲酸標準使用液的配制標準貯備液將苯甲酸標準品從冰箱中

3、取出放置到室溫，準確稱取50.0mg,置于100mL容量瓶中，用色譜甲醇溶解并定容，搖勻，冷藏于冰箱，作為標準品貯備液。苯甲酸標準使用液將苯甲酸標準貯備液從冰箱中取出放置至室溫，準確吸取1.00mL,至50mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容，混勻后備用。3.2樣品前處理移取1mL金標特級生抽醬油于去皮燒杯中準確稱量，先后加入超純水，2%氫氧化鈉 溶液、10%硫酸銅溶液5mL,絮凝沉淀去除蛋白等雜質(zhì)后，用超純水定容至 50mL，搖勻, 取適量樣品于10000r/min的條件下高速離心3min，上清液經(jīng)0.45um濾膜過濾后，作為待 檢測樣品，同時做空白對照。3.3試樣測定按Waters高效液相

4、色譜操作規(guī)程規(guī)定的程序開機平衡系統(tǒng)，待基線穩(wěn)定后，取制備好的待測樣品液進樣分析，記錄色譜圖，用面積百分比法計算檢測結果。4數(shù)學模型試樣中苯甲酸含量計算公式如下：、一 AxCsxVX1 =mx As 匯 1000式中：Xl-樣品中苯甲酸含量，單位為克每千克（g/kg）；A-樣品液中苯甲酸峰面積；A s-標準使用液中苯甲酸峰面積；Cs-標準使用液濃度，單位微克每毫升（卩g/nL）V-樣品最終定容體積，單位為毫升（mL）m-樣品質(zhì)量，單位為克（g）5測量不定度來源5.1稱取樣品質(zhì)量產(chǎn)生的不確定度Um ；5.2試樣前處理定容時引起的不確定度Uv；5.3標準溶液配制引起的不確定度 ucs；容量瓶定容引起

5、的不確定度分度吸管移液引起的不確定度5.4平行試驗重復性產(chǎn)生的不確定度 U0 ；5.5測量時由Waters高效液相色譜儀產(chǎn)生的不確定度U1 ；6不確定度傳播律采用相對標準不確定度合成公式計算：NUyi2（y）二' Uyi2（Xi）=17測量結果及標準差對配制好的10ug/mL的苯甲酸標準品進行了六次重復測量，其測量結果及標準偏差如表 7-1：表7-1苯甲酸標準品峰面積六次重復測量結果序號樣品濃度(ug/mL)保留時間(min)峰面積(伏.秒)1103.94724385223.94126884133.93527060443.93826875653.93527067563.93426833

6、0平均值3.938265176標準偏差0.00510493.91在重復性條件下，對金標特級生抽樣品進行八次測量，八次測量數(shù)據(jù)如表7-2:表7-2八次平行測量結果序號樣品質(zhì)量(g)定容體積(mL)樣品峰面積(伏.秒)標準品峰面 積(伏秒)標準品濃度(ug/mL)計算結果(g/kg)11.1917250.0031667026517610.00.50121.1957950.0032364426517610.00.51031.1932750.0032276626517610.00.51041.1917050.0031855526517610.00.50451.1917250.0032477826517

7、610.00.51461.1957350.0032131226517610.00.50771.1934250.0032364426517610.00.51181.1953250.0032548326517610.00.513平均值0.51標準偏差0.0048不確定度分量的量化8.1稱取樣品質(zhì)量產(chǎn)生的相對標準不確定度Umr用十萬分之一天平稱量樣品，校準證書給出天平的重復性誤差為 0.0000 g,在50g量程范圍內(nèi)，天平的示值誤差為±).00001g,兩次稱量獲得結果，按均勻分布(矩形分布)考慮,Um=0.00001-6=5.7 X0 g5.710-7Umr=1.2 X0508.2樣品

8、定容引起的相對標準不確定度 Uvr體積的標準測量不確定度分量主要有三部分構成；其一，容器體積的不確定度；其二，充滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定 度。本次試驗樣品定量總體積為50mL,采用50mLA級容量瓶定容，允許差為±).05mL,按 照均勻分布換算成標準偏差為0.05/-、3 =0.029 ml;液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估讀 誤差為0.005X 50=0.25mL,按照均勻分布計算0.25人3 =0.14mL;容量瓶和溶液溫度與校正 時的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗中的環(huán)境溫度與校準時基本相同，此因素引 起的不確定度可忽略

9、不計。以上兩項合成得出：Uv= J0.0292 +0.142 =0.14mL0.14Uvr=0.0028508.3標準使用液Cs的相對標準不確定度分量UCsr10ug/mL苯甲酸標準使用液是由標準品稱量制得標準貯備液后經(jīng)過一步稀釋50倍得到的。不確定度來源包括由稱量引起的不確定度，定容 100mL引起的不確定度，1mL移 液管移液引起的不確定度，定容 50mL引起的不確定度。由稱量標品引起的相對標準不確定度 U1mr由稱量標品引起的相對標準不確定度計算方法同6.1，則 U1mr= Umr=1.2 X0由定容引起的相對標準不確定度 U1vr此相對標準不確定度分量主要有三部分構成；其一，容器體積的

10、不確定度；其二，充 滿液體至容器刻度的估讀誤差；其三是容器和溶液溫度與校正溫度不同引起的不確定度。本次試驗標品定量總體積為100mL，采用100mLA級容量瓶定容，允許差為 ±).1mL, 按照均勻分布換算成標準偏差為 0.1/-、3 =0.058 m1 ;液體充滿至容量瓶刻度的不確定度估 讀誤差為0.005X 100=0.5,按照均勻分布計算0.5/.3=0.29mL;容量瓶和溶液溫度與校正 時的溫度不同引起的體積不確定度，本次試驗中的環(huán)境溫度與校準時相同，此因素引起的 不確定度可忽略不計。以上兩項合成得出：U1v=0.30mL0.30u 1vr=0.003由定容引起的相對標準不確

11、定度U2vr此相對標準不確定度的計算同6.2,則U2v= Uv=0.14mL0.14 門 ccccU2vr=0.002850分度吸管相對標準不確定度u3vr的分析用1m1有分度吸管量取溶液，其不確定度主要包括三個部分：第一，吸管體積的不確 定度，給定容器容量允差為±).007mL ；按照均勻分布換算成標準偏差為 0.007八3=0.004mL;第二，充滿液體至吸管刻度的估讀誤差，估計為±.005X V1，轉化成標準偏差，按均勻分布計算為0.005 X V1/ .3=0.005 3=0.003mL;第三，分度吸管和溶液溫度與校正時的溫度不同引起的體積膨脹不確定度，本次試驗中的

12、環(huán)境溫度與校準時相 同，此因素引起的不確定度可忽略不計以上兩項合成得出：U3v=0.005mLU3vr=0.005將以上4項不確定度分量代入公式，得到列表如下：標淮溶液配制引起的標準不確定度項目描述量值標準不確定度相對標準不確定度U1mr標準品稱量質(zhì)量50g5.7 X0-6-71.2 X0U 1vr100mL容量瓶體積100mL0.30mL0.003U2vr50mL容量瓶體積50mL0.14mL0.0028U3vr1mL分度吸管體積1mL0.005mL0.005相對合成Ucsr0.0064合成u(Cs)0.064ug/mL8.4平行試驗重復性引起的相對標準不確定度U0r的計算由表7-2可知，金

13、標特級生抽樣品中，樣品八次重復測量的標準偏差為0.004g/kg，樣品苯甲酸含量測量平均值為0.51 g/kg，則其測量標準不確定度為U0= 0004 =0.0014 g/kg，0 0014相對標準不確定度為U0r1= 0=0.0028。0.51&5由Waters高效液相色譜儀產(chǎn)生的相對標準不確定度uir由校準證書上可知，Waters高效液相色譜儀的定量重復性為 0.7%，則其相對擴展不確定度為0.7%,按均勻分布計算，則液相色譜儀的相對標準不確定度為 uir=0.7%/、. 3 =0.0040。9相對標準不確定度分量一覽表相對標準不確定度不確定度來源相對標準不確 定度量值Umr樣品稱量1.2 >10-7Uvr樣品定容0.0028UCsr標準溶液配制0.0064U0r平行實驗測量重復性0.0028U1r液相色譜儀0.0040相對合成Ur0.0085N由U（y）=為UreiS）可得:i 土U r = Umr ' Uvr ' Ucsr ' U°r ' Uir=（1.2 10）2 0.00282 0.00642 0.00282 0.00402=0.008510合成標準不確定度由上計算可知，金標特級生抽樣品的苯甲酸