紫外分光光度法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件紫外分光光度法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)SOP?09?1008版本2 頁碼1/4編制日期替代/審定日期頒發(fā)質(zhì)量保障部批準(zhǔn)日期生效年1月20日發(fā)放質(zhì)保中心目的：建立紫外分光度法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：用于成品、原輔料鑒別、檢查和含量測定1 ?儀器：紫外分光光度計(jì)主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、記錄儀、顯示系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。為了滿足紫外可見光區(qū)全波長范圍的測定，儀器備有二種光源，即笊燈和碘鴇燈，前者用于紫外區(qū)，后者用于可見光區(qū)2 .檢定2.1 波長準(zhǔn)確定2.1.1 波長準(zhǔn)確度的允差范圍：雙光束光柵型紫外一可見分光光度計(jì)波長準(zhǔn)確度允許誤差為土 0.5mm。單元束棱鏡型 350mm 處土

2、0.7nm, 500nm 處土 2.0nm , 700nm 土 4.8 nm2.2 吸收度準(zhǔn)確度：精密稱取在120 C干燥至恒重的基準(zhǔn)重銘酸鉀約60mg,置1000ml量瓶中，用硫酸液(0.005mol/l )為空白，在235、257、313、350nm 分別測定吸收度，然后換算成E1%1cm ,測得值應(yīng)符合下表中規(guī)定的允差范圍(土 1%),國際藥 典規(guī)定的允差亦為土 1%。波長（nm ）吸收強(qiáng)度吸收系數(shù)（E1%/1cm ）235最小124.5257最大144.0313最小48.62分光光度法允差范圍允差范圍123.3- 125.7142.6- 145.448.3-49.11350最大106.

3、6105.5 -107.7分辨率、雜散光、基線平直度、穩(wěn)定度、絕緣電阻等項(xiàng)檢定，按中華人民共和國國家計(jì)量檢定規(guī)程JJ6682? 90 （雙光束紫外可見分光光度計(jì)檢定規(guī)程）執(zhí)行，并 應(yīng)符合有關(guān)項(xiàng)下的規(guī)定。日常常規(guī)測定主要是對(duì)以上兩項(xiàng)時(shí)常檢查。3.樣品測定操作法1.1 吸收系數(shù)測定（性狀項(xiàng)下）按各該品種項(xiàng)下規(guī)定的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長（參見4.8項(xiàng)）測定其吸收度，并計(jì)算吸收系數(shù)，應(yīng)符合規(guī)定的范圍。1.2 鑒別及檢查：按各該品種項(xiàng)下的規(guī)定，測定供試品溶液在有關(guān)波長處的最 小及 最大吸收，有的并須測定其各最大吸收峰值或最大吸收與最小吸收的比值，均應(yīng)符合規(guī)定。1.3 含量測定1.3.1 對(duì)照品

4、比較法：按各該品種項(xiàng)下規(guī)定的方法，分別配制供試品溶液 和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測成份的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示 量的（100 10）%以內(nèi)，用同一溶劑，在規(guī)定的波長處測定供試品溶液和對(duì)照品溶 液的吸收度。1.3.2 吸收系數(shù)法：按各該品種項(xiàng)下配制供試品溶液，在規(guī)定的波長及波 長土 Inn處測定其吸收度，按各該品種在規(guī)定條件下給出的吸收系數(shù)計(jì)算含量。采用吸收系數(shù)法應(yīng)對(duì)儀器進(jìn)行校正后測定，如為測定新品種的吸收系數(shù)，需按 “吸收系數(shù)測定法”的規(guī)定進(jìn)行。4 .注意事項(xiàng)4.1 試驗(yàn)中所用的量瓶、移液管均應(yīng)檢定校正，洗凈后使用。4.2 使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品，參比及空白溶液的

5、吸收池， 當(dāng) 裝入同一溶劑時(shí)，在規(guī)定測定吸收池的透光率，如透光率相差在 0.3%以下者可 配對(duì) 使用，否則必須加以校正。4.3 取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池體積的4/5為度， 使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋， 透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈， 檢視應(yīng)無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑擦鏡紙擦拭, 然后再用干擦鏡紙拭凈。 吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入的方向相同。 使用后用 溶劑及水洗干凈， 晾干防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā) 煙硝酸（3: 1L/L）混合液稍加浸泡后，洗凈 備用。如用銘酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面， 并 應(yīng)充分

6、用水沖洗，以防銘酸鉀吸附于吸收池表面。4.4 測定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合要求，可用Icm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白 （即參比光路中不放置任何物質(zhì)）測定其吸收 度，應(yīng)符合下表規(guī)定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸收度的規(guī)定波長范圍（nm ） 220 ? 240 241 250 25I 300300 以上吸收度 0.4 0.2 0.10.05每次測定時(shí)應(yīng)用同一廠牌批號(hào)，混合均勻的1批溶劑。4.5 稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀 釋時(shí) 所取容積一般應(yīng)不少于5ml。含量測定供試品應(yīng)稱取2份，如為對(duì)照品比照 法。對(duì)照 品一股也應(yīng)稱

7、取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品 2份，平行操作，每份結(jié)果對(duì)平 均值的偏差應(yīng)在土 0.5%以內(nèi)。作鑒別或或檢查可取樣品1份。4.6 供試品測試溶液濃度，除各該品種項(xiàng)下已有注明者外，供試品溶液的吸收 度以 在0.3-0.7之間為宜，吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸 收度線性 范圍，配制合適的讀烽濃度。4.7 選用儀器的狹縫譜寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測的吸收度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品吸收度一再增加為準(zhǔn)，對(duì)于中國藥典紫外測定的大部分品種，可以使用 2nm縫寬，但對(duì)某些品種如表青霉 素鉀及鈉的吸 收度檢查則需用1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收

8、度會(huì)偏低。4.8 測定時(shí)除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰土 2nm外，再測幾點(diǎn)吸度，以核對(duì) 供品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī) 定外吸收度最大波長應(yīng)該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長土1nm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣 的同一性，純度以及值儀器波長的準(zhǔn)確度。5 .結(jié)果計(jì)算5.1 對(duì)照品比較法：或根據(jù)供試品溶液及對(duì)照品溶液的吸收度懷對(duì)照品溶液的濃度以正比法算出供試品溶液的濃度，再計(jì)算含量A樣品：A對(duì)照二C樣品：C對(duì)照C樣品二A樣品XC對(duì)照/A對(duì)照式中：A為吸收度值；C為測試液濃度 （以mg/ml計(jì)）5.2 吸收系數(shù)法：中國藥典規(guī)定的吸收系數(shù)，系指E1%/lcm,即在指定波長時(shí)，光路長度為lcm ,試樣濃度換算為1% （g/mL ）時(shí)的吸收度值，故應(yīng)先求生被測樣品的 F1%/lcm值，再與規(guī)定的 E1%/1cm 值比較，可計(jì)算由供試品的含量。AE1/1cm （樣品）=CX L式中：A為供試品溶液測得的吸收度值；C為供試品溶液的百分濃