食品科學與工程畢業(yè)論文設計不同熟制方法對而制品抗氧化活性的影響實驗設計

1、食品科學與工程畢業(yè)論文設計不同熟制方法對面制品抗氧化活性的影響實驗設計一、原料及設備1、材料：面粉、蒸熟后的成品（饅頭）、烤熟后的成品（面包）2、設備：分光光 度計電磁爐烤箱二、實驗步驟（一）、材料處理面粉加水和成面團，通過蒸熟和烤熟，將面粉和熟制后的饅頭、面包，干燥，然后粉 碎并過0.25nm篩。放在干燥器內(nèi)避光保存。（二）、多酚1、多酚的提取準確稱取面粉、饅頭、面包各0.50g。分別加入體積分數(shù)為80研勺乙醇中，料液比 1:15 （g/mL） , 60度恒溫水浴4小時，用80%的乙醇定容到100mL,過濾，濾液待測。2、 多酚的測定（1）、原理以沒食子酸為主的多酚類化合物在堿性溶液中可將鋁

2、鉗酸還原成藍色化合物，該化合 物在765nm處有最大吸收，旦吸收值與多酚化合物含量成正比，以沒食子酸為標準物質(zhì)， 標準曲線法定量。（2）、試劑鋁酸鈉一一鋁酸鈉混合溶液:稱取50. 0g鴇酸鈉，12. 5g鋁酸鈉,用350ml水溶解到 1000ml的回流瓶中，加入25ml磷酸及501nl鹽酸,充分混勻，小火加熱回流兩小時,再加 入75g硫酸鋰、25ml蒸鏘水、數(shù)滴溟水，然后繼續(xù)沸騰15min （至溟水完全揮發(fā)為止）， 冷卻后，轉(zhuǎn)入500ml容量瓶定容，過濾，至棕色瓶中保存，使用時稀釋一倍。75g/L碳酸鈉溶液：稱取37. 5g無水碳酸鈉溶于250ml溫水中，混勻，冷卻，稀釋至 500ml,過濾到

3、儲液瓶中備用。沒食子酸標準儲備液：準確稱取0.1100g水合沒食子酸，溶解并定容至100ml,此 溶液沒食子酸質(zhì)量濃度為1000mg/L,在冰箱中2一3度可保存五天。沒食子酸標準使用液：分別稱取1000mg/L的沒食子酸標準儲備液0、1.0ml、2.0ml、 3.0ml、4. 0ml和5. 0ml至100ml容量瓶中，定容,溶液質(zhì)量濃度為0、10. Omg/L.20. Omg/L. 30. Omg/L、40. Omg/L、50. Omg/Lo （3）標準曲線的繪制：吸取 0、10. Omg/L. 20. Omg/L、30. Omg/L. 40. Omg/L、50. Omg/L的沒食子酸標準使用

4、液各1. 0ml,分別加 5. 0ml水，1.0ml鐺酸鈉一一鋁酸鈉混合溶液和3. 0ml碳酸鈉溶液，混勻，沒食子酸標準 溶液濃度分別為 0、L Omg/L、2. Omg/L, 3. Omg/L、4. Omg/L、5. Omg/L,顯色，放置 2 小時, 以標準曲線的“0”管為空白，在765nm波長下測定標準溶液的吸光度，以沒食子酸濃度 為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。（4）樣品的測定：吸取1. 0ml試樣提取液，分別加入5. 0ml水，1. 0ml鋁酸鈉一一鉗 酸鈉混合溶液和3. 0ml碳酸鈉溶液，顯色，放置2小時，以標準曲線的“0”管為空白， 在763nm波長下測定試樣溶液的吸光

5、度，根據(jù)標準曲線求出試樣溶液的多酚濃度，以沒食 子酸計，如果吸光度值超過5. Omg/L沒食子酸的吸光度時，將樣品提取液稀釋后重新測定。做三次平行試驗。計算多酚含量的公式 X=（cX10XA）/mX試樣中多酚含量，mg/kg或mg/L： C試樣測定液中沒食子酸的濃度，mg/L；10一一試樣測定液定容體積，ml： A一一樣品稀釋倍數(shù)；m試樣質(zhì)量或體積，g或ml。（三）、黃酮1、黃酮的提取準確稱取面粉、饅頭、面包各0.50g。分別加入體積分數(shù)為60席的乙醇中，料液比 1:25 （g/mL） , 50度恒溫水浴2. 5小時，用60%的乙醇定容到100mL,過濾，濾液待測。 2、黃酮的測定（1）、原理

6、黃酮類物質(zhì)與亞硝酸鈉，硝酸鋁等反應生成有色物質(zhì)，這種物質(zhì)在510nm處有最大吸 收，且吸收值與黃酮類物質(zhì)的含量成正比，以蘆丁為標準物質(zhì)，標準曲線法定量。（2）、 試劑5與亞硝酸鈉溶液：準確稱取5. 00g亞硝酸鈉，溶解，用蒸飾水定容到100mL。10縱硝 酸鋁溶液：準確稱取10. 00g硝酸鋁，溶解，用蒸飾水定容到100mL。4%氫氧化鈉溶液： 準確稱取4. 00g氫氧化鈉，溶解，用蒸飾水定容到100mLe蘆丁標準溶液：準確稱量 13.2mg蘆丁，用60%乙醇定容到25mL容量瓶作為標準溶液。（3）、標準曲線繪制準確吸取0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0 mL蘆丁標準溶液，放

7、入10mL容量瓶內(nèi) （寫明標記），分別加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 mL的60%乙醇溶液；再加入5與亞 硝酸鈉溶液0. 5mL搖勻，放置6min：加入10%硝酸鋁溶液0. 5mL,放置6min后；加入4% 氫氧化鈉溶液4. 0mL,加60%乙醇定容，搖勻后，放置15min：（掃描找到最大吸收）在 510nm處測定吸光度。用0.0mL作為空白，用蘆丁含量的濃度作為橫坐標，縱坐標作為一 定濃度下所對應的吸光度，作標準曲線。（4）、樣品測定吸取樣品量（根據(jù)樣品的吸光度調(diào)整）1. 0mL,放入10mL容量瓶內(nèi)（寫明標記），用 60%乙醇加到2 0mL：加入5峪亞硝酸鈉溶液0.5mL搖

8、勻，放置6min：加入10%硝酸鋁,溶 液0.3mL,放置6min后：加入4%氫氧化鈉溶液4. 0mL,搖勻后，加60席乙醵定容，放置 15min：在510nm處測定吸光度。根據(jù)標準曲線計算總黃酮的含量。樣品中黃酮含量以蘆 丁的含量為參照，單位為mg/g.。做三次平行試驗。A總黃酮含量二M100X稀釋倍數(shù)A為標準曲線中的含量；M為樣品的質(zhì)量（mg）（四）、抗氧化測定1、試劑配制0. 04g/L的DPPH溶液：準確稱取O.OlgDPPH用無水乙醇定容到250mL。pH=3. 6的醋 酸鈉緩沖液：取醋酸鈉5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀釋至250ml o10mmol/L溶解在40mmol/LH

9、Cl中的三毗咤三嗪溶液：準確稱取0. 7759g三毗咤三嗪， 用 40mmol/LHCl 定容到 250mL。20mmol/L FeC13溶液：準確稱取0. 8125g FeC13,用蒸你水定容到250mL。FeS04溶 液：準確稱取0.38g FeS04,用蒸儲水定容到250 mL,制成10 mmol/L的FeS04溶液。分 別準確吸取 2. 00、4.00、6.00、8.00、10. 00mL 10 mmol/L 的 FeS04 溶液,定容到 100 mL,得到 0.2、0.4、0.6、0. 8 和 1. 0 mmol/LFeS04 標準液。0. 2mol/L pH6. 6的磷酸鹽緩沖溶液

10、:取磷酸二氫鈉1.74g,磷酸氫二鈉2. 7g,氯化鈉 1.7g,定容到 400mLe盟的六制合鐵酸鉀溶液：準確稱取L 00g六制合鐵酸鉀，加水定容到100mL。10%的 三氯乙酸溶液：準確稱取10. 00g三氯乙酸，加水定容到100mL。0.現(xiàn)的三氯化鐵溶液： 準確稱取0. 10g三氯化鐵,加水定容到100mL。1%的Vc溶液:準確稱取1. OOgVc,加水 定容到100mL?，F(xiàn)的BHT溶液：準確稱取1. OOgBHT,用25%乙醇定容到100mL.2、抗氧化測定（1）、DPPH清除能力的測定在避光條件下,取:L0避的提取液于試管中,加入3ml, 0. 04g/L的DPPH溶液,搖 勻，在室

11、溫下靜置30 min。在517 nm下測其吸光值A1;同時測定1. 0ml無水乙醇與3 ml 該DPPH溶液混合后的吸光值Ac；以及1. 0ml不同濃度樣液與3ml無水乙醵混合液的吸光 值A2,平行測定3次，以Vc和BHT為對照。按照下式計算DPPH 的清除能力。DPPH 的清除率0）=1-（ Al - A2 ） / Ac X 100%式中：A1為DPPH溶液加樣液的吸光值; A2為無水乙醇加樣液的吸光值；Ac為DPPH溶液加無水乙醇的吸光值。（2）、高價鐵還原力的測定（FRAP）在避光條件下,取0.1ml的提取液,加入1.8mlTPTZ工作液（由新配制的300mmol/L pH=3.6的醋酸

12、鈉緩沖液、10mmol/L溶解在40mmol/LHCl中的三毗咤三嗪溶液、20mmol/LFeC13按10:1:1的體積比混合），再加入3. 1 ml的蒸儲水,37水浴30min,在593nm 處測定其吸光值，平行測定3次。以Vc和BHT做陽性對照。以FeS04溶液做標曲建立回歸方程，結(jié)果表示mgFe （I【）/g干重。取 0.2、0.4、0.6、0. 8 和 1. 0 mmol/LFeS04 標準液各 0. 1mL 加入 1. 8ml FRAP 工作 液，再加入3. 1 ml蒸偏水，混勻，37水浴30min,測其在593nm處的吸光值，用超純水 調(diào)零，繪制標準曲線。樣品的抗氧化活性（FRAP值）以達到相同吸光度所需FeS04的mmol 數(shù)表示。（3）、還原力的測定在避光條件下，取1支20ml具塞試管，加入2. 5ml的樣品溶液,依次加入2. 5ml 0. 2mol/L pH6. 6的磷酸鹽緩沖溶液、2. 5ml通的六制合鐵酸鉀溶液之后混勻，在50條 件下水浴加熱20min,在水龍頭下快速冷卻后再加入2. 5ml 10%的三氯乙酸溶液，混勻后 在2800r/min條件下離心lOmin。分別取2. 5 ml上清液于10ml具塞試管中,加入2. 5 ml 蒸飾水和0. 5ml 0.鳴的三氯化鐵溶液，充分混勻，靜置10 min后，在700nm處測定吸光