趙海龍畢業(yè)論文

1、編號：編號：119070241015本 科 畢 業(yè) 論 文 題 目：高粱葉枯病的室內毒力測定 學 院： 農學院 專 業(yè)： 植物保護 年級： 2011 級 姓 名： 趙海龍 指導教師： 趙艷琴 完成日期： 2015 年 5 月 目 錄 摘要1Abstract2引言31 材料和方法31.1 供試材料31.2 室內藥劑篩選及配制41.3 試驗方法52 結果與分析62.1 單劑抑制率的測定62.2 孢子抑制率及其顯著性分析82.3 毒力回歸方程的計算113 結論與討論12參考文獻13致謝14內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文0摘 要高粱葉枯病是高粱上一種真菌病害，本文主要是以高粱葉枯病為材料，采用生長速率法和

2、孢子萌發(fā)抑制法對常用的五種殺菌劑進行室內毒力測定，結果表明：對于高粱葉枯 2 號菌株，50%異菌脲 500 倍液 0.01 和 0.05 顯著水平下，該病菌的生長速率均為最低，孢子抑制率最高，菌落生長抑制率最高，是該病菌的有效防治藥劑，而在 50%嘧菌酯 400 倍液和 3%中生菌素在 0.01 顯著水平下下生長速率最高，菌落生長抑制率最低，孢子抑制率最低，對于防治該病并無明顯效果；對于高粱葉枯 4 號菌株，50%異菌脲 500 倍液 0.01 和 0.05 顯著水平下該病菌的生長速率最低，孢子抑制率最高，菌落生長抑制率最高，是防治該病菌的有效藥劑，而在 50%嘧菌酯 400 倍液和 800

3、倍液下該菌株表現出生長促進作用。關鍵詞：高粱葉枯?。粴⒕鷦?；毒力測定；萌發(fā)抑制率內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文1AbstractSorghum leaf blight is a new kind of fungi diseases on sorghum。This paper is based on sorghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity。Th

4、e results show that：For the sorghum leaf blight No.2 strain，the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid under the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times li

5、quid and the Zhongshengmycin 3% w.p. liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the highest growth rate and the lowest colony growth inhibition rate。For the sorghum leaf blight No.4 strain， the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited th

6、e lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times and 800 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05，the strain showed growth promoting effect。Key Words:sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measu

7、rement；germination inhibition rate內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文2引 言高粱屬禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、蘆粟、茭子、木稷等，高粱是釀酒的重要原料，瀘州特曲、茅臺、竹葉青等名酒都是以高粱為主要原料釀造的【1】。高粱在中國的栽培面積很廣，其中山西地區(qū)是高粱的主產量區(qū)，在內蒙地區(qū)，高粱的的產量也占有很大的比重。隨著高粱大面積的種植，一方面，高粱病害的蔓延也逐漸增長。據統(tǒng)計，目前高粱病害種類高達 30 多種，其主要為害以黑穗病，葉斑病，炭疽病和大斑病為主【2】，高粱散黑穗病在我國各高粱產區(qū)普遍發(fā)病，在華北、東北發(fā)病較重，近幾年來嚴重影響高粱產量【3】。另一方面

8、，高粱上的新病害也逐步增多，高粱葉枯病在一些地區(qū)也被發(fā)現。高粱葉枯病是由細極鏈格孢（Alternaria tenuissima）引起的真菌性病害，屬于半知菌亞門半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬，鏈格孢屬是全球分布最廣，經濟上重要的半知菌類真菌之一，其有性態(tài)在自然條件下難以見到，僅有十余種鏈格孢的有性態(tài)在實驗室條件下被發(fā)現；其菌絲黑色，大量存在于土壤、空氣和作為培養(yǎng)料的各種有機質上，其孢子通過空氣傳播【4】。由鏈格孢引起的病害一般都屬于流行性較強的病害。高粱葉枯病主要危害的是高粱的葉片，影響其光合作用，從而使高粱產量降低。在發(fā)病初期，高粱葉片上形成梭形斑，上面長有白色柱狀霉層，由于濕度的增大，在后

9、發(fā)病期病斑的邊緣出現黃褐色輪紋。高粱葉枯病是高粱上一種新的病害，目前還沒有特效的防治藥劑，對此，本文采用菌絲生長速率法和孢子抑制率法對五種殺菌劑對于高粱葉枯病菌的室內毒力進行研究，篩選內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文3出防治該病害有效藥劑，用來指導田間生產，從而提高產量，增加經濟效益。1 材料和方法 1.11.1 供試材料供試材料1.1.11.1.1 供試菌供試菌種種采集于內蒙古通遼市內蒙古民族大學農學院試驗田，進行分離純化【5】獲得兩個菌種：高粱葉枯 2 號菌種和高粱葉枯 4 號菌種，并保存于冷藏箱備用。1.1.21.1.2 供試藥劑及有效成分供試藥劑及有效成分1.1.31.1.3 培養(yǎng)基制備原料

10、培養(yǎng)基制備原料 本試驗均采用 PDA 培養(yǎng)基進行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)基配制原料包括馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，瓊脂 20g 和蒸餾水 1000ml。1.1.41.1.4 試驗主要儀器試驗主要儀器設備設備超凈工作臺，LRHS-250B 恒溫恒濕培養(yǎng)箱（上海賀德實驗設備有限公司），立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱（山東濰坊醫(yī)療器械廠），101 型電熱鼓風干燥箱（江蘇省通州市通用科技儀器廠），萬分之一電子天平(上海精密科學儀器公司)，電子顯微鏡( 日本尼康公司)，高壓滅菌鍋（上海三申），酒精燈，培養(yǎng)皿，移液管，接種環(huán)，打孔器，直尺，錐形瓶，燒杯，攪拌棒，電磁爐，鑷子等。編 號藥劑名稱有效成分劑型防治對象生產廠家

11、1異菌脲50%可濕性粉劑小麥赤霉病海南正業(yè)中農高科技股份有限公司2多菌靈50%可濕性粉劑 水果蔬菜等多種病害利民化工3烯酰福美雙55%水分散粒劑霜霉病青島瀚生科技4中生菌素3%可濕性粉劑辣椒疫病利民化工5嘧菌酯50%可濕性粉劑黃瓜枯萎病陜西美邦農藥內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文41.21.2 試驗室內藥劑梯度調節(jié)及培養(yǎng)基的配制試驗室內藥劑梯度調節(jié)及培養(yǎng)基的配制1.2.11.2.1 PDAPDA 培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的制備制備按照 PDA 培養(yǎng)基的制備配方，配制 1000ml 培養(yǎng)基五組，每組分裝至 3 個三角瓶中，封裝完畢后，用高壓滅菌鍋 121滅菌 30min 后取出冷卻備用。1.2.21.2.2 藥

12、劑梯度調節(jié)及配制方案藥劑梯度調節(jié)及配制方案本試驗的每個藥劑均設定五個梯度，一個對照，每個梯度三次重復。具體配制為：50%異菌脲可濕性粉劑配制 500 倍母液，配制成 500、1000、1500、2000、2500倍液；50%多菌靈可濕性粉劑配制 400 倍母液，配制成 400、600、800、1000、1200倍液；55%烯酰福美雙水分散粒劑配制 400 倍母液，配成400、800、1000、1200、1600 倍液；3%中生菌素可濕性粉劑配制成 400 倍母液，配制成 400、600、800、1000、1200 倍液；50%嘧菌酯可濕性粉劑配制 400 倍母液，配成 400、800、1000

13、、1200、1600 倍液。1.31.3 試驗方法試驗方法1.3.11.3.1 生長速率法生長速率法本試驗需在超凈工作臺上進行，因此在實驗前需要對無菌工作室和超凈工作臺進行 30min 左右的紫光燈滅菌，確保將空氣中的雜菌降到最低。并且試驗所用的培養(yǎng)皿和其他儀器都要放進干熱滅菌箱 165滅菌 1h，冷卻后取出備用。首先將之前配制的培養(yǎng)基水浴加熱溶解，加入少許的抗生素后冷卻備用。在無菌條件下，將上述配置好的藥劑取 1ml 放入 9ml 冷卻至約 50的 PDA 培養(yǎng)基中混合均勻，倒入消毒滅菌的培養(yǎng)皿中制成帶藥的培養(yǎng)基平板，每個藥劑濃度重復 3 次。然后用直徑為 5mm 的打孔器，在試驗前將已經培

14、養(yǎng)好的高粱葉枯病 2 號菌種的菌落中打取直徑為 5mm 的菌餅（打取菌落邊緣生長旺盛的菌絲），將菌餅分別接種內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文5在含不同濃度藥劑的 PDA 平板的中心（使帶菌絲的一面接觸培養(yǎng)基），加蓋，翻轉,25下放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。另外，每個藥劑做一個對照處理，對照組取 1ml無菌水放入 9ml PDA 培養(yǎng)基中混合，再倒入平板中，同樣用消毒后的打孔器打取菌餅接到培養(yǎng)基上，重復三次。（高粱葉枯病 4 號菌種采取同樣的方法）最后在培養(yǎng)的第 2、4、6 天分別調查病原菌菌絲生長情況，并用十字交叉法測量其菌落直徑，記錄數據。1.3.21.3.2 孢子孢子數目法數目法將培養(yǎng) 5 至 6 天

15、的病原菌取出，在培養(yǎng)皿中滴加 50ul 的土溫試劑和 500ul 的蒸餾水，用玻璃棒攪拌，配制成均勻的孢子懸浮液，用球計數板記錄孢子數目。2 結果與分析2.12.1 單劑抑制率的測定單劑抑制率的測定根據實驗記錄的菌落直徑數據繪制表格，運用數據分析軟件計分析，對于高粱葉枯 2 號菌株，50%異菌脲抑制率范圍為 82.3%-48.3%，其次為 55%烯酰福美雙，抑制率范圍為 71.3%-42.2%，接下來是 50%多菌靈，3%中生菌素，而抑制率最低的是 50%嘧菌酯；其中，50%異菌脲 500 倍液的抑制率最高達 82.3%，其抑制效果最好，50%異菌脲 1000 倍液和 55%烯酰福美雙 160

16、0 倍液的抑制效果僅次之，50%嘧菌酯400 倍液的抑制效果最差，僅達 17%左右。表 1 五種藥劑各梯度對高粱葉枯 2 號菌株菌落生長平均速率及抑制藥劑及有效成分稀釋倍數GLYK2菌落生長平均速率抑制率CK6.3333 50%異菌脲500 倍液1.1222 0.822850%異菌脲1000 倍液1.6278 0.742950%異菌脲1500 倍液2.1944 0.6535內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文650%異菌脲2000 倍液2.6278 0.585150%異菌脲2500 倍液3.2722 0.4833CK9.1389 50%多菌靈400 倍液4.4537 0.512750%多菌靈600 倍液

17、6.2944 0.311250%多菌靈800 倍液6.9185 0.242950%多菌靈1000 倍液5.7426 0.371650%多菌靈1200 倍液7.4278 0.1872CK12.0556 55%烯酰福美雙400 倍液6.9685 0.421955%烯酰福美雙800 倍液5.2852 0.561655%烯酰福美雙1000 倍液5.5796 0.537155%烯酰福美雙1200 倍液4.9407 0.590155%烯酰福美雙1600 倍液3.4611 0.7129CK12.2778 3%中生菌素400 倍液7.2111 0.41263%中生菌素600 倍液8.3981 0.31593%

18、中生菌素800 倍液9.5481 0.22233%中生菌素1000 倍液9.3907 0.23513%中生菌素1200 倍液9.5667 0.2208CK10.2778 50%嘧菌酯400 倍液8.4926 0.173650%嘧菌酯800 倍液5.9639 0.419750%嘧菌酯1000 倍液6.4102 0.376350%嘧菌酯1200 倍液5.5454 0.460450%嘧菌酯1600 倍液7.5694 0.2635內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文7對于高粱葉枯 4 號菌株，50%異菌脲抑制率范圍為 68.1%-45.6%，其次為 55%烯酰福美雙，抑制率范圍為 67.5%-42.1%，接下來

19、是 50%多菌靈，3%中生菌素，其中，50%異菌脲 500 倍液的抑制率最高，其抑制效果最好，55%烯酰福美雙 1000倍液和 1200 倍液的抑制效果僅次之；而 50%嘧菌酯低倍液下對于該菌種的生長具有增效作用，高倍液下僅具有微弱的抑制作用，效果不太明顯。表 1 五種藥劑各梯度對高粱葉枯 4 號菌株菌落生長平均速率及抑制率比較GLYK4藥劑及有效成分稀釋倍數菌落生長平均速率抑制率CK7.1667 50%異菌脲500 倍液2.2889 0.680650%異菌脲1000 倍液2.9611 0.586850%異菌脲1500 倍液3.4778 0.514750%異菌脲2000 倍液2.9278 0.

20、591450%異菌脲2500 倍液3.9000 0.4558CK8.6667 50%多菌靈400 倍液4.6019 0.469050%多菌靈600 倍液6.0204 0.305350%多菌靈800 倍液6.3352 0.269050%多菌靈1000 倍液5.3981 0.377150%多菌靈1200 倍液6.7519 0.2209CK10.3056 55%烯酰福美雙400 倍液5.9722 0.420455%烯酰福美雙800 倍液6.2685 0.391755%烯酰福美雙1000 倍液3.3500 0.674955%烯酰福美雙1200 倍液3.6407 0.646755%烯酰福美雙1600 倍

21、液3.7611 0.6350CK12.2222 3%中生菌素400 倍液6.2204 0.49113%中生菌素600 倍液8.6296 0.2939內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文83%中生菌素800 倍液9.6556 0.20993%中生菌素1000 倍液9.6759 0.20833%中生菌素1200 倍液9.8722 0.1922CK5.8333 50%嘧菌酯400 倍液8.0648 -0.382550%嘧菌酯800 倍液8.7148 -0.493950%嘧菌酯1000 倍液5.2954 0.092250%嘧菌酯1200 倍液3.1417 0.461450%嘧菌酯1600 倍液1.8472 0.

22、68332.22.2 孢子抑制率及其顯著性分析孢子抑制率及其顯著性分析根據試驗記錄的孢子數量進行相對抑制率的分析和顯著水平分析，對于 2 號菌種，處于 0.05 的顯著水平下，50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高，最高的是 50%異菌脲 500 倍液，孢子抑制效果應是最好的；其次為 50%異菌脲 1500 倍液，50%異菌脲 2000 倍液；顯著水平最低的為 3%中生菌 1200 倍液，55%福美雙和 50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。處于 0.01 的顯著水平下，最高的仍是 50%異菌脲500 倍液，孢子抑制效果是最好的；其次為 50%異菌脲 1000 倍液，50%異菌脲 1500倍液

23、，50%異菌脲 2000 倍液；55%福美雙和 50%多菌靈差異顯著性均處于中間同一水平。表 3 五種藥劑各梯度對高粱葉枯 2 號菌株孢子抑制率顯著性差異比較顯著水平藥劑及有效成分稀釋倍數孢子相對抑制率0.010.053%中生菌素1200 倍液0.8321gK50%嘧菌酯800 倍液0.8754fgHK3%中生菌素400 倍液0.8016efgGHK3%中生菌素600 倍液0.8495defgFGHK3%中生菌素800 倍液0.8567cdefgEFGH50%嘧菌酯1600 倍液0.8431cdefgdefgh內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文93%中生菌素1000 倍液0.8852cdefgEFGH

24、50%嘧菌酯400 倍液0.8946bcdefDEFGH50%嘧菌酯1200 倍液0.8846abcdefCDEFG50%多菌靈1000 倍液0.9089abcdefBCDEF50%嘧菌酯1000 倍液0.8992abcdeABCDE50%多菌靈1200 倍液0.9115abcdeABCDE50%多菌靈800 倍液0.9123abcdeABCDE50%多菌靈400 倍液0.9216abcdABCDE55%烯酰福美雙1600 倍液0.9253abcdABCDE50%多菌靈600 倍液0.9311abcdABCDE55%烯酰福美雙400 倍液0.9564abcdABCDE55%烯酰福美雙1000

25、倍液0.9434abcABCD55%烯酰福美雙1200 倍液0.9658abcABCD55%烯酰福美雙800 倍液0.9684abcABC50%異菌脲2500 倍液0.9838abAB50%異菌脲2000 倍液0.9844aA50%異菌脲1500 倍液0.9857aA50%異菌脲1000 倍液0.9864aAB50%異菌脲500 倍液0.9875aA對于 4 號菌種，處于 0.01 和 0.05 顯著水平下的顯著性差異基本相同，50%異菌脲顯著水平較其他殺菌劑高，最高的是 50%異菌脲 500 倍液，其孢子抑制效果為最佳；顯著水平最低的為 50%嘧菌酯，其抑制效果不僅小，反而低倍液下右微弱的促

26、進效果；而 3%中生菌素，55%福美雙和 50%多菌靈差異顯著性之間沒有大的差別。表 4 五種藥劑各梯度對高粱葉枯 4 號菌株孢子抑制率顯著性差異比較顯著水平藥劑及有效成分稀釋倍數孢子相對抑制率0.010.0550%嘧菌酯400 倍液-0.3529hK50%嘧菌酯800 倍液-0.4165gH內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文1050%嘧菌酯1000 倍液0.1521fG3%中生菌素1200 倍液0.8105hK50%嘧菌酯1600 倍液0.8452efEF50%多菌靈1200 倍液0.7986eF50%嘧菌酯1200 倍液0.5498deF50%多菌靈600 倍液0.8213cdeEF50%多菌靈8

27、00 倍液0.8252cdeEF50%多菌靈1000 倍液0.8123cdeEF50%多菌靈400 倍液0.8547bcdeEF3%中生菌素1000 倍液0.8426bcdeEF3%中生菌素800 倍液0.8245bcdeCDEF3%中生菌素600 倍液0.8459abcdeBCDEF55%烯酰福美雙1200 倍液0.8947abcdeBCDEF55%烯酰福美雙1600 倍液0.8959abcdeBCDEF3%中生菌素400 倍液0.8989abcdeABCDEF55%烯酰福美雙1000 倍液0.9018abcdeABCDE55%烯酰福美雙800 倍液0.9125abcdeABCDE50%異菌

28、脲2500 倍液0.9431abcdABCD55%烯酰福美雙400 倍液0.9541abcABC50%異菌脲2000 倍液0.9689abcABC50%異菌脲1500 倍液0.9657abABC50%異菌脲1000 倍液0.9798abAB50%異菌脲500 倍液0.9875aA2.32.3 毒力回歸方程的計算毒力回歸方程的計算最后對 5 種殺菌劑進行毒力回歸方程的計算，對于高粱葉枯 2 號菌株，五種殺菌劑的 EC50 高低排列為:50%異菌脲可濕性粉劑50%多菌靈可濕性粉劑55%烯酰福美雙水分散粒劑50%嘧菌酯可濕性粉劑3%中生菌素可濕性粉劑，50%異菌脲最靈敏，因此抑菌效果最好，而 3%中

29、生菌素 EC50 很大，且 r 值是負值，濃度與抑制率表現負相關，其抑菌效果最差。內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文11表 5 五種殺菌劑對高粱葉枯 2 號菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50（mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50%多菌靈可濕性粉劑0.69y=5.68+0.23x1.09E-0355%烯酰福美雙水分散粒劑0.51y=5.65+0.34x1.23E-023%中生菌素可濕性粉劑-0.59y=7.30-0.41x4.27E+05 50%嘧菌酯可濕性粉劑0.70y=5.29+0.29x9.88E-02對于高粱葉枯 4 號菌株，50%異菌

30、脲可濕性粉劑的 EC50 為 7.47E-02，表現為最靈敏，抑菌效果最好，而 50%嘧菌酯可濕性粉劑的 EC50 非常，抑菌效果表現為最差。表 6 五種殺菌劑對高粱葉枯 4 號菌株的毒力回歸方程藥劑r毒力回歸方程EC50（mg/L)50%異菌脲可濕性粉劑0.96y=5.55+0.49x7.47E-02 50%多菌靈可濕性粉劑0.94y=4.65+0.41x7.21E+0055%烯酰福美雙水分散粒劑0.90y=4.44+0.64x7.60E+003%中生菌素可濕性粉劑0.89y=3.76-0.72x5.15E+01 50%嘧菌酯可濕性粉劑-0.62y=10.39-1.82x9.35E+023

31、結論與討論本文選用農業(yè)生產中用來防治真菌病害常用的 5 種殺菌劑對高粱葉枯病進行室內的藥劑篩選和毒力測定，這 5 種殺菌劑對于鏈格孢的病害都具有很好的防治作用，并且具有不同程度的抑制作用，通過選取不同梯度的藥劑用于試驗，計算菌絲的生長抑制率和孢子抑制率，最終結合毒力回歸方程，結果初步顯示 50%異菌脲可濕性粉劑對于該病菌的防治效果表現最好，尤其是在 400-100 倍液之間，其防治效果最高。另外，55%烯酰福美雙水分散粒劑和 50%多菌靈對于高粱葉枯病的防治也有一定的效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微，在農業(yè)生產中起不到什么大的防治作用；而 50%嘧菌酯在這幾個方法中得出的結果均是對病害的發(fā)生有促進作用，因此在大田防治高粱葉枯病害時，盡量不要用此藥劑。內蒙古民族大學本科畢業(yè)論文12目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病為害最為嚴重，在農業(yè)防治中目前還沒有特效的藥劑，一般使用的化學藥劑多為光譜性殺菌劑或是一些新型生物源藥劑。本文最終篩選出的藥劑異菌脲屬于低毒類內吸性殺菌劑，對于蔬菜水果上的霜霉病，葉斑病都有很好的防治效果，另外，異菌脲對于玉米交鏈格孢葉枯病的防治效果也比較好，與高粱細極鏈格孢葉枯病很相似，張希