不同證候的雄激素性脫發(fā)患者受損頭皮的病理特征及雄激素受體表達(dá)的規(guī)律

1、不同證候的雄激素性脫發(fā)患者受損頭皮的 病理特征及雄激素受體表達(dá)的規(guī)律【關(guān)鍵詞】 雄性激素受體摘要：【目的】探討雄性激素受體AR在雄激素性脫發(fā)AA患者 受損頭皮的表達(dá)特點(diǎn)和分布規(guī)律及其與中醫(yī)證候的關(guān)系.【方法】將80例中醫(yī)證型屬脾胃濕熱或肝腎缺乏兩型的 AA患者作為研究對(duì)象, 用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)和比照其禿發(fā)區(qū)與正常非禿發(fā)區(qū)AR水平,并與32例正常人頭皮組織的AR水平進(jìn)行異體對(duì)照研究.【結(jié)果】表皮 顆粒細(xì)胞層、棘層、基底層、真皮纖維母細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng) 組織、立毛肌、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、毛乳頭AR表達(dá)均為陽(yáng)性.而表皮角質(zhì)層、皮下脂肪、內(nèi)毛根鞘、毛干細(xì)胞和毛母質(zhì)細(xì)胞染色均 為陰性.AA患者

2、禿發(fā)區(qū)頭皮總AR陽(yáng)性細(xì)胞百分率以及表皮、汗腺、 皮脂腺、毛根鞘、毛乳頭五個(gè)皮膚結(jié)構(gòu)中的 AR陽(yáng)性細(xì)胞百分率均高 于非禿發(fā)區(qū)及正常人P<001.且各皮膚結(jié)構(gòu)AR值上下與禿發(fā)區(qū)毛 發(fā)稀稠程度存在相關(guān)性.脾胃濕熱組患者禿發(fā)區(qū)汗腺、皮脂腺中以及 總體AR陽(yáng)性細(xì)胞百分率高于肝腎缺乏組P<005,而表皮、毛根鞘、 毛乳頭上的AR表達(dá)在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>005.【結(jié)論】AR 與AA發(fā)病有關(guān),局部AR含量的異常是AA的病因之一；不同中醫(yī)證 候的禿發(fā)患者禿發(fā)區(qū)的病理特征以及 AR的數(shù)量也不同,脾胃濕熱型 患者頭皮禿發(fā)區(qū)的AR表達(dá)總的要比肝腎缺乏的患者高.關(guān)鍵詞：雄激素性脫發(fā)；禿發(fā)/中醫(yī)

3、病機(jī)；受體,雄激素；脾胃濕熱；肝腎缺乏雄激素性脫發(fā)(androgenetic alopecia,AA),又稱男性型脫 發(fā)、脂溢性脫發(fā)、彌散型禿發(fā).迄今, AA的病因及發(fā)病機(jī)理已證實(shí) 與雄激素及其受體有關(guān)1-2.但對(duì)于大局部AA患者,其血液中的 雄激素水平并無(wú)異常3-5.因此,目前對(duì)受損頭皮局部雄激素受體 (androgen receptor , AR)數(shù)量的檢測(cè)已引起研究者的關(guān)注.AR屬于 爸體激素受體超家族,它是一種轉(zhuǎn)錄因子,只有AR存在的靶組織細(xì)胞才能使雄激素發(fā)揮其生物功能.然而AR在AA中的表達(dá)情況、AA的中醫(yī)證型與禿發(fā)區(qū) AR的關(guān)系尚未見(jiàn)有報(bào)道,故我們采用免疫組織 化學(xué)法對(duì)80例AA患

4、者禿發(fā)區(qū)和非禿發(fā)區(qū)皮膚組織中 AR含量進(jìn)行測(cè) 定,并與32例正常人頭皮組織進(jìn)行對(duì)照,現(xiàn)報(bào)告如下.1資料與方法11 一般資料病例選自2001年3月至2002年1月間我院皮膚科診斷為 AA的患者,共80例,均為男性；年齡2149歲,平均3133歲；病 程120年,平均675年.對(duì)照組32例,來(lái)源于本院神經(jīng)外科的手 術(shù)患者和頭部瘢痕植發(fā)患者的正常頭皮組織,共32例,均為男性；年齡2048歲,平均3088歲.80例AA患者中醫(yī)辨證分為兩型,脾胃濕熱組 47例,平均 年齡2919歲,病程平均586年；肝腎缺乏組33例,平均年齡3436 歲,病程平均813年.參照?臨床皮膚病學(xué)?6和?中藥新藥臨床研究指導(dǎo)

5、原那么? 第三輯7進(jìn)行診斷和中醫(yī)辨證分型.13納入標(biāo)準(zhǔn)禿發(fā)組：1符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；2年齡在1850歲,男 性；3近3個(gè)月未用性激素避孕藥物者；4近1個(gè)月未經(jīng)任何脫發(fā) 治療；5依從性好者.對(duì)照組：1年齡在1850歲,男性；2近3個(gè)月未用性 激素避孕藥物者；3本人和家族均無(wú)AA 4依從性好者.14排除標(biāo)準(zhǔn)1頭部有其他皮膚疾患者；2有其他明顯內(nèi)分泌功能失調(diào) 性疾病者；3其他疾病、藥物、理化因素等引起的脫發(fā)者；4不合 作或資料不全者.15取材部位禿發(fā)組取禿發(fā)區(qū)及后枕非禿發(fā)區(qū)全層頭皮,局部患者取前額及頭頂兩個(gè)稀疏程度不同的脫發(fā)區(qū).對(duì)照組取后枕手術(shù)切口頭皮全 層,標(biāo)本經(jīng)蘇木素伊紅HE染色證實(shí)為正常頭皮組織

6、,其他條件同禿 發(fā)組.16試劑來(lái)源AR的抗體為即用型單克隆鼠抗人型 AR抗體、鏈霉菌抗生 物素蛋白一過(guò)氧化物酶SP試劑盒和聯(lián)苯二胺DAB顯色試劑盒均為 美國(guó)DAK公司產(chǎn)品.標(biāo)本經(jīng)40g/L的甲醛固定,石蠟包埋,切成3m厚,經(jīng)脫 蠟、水化后,依次參加一抗(AR抗體)、生物素化的二抗、鏈親和素一 過(guò)氧化物酶溶液,以上各步驟間均以001mol/L磷酸鹽生理鹽水緩沖 液(PBS)(pH=72)清洗3次.用新鮮配制的DAB-H2O雙色,中性樹(shù)脂 封片.分別用陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照,以PBSS沖液代替一抗作陰性 對(duì)照.18測(cè)定方法每張切片在Leica圖像分析儀系統(tǒng)上,采用光學(xué)顯微鏡觀 察,并以HE染色切片作對(duì)照

7、.陽(yáng)性結(jié)果判定：細(xì)胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn) 棕黃色顆粒為陽(yáng)性,與陰性對(duì)照片染色一致的為陰性. 采用百分?jǐn)?shù)法 計(jì)數(shù)：每個(gè)皮膚結(jié)構(gòu)如表皮、汗腺等隨機(jī)取 466個(gè)高倍鏡視野,每 張涂片記數(shù)500個(gè)以上同類細(xì)胞,計(jì)算選取視野中組化染色陽(yáng)性細(xì)胞 的百分比.19統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSS100建立數(shù)據(jù)庫(kù)及統(tǒng)計(jì)分析,顯著性水平 =005. 2結(jié)果21光學(xué)顯微鏡下結(jié)果211 AR在表皮的分布角質(zhì)層AR表達(dá)為陰性.顆粒細(xì)胞層、棘層、基底層 AR表達(dá) 均為陽(yáng)性,AR陽(yáng)性細(xì)胞率從顆粒層至基底層逐漸增多,在顆粒層與 棘層AR以細(xì)胞核陽(yáng)性為主,基底層 AR那么以細(xì)胞漿陽(yáng)性為主(見(jiàn)圖 1-a) o212 AR在真皮的分布纖維母細(xì)

8、胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)組織、立毛肌 AR呈陽(yáng)性 表達(dá),皮下脂肪AR陰性.213 AR在汗腺的分布汗腺的排泄部、分泌部細(xì)胞核均有 AR的分布,且排泄部AR 陽(yáng)性百分率高于分泌部見(jiàn)圖1-b.214 AR在皮脂腺的分布皮脂腺的基內(nèi)幕胞和腺細(xì)胞都有高水平的AR表達(dá)見(jiàn)圖1-c,且以核陽(yáng)性為主.同一標(biāo)本中,兩種中醫(yī)證型比擬,脾胃濕熱 型AA患者的皮脂腺在形態(tài)上分葉增多、體積增大.215 AR在毛囊的分布外毛根鞘基層和棘層 AR染色均為陽(yáng)性見(jiàn)圖1-d.以毛囊 縱切面觀察：毛囊漏斗部 AR陽(yáng)性表達(dá)與表皮分布和含量根本一致. 峽部以下至毛小球部,外毛根鞘 AR陽(yáng)性百分率逐漸減少.毛乳頭上 有較高水平的AR表達(dá)見(jiàn)

9、圖1-e,而內(nèi)毛根鞘、毛干細(xì)胞和毛母質(zhì) 細(xì)胞染色均為陰性.禿發(fā)區(qū)毛乳頭體積較非禿發(fā)區(qū)小,但細(xì)胞形態(tài)無(wú) 明顯變化.在禿發(fā)區(qū)和非禿發(fā)區(qū),無(wú)論是縮小化的生長(zhǎng)末期毛囊還是 休止期毛囊,AR的分布均一致.22 AR陽(yáng)性百分率的比擬結(jié)果221禿發(fā)區(qū)、非禿發(fā)區(qū)和對(duì)照組 AR陽(yáng)性百分率比擬表1顯示,禿發(fā)區(qū)總體以及禿發(fā)區(qū)表皮、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、毛乳頭五個(gè)皮膚結(jié)構(gòu)的 AR陽(yáng)性百分率均高于非禿發(fā)區(qū)和正常 人對(duì)照組均P< 001,非禿發(fā)區(qū)總體以及上述部位 AR陽(yáng)性百分率與 正常人對(duì)照組比擬,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義均P>005.表1禿發(fā)區(qū)、 非禿發(fā)區(qū)和對(duì)照組AR陽(yáng)性百分率的比擬略222禿發(fā)區(qū)稀稠程度與AR關(guān)系

10、80例禿發(fā)組中有38例在前額與頭頂兩個(gè)禿發(fā)程度不同區(qū)域 各取了標(biāo)本.這兩個(gè)區(qū)域的 AR陽(yáng)性百分率比照見(jiàn)表2.經(jīng)配對(duì)t檢 驗(yàn),結(jié)果顯示稀疏禿發(fā)區(qū)的總體 AR陽(yáng)性百分率、表皮與皮脂腺的 AR 陽(yáng)性百分率與稠密禿發(fā)區(qū)比擬,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn), 各皮膚結(jié)構(gòu)AR值上下與禿發(fā)區(qū)毛發(fā)稀稠程度存在相關(guān)性,即頭發(fā)相 對(duì)稠密的禿發(fā)區(qū)AR值低,頭發(fā)相對(duì)稀疏的禿發(fā)區(qū) AR值高.表2 38 例AA患者稀疏禿發(fā)區(qū)和稠密禿發(fā)區(qū)的 AR陽(yáng)性百分率比擬略223不同中醫(yī)證型患者禿發(fā)區(qū)的 AR陽(yáng)性百分率的比擬 脾胃濕熱型患者禿發(fā)區(qū) AR陽(yáng)性百分率在汗腺和皮脂腺比肝腎缺乏型高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義分別為t=2358, P=

11、0021; t=2878, P=0005,但在表皮、毛根鞘和毛乳頭中的AR陽(yáng)性百分率兩種證型差 異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>005,見(jiàn)表3.而在非禿發(fā)區(qū),五個(gè)皮膚結(jié)構(gòu) 兩種證型間AR陽(yáng)性百分率的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P >005o表3兩 種中醫(yī)證型禿發(fā)患者禿發(fā)區(qū) AR陽(yáng)性百分率比擬略3討論現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究說(shuō)明,AA是一種雄激素依賴的常染色體顯性 多基因遺傳性禿發(fā),雄激素睪酮,特別是游離活性睪酮以及二氫睪 酮、毛囊單位的AR酶的活性、遺傳易感性的禿發(fā)區(qū)頭皮在 AA發(fā) 病中起著重要的作用.雄激素與受體結(jié)合,形成雄激素一受體復(fù)合物,后者進(jìn)入細(xì)胞核,結(jié)合到基因位點(diǎn)特異的激素反應(yīng)元件上,從而刺激或介導(dǎo)毛發(fā)生

12、長(zhǎng)的細(xì)胞內(nèi)過(guò)程.國(guó)內(nèi)鞏氏5對(duì)AA患者和正常人的血清睪酮水平進(jìn)行了測(cè)定,發(fā)現(xiàn)兩組間差異無(wú) 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.Sawaya等8通過(guò)研究也發(fā)現(xiàn)局部皮膚受體量與血清 雄激素水平無(wú)相關(guān)性.因此,AA患者毛囊單位的雄激素及其受體水 平比血清更能反映AA本質(zhì).本研究通過(guò)對(duì)80例AA患者頭皮禿發(fā)區(qū) AR檢測(cè)并與自體、異體比照研究發(fā)現(xiàn)：31AR在頭皮的分布規(guī)律本研究光鏡下的結(jié)果提示：禿發(fā)區(qū)、非禿發(fā)區(qū)以及正常人對(duì) 照組頭皮的表皮顆粒細(xì)胞層、棘層、基底層、汗腺、皮脂腺、毛根鞘、 毛乳頭均有AR的陽(yáng)性表達(dá),說(shuō)明這些細(xì)胞是雄激素在皮膚的靶細(xì)胞. 表皮角質(zhì)層、真皮膠原纖維、皮下脂肪、內(nèi)毛根鞘、毛干細(xì)胞和毛母 質(zhì)細(xì)胞染色那么均呈

13、陰性.本研究光鏡下的結(jié)果與藍(lán)長(zhǎng)貴9卜Winter 10、Razel 11的研究結(jié)果一致.AR在皮膚的分布規(guī)律說(shuō)明,雄激素能刺激真皮纖維母細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,對(duì)神經(jīng)組織也有直接調(diào)節(jié)作用.汗腺上有 AR的陽(yáng)性表達(dá),證實(shí)小汗腺受 雄激素限制.本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),皮脂腺細(xì)胞和毛乳頭細(xì)胞上有AR的高表達(dá),這與國(guó)外的研究結(jié)果12-14 一致,說(shuō)明雄激素能調(diào)節(jié)皮 脂腺的基內(nèi)幕胞和腺細(xì)胞的增殖和脂肪生成,刺激皮脂腺的分泌,還能通過(guò)作用于毛乳頭細(xì)胞來(lái)限制毛發(fā)的生長(zhǎng).本研究還發(fā)現(xiàn),生長(zhǎng)期 和休止期毛乳頭細(xì)胞均有 AR的陽(yáng)性表達(dá),說(shuō)明雄激素在這兩個(gè)毛發(fā) 生長(zhǎng)階段均起作用.32頭皮中AR陽(yáng)性百分率與AA關(guān)系本研究資

14、料說(shuō)明,AA患者禿發(fā)區(qū)頭皮表皮、汗腺、皮脂腺、 外毛根鞘和毛乳頭的 AR陽(yáng)性細(xì)胞百分率均較自身非禿發(fā)區(qū)頭皮以及 異體正常頭皮高.各皮膚結(jié)構(gòu) AR值上下與禿發(fā)區(qū)毛發(fā)稀稠程度存在 相關(guān)性,提示AA的發(fā)生是由于局部AR數(shù)量的異常引起的.皮脂腺、毛乳頭這兩個(gè)皮膚結(jié)構(gòu) AR陽(yáng)性細(xì)胞率較其他皮膚 結(jié)構(gòu)高,與 Sawaya 8、Hibberts 15的研究結(jié)果相同,揭示它 們對(duì)雄激素較其他皮膚結(jié)構(gòu)更敏感.雄激素能調(diào)節(jié)皮脂腺的大小16,禿發(fā)區(qū)皮脂腺AR含量高 于非禿發(fā)區(qū),這與AA患者頭部皮脂分泌較多的臨床表現(xiàn)有一定關(guān)聯(lián). 毛乳頭細(xì)胞被認(rèn)為是雄激素作用的位點(diǎn), 雄激素一方面抑制毛乳頭的 生長(zhǎng)發(fā)育而直接影響毛發(fā)生

15、長(zhǎng),使頭發(fā)提前進(jìn)入休止期.另一方面使 毛乳頭產(chǎn)生旁分泌因子17,這些成份使胞外基質(zhì)體積縮小,從而 使表皮與真皮間的接觸喪失,而表皮與真皮間的相互作用是毛發(fā)生長(zhǎng) 必不可少的條件8,因此導(dǎo)致AA的發(fā)生.33 AA中醫(yī)辨證分型與禿發(fā)區(qū)AR的關(guān)系及臨床意義祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為AA屬于“發(fā)蛀脫發(fā)、“蛀發(fā)癬范疇.中醫(yī) 學(xué)認(rèn)為本病的主要病因病機(jī)為：平素血熱之體,復(fù)感風(fēng)邪,郁久轉(zhuǎn)而 化燥,進(jìn)而耗血傷陰,毛根失養(yǎng),故發(fā)焦脫落；或脾胃運(yùn)化失常,水 濕內(nèi)聚化熱,致使?jié)駸嵘险魩p頂,侵蝕發(fā)根白漿,引起頭發(fā)粘膩而脫 落；或稟賦缺乏,思慮過(guò)度,勞傷肝腎,而致精血虧虛、肝腎缺乏,那么發(fā)無(wú)生長(zhǎng)之源,失于濡養(yǎng)而脫落根據(jù)以上病因病機(jī),近年

16、來(lái)臨床研究逐漸趨向主張把本病分 為3型：血熱生風(fēng)型、脾胃濕熱型和肝腎缺乏型.脾胃濕熱型患者的 頭發(fā)光澤發(fā)亮,皮脂溢出較其他兩證型多,我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示脾胃 濕熱型患者的皮脂腺分葉增多、飽滿,體積增大；同時(shí)該型患者禿發(fā) 區(qū)汗腺、皮脂腺的AR陽(yáng)性細(xì)胞百分率較肝腎缺乏型患者高.脾胃濕 熱型AA患者禿發(fā)區(qū)的汗腺和皮脂腺細(xì)胞對(duì)雄激素比肝腎缺乏型更為 敏感.這在一定程度上提示了中醫(yī)辨證分型有其病理解剖結(jié)構(gòu)變化的 根底.本研究結(jié)果提示,AA的發(fā)生與毛囊皮脂腺單位ARzk平升高 或AR對(duì)正常血清水平的雄激素的敏感性增加有關(guān),這局部解釋了雄 激素在AA發(fā)病中的重要作用與只有少數(shù)患者的血清雄激素水平升高 這一事實(shí)

17、的矛盾.故推測(cè) AA發(fā)病的可能機(jī)制為：活性雄激素與皮脂 腺、毛囊的AR結(jié)合后,產(chǎn)生激素一受體復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),影響 皮脂腺的代謝和毛發(fā)的生長(zhǎng).具體表現(xiàn)為促進(jìn)皮脂腺的分泌,使頭部 油膩；抑制毛囊的代謝,造成頭發(fā)脫落,從而導(dǎo)致脫發(fā)的發(fā)生.研究 結(jié)果初步顯示,禿發(fā)區(qū)的顯微結(jié)構(gòu)以及 AR水平與AA的中醫(yī)辨證分型 有一定的相關(guān)性,提示該研究對(duì)進(jìn)一步探討中醫(yī)藥調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的機(jī)制 具有一定的意義.至于禿發(fā)區(qū)AR水平能否作為AA中醫(yī)辨證分型的客 觀依據(jù),還有待擴(kuò)大樣本量作進(jìn)一步深入探討.(本文的完成得到歐愛(ài)華老師在數(shù)理統(tǒng)計(jì)方面的指導(dǎo),在此 深表感謝.)參考文獻(xiàn)：1 Sinclair RFortnighty r

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