
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文檔簡(jiǎn)介
1、農(nóng)產(chǎn)品六大品質(zhì):水分、灰分、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素chaper1 農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)分析樣品的制備和含水量的測(cè)定取樣: 先稱鮮樣1 畜產(chǎn)品的取樣同肥料樣品的取樣。2 蔬菜瓜果樣品:個(gè)體較小的如小白菜,葡萄,荔枝,龍眼和黃皮等,隨機(jī)取若干個(gè)整體,切碎混勻,縮分到所需數(shù)量;對(duì)于體積較大的,如西瓜,蘿卜,大白菜和菠蘿蜜等,可按成熟度及個(gè)體大小的組成比例,選取若干個(gè)體,按生長(zhǎng)軸縱剖分4分或8分,對(duì)角線取2份,切碎混勻,縮分到所需數(shù)量。3 糧食樣品:取每個(gè)個(gè)體的中間部分樣品,也可整個(gè)取樣,混勻后再分出樣品。蔬菜樣品取150-250g(視水分含量而定),瓜果?。鹤蚜悠啡?0-100g(注意去殼部分),
2、取的樣品為可食部分。樣品制備: 籽粒樣品:禾谷類一般只分析籽粒,帶殼的如葵花籽,花生等只分析果仁;瓜果類:新鮮可食部分,打成勻漿備用;蔬菜等含水多的樣品:剪(打)碎混勻備用。一般也只分析新鮮的樣品,特別是糖分和維生素類項(xiàng)目。注意:要求制備-分析的過程盡量短(鮮樣)注意防止在制備過程中水分的損失新鮮樣品要求在當(dāng)天(24小時(shí))分析完成。不能立即分析的樣品保存在密封潔凈的低溫(1-5)容器內(nèi),注意避光;對(duì)于含水量低需保存時(shí)間較長(zhǎng)的樣品可進(jìn)行升華干燥。不同的樣品冰點(diǎn)不同,西紅柿,-40 ,(營(yíng)養(yǎng)成分的保存).注意養(yǎng)分在器官中的轉(zhuǎn)移(及時(shí)分離出農(nóng)產(chǎn)品部分)風(fēng)干或烘干的農(nóng)產(chǎn)品樣品要在封閉的玻璃瓶(試劑瓶)
3、中保存,保存的時(shí)間不長(zhǎng)于一年;新鮮的植物樣品一般不主張保存。同時(shí)要提醒的是不是保存的溫度越低越好;農(nóng)產(chǎn)品中微量元素的分析同樣要防止污染。一般用玻璃研缽研細(xì),不過篩。水分測(cè)定的意義:1耐貯性的判斷指標(biāo)2口味的指標(biāo)3營(yíng)養(yǎng)價(jià)值比較的基礎(chǔ)籽粒樣品的水分測(cè)定方法同植物組織樣品的水分測(cè)定方法;新鮮樣品水分的測(cè)定一般采用二步烘干法:50-60 鼓風(fēng)3-4小時(shí),壓碎,轉(zhuǎn)到100-105 (不鼓風(fēng))干燥至質(zhì)量穩(wěn)定,(為使樣品充分干燥和縮短干燥的時(shí)間,一般加入大顆粒洗凈干燥的石英砂。加入的比例為質(zhì)量的1/5-1/10);對(duì)于熱穩(wěn)定性差的樣品,如含不飽和脂肪酸、揮發(fā)油,分別用減壓干燥法(50-80 ,25-100m
4、mHg(0.03-0.13atm))和蒸餾法,并且不同的農(nóng)產(chǎn)品有嚴(yán)格的溫度和干燥時(shí)間要求。chapter2 粗灰分的測(cè)定一定溫度條件下,有機(jī)物質(zhì)燃燒剩余的部分為粗灰分。(1)水溶性灰分(能被人體直接吸收)(2)酸溶性灰分 1 測(cè)定灰分的步驟包括預(yù)灰化和灰化兩個(gè)過程。預(yù)灰化時(shí)因有大量有機(jī)物不完全燃燒產(chǎn)生大量的煙,故溫度不能太高(200左右),否則會(huì)引起大量煙帶走部分灰分。2灰化的溫度因樣品不同而不同。莖葉樣品灰化的溫度不超過550 。高的話,鉀鹽揮發(fā)損失,硅酸鹽和磷酸鹽容易形成難溶性鹽膜,包裹碳粒,使灰化不完全;同時(shí)在高溫條件下,由于碳的存在,磷和硫等容易形成還原性氣體而損失。 灰化時(shí)加熱的速度
5、不能太快,因干餾時(shí)灼熱物的局部產(chǎn)生大量的氣體而致部分微粒損失。3對(duì)于含灰分少,磷硫等含量相對(duì)高的種子樣品,加堿性金屬鹽或橄欖油, H2O2 , 95 %酒精,濃硝酸等,以加速灰化過程。 灰分的顏色通常是灰白色或淺灰色。如果是黃棕色,表明Fe3+含量高,綠色表明Mn2+含量高。4 灰化的時(shí)間一般不做規(guī)定。要求灼燒至全白色或淺灰白色,并達(dá)恒重為止。不過也有例外,飼料灰分的測(cè)定則規(guī)定為600 ,2小時(shí)。5 本法測(cè)定是風(fēng)干或烘干的植物樣品,對(duì)于含水量高的瓜果,蔬菜樣品則需先風(fēng)干或烘干后測(cè)定。6 本法要求植物樣品的細(xì)度為1mm or 2mm.,太細(xì)容易引起灰分損失,太粗則不易灰化完全。7 稱樣量因樣品灰
6、分含量的不同而異,一般2-3g。8 脂肪含量高的樣品應(yīng)先提取脂肪后灰化。9 粗灰分的結(jié)果用占干物重的%表示。10 可以用瓷坩堝,也可用鉑金坩堝和石英坩堝。chapter3 碳水化合物的分析組成:糖分、淀粉、纖維素、半纖維素、果膠糖分:?jiǎn)翁?光合作用產(chǎn)物 雙(多)糖 運(yùn)輸作用產(chǎn)物 能量直接提供的底物 與作物種類、水、氣、栽培措施有關(guān) 意義:(1)重要的品質(zhì)特征(2)加工的品質(zhì)(3)與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)的指標(biāo)(N、P)N與糖分有負(fù)的效應(yīng) P與糖分直接相關(guān) K直接影響氣孔的開合,影響糖分的運(yùn)輸?shù)矸郏海?)加工品質(zhì)鑒定(2)重要的醫(yī)藥成分(片劑)(3)隨外界條件,如作物品種改變而改變水果儲(chǔ)藏一段時(shí)間后,糖分
7、增多,淀粉減少。纖維素、半纖維素、果膠:結(jié)構(gòu)性物質(zhì) 利于腸胃的蠕動(dòng)(纖維素、半纖維素),大部分不被吸收??扇苄蕴牵▎翁恰㈦p糖)測(cè)定:總糖 還原性糖 非還原性糖還原性糖測(cè)定方法:1、重量法 原理:還原糖將斐林試劑還原產(chǎn)生的Cu2O的量來測(cè)定還原糖的量的方法。要求:糖分含量高。2、滴定法 Principle:根據(jù)所消耗的氧化劑的量直接或間接計(jì)算還原糖的量。有銅還原法和鐵氰化鉀法等。要求:因?yàn)榉磻?yīng)過程和產(chǎn)物因反應(yīng)條件而有較大的變化,要求嚴(yán)格按操作規(guī)程做。3、比色法 包括:3,5-二硝基水楊酸比色法 550nm砷鉬酸比色法 620nm鉬蘭比色法蒽酮比色法 630nm4、旋光法 利用糖的不對(duì)稱性使通過的
8、光偏移,并且偏移的角度大小與糖的含量高低正相關(guān)。不同的糖引起的偏移的大小不同,所以此法只能對(duì)單獨(dú)存在的糖進(jìn)行測(cè)定。銅還原直接滴定法原理:還原糖使斐林試劑還原產(chǎn)生的Cu2O,而本身被氧化為糖酸,不具還原性。用氧化還原指示劑指示滴定終點(diǎn)。注意:斐林試劑由CuSO45H2O(A)和酒石酸鉀鈉+NaOH(B) 組成,不能混合存放;亞甲基蘭很易被空氣氧化成蘭色,注意保存,并在滴定過程中避免與空氣接觸;滴定過程中加熱的強(qiáng)度,溫度,時(shí)間須和標(biāo)準(zhǔn)糖保持一致;滴定過程分約測(cè)和精測(cè)兩個(gè)步驟,要求滴定過程的時(shí)間不超過3分鐘;制備糖液的水浴的溫度不能超過80,否則易引起非還原糖的水解;糖待測(cè)液須除去蛋白質(zhì),需要用澄清
9、劑,中性醋酸鉛或堿性醋酸鉛(根據(jù)樣品中的酸度大小選擇),不過澄清劑不要過量。氰化鹽碘量法原理:還原糖與已知過量的堿性鐵氰化鉀作用,生成亞鐵氰化鉀和糖酸,過量的鐵氰化鉀在醋酸存在的條件下與KI作用生成游離的I2,用標(biāo)準(zhǔn)的Na2S2O3溶液滴定生成的I2(以淀粉做指示劑),根據(jù)空白值和樣品值的差值計(jì)算消耗的鐵氰化鉀的體積從而得到樣品還原糖的量。注意:查表為經(jīng)驗(yàn)所得,故須嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行淀粉指示劑需在沸水中配制,指示劑不能過早的加入,要到I2消耗差不多的時(shí)候再加(淡黃色)。銅還原碘量法原理:還原糖和索姆吉試劑作用生成Cu2O沉淀,酸化后Cu2O溶解并與被碘酸鉀和碘化鉀的產(chǎn)物I2還原,用標(biāo)準(zhǔn)的Na2
10、S2O3溶液滴定剩余的I2(以淀粉做指示劑),根據(jù)空白值和樣品值的差值,查表得到樣品還原糖的量。注意:嚴(yán)格按操作進(jìn)行砷鉬酸比色法原理:還原糖將銅試劑還原成Cu2O,在濃硫酸存在的條件下與砷鉬酸生成藍(lán)色溶液,在一定濃度范圍內(nèi)消光值和糖的濃度呈正比例關(guān)系。比色波長(zhǎng):560nm, 620nm 測(cè)定范圍:10180g/ml,最好2550 g/ml。糖料作物中蔗糖的測(cè)定旋光法原理:利用蔗糖對(duì)光的偏振特性,光通過的蔗糖溶液發(fā)生偏移,并且偏移的角度大小與糖的含量高低正相關(guān)。這種正相關(guān)必須是在光通過的糖液中的路程是相同的條件下才能成立。比旋( ):100ml溶液中含有100g旋光物質(zhì),通過液層厚度1dm,溫度
11、20時(shí)鈉光源(589.3nm)偏振面所旋轉(zhuǎn)的角度,稱為該物質(zhì)的比旋。= 因此100ml中旋光物質(zhì)克數(shù)為: C =K 式中K為常數(shù),隨旋光物質(zhì)的種類和管長(zhǎng)不同而改變。蔗糖的 ,如將L固定為2dm,則,故 蔗糖蔗糖的“規(guī)定當(dāng)量”(26g)是國(guó)際上統(tǒng)一蔗糖旋光測(cè)定的規(guī)定。通常指26g蔗糖溶于100ml水中,溫度為20時(shí)的密度為/ml,把它通過2dm旋光管時(shí)的旋光度規(guī)定為100 V(100 S)。直接刻度V值或S值的旋光儀就稱為檢糖計(jì)。檢糖計(jì)的1 V或1 S表明相當(dāng)于有蔗糖溶于100ml溶液中的濃度。若樣品稱重為26g,制成糖溶液的體積為100ml時(shí),則每1 V或1 S即表明樣品含蔗糖1%,用此測(cè)讀非
12、常方便。蔗糖(%) = V或 S一般旋光儀(刻度)的度數(shù)可與檢糖計(jì)V或S值互相換算。規(guī)定當(dāng)量:為26的蔗糖溶于100水中,管長(zhǎng)為2dm時(shí)所測(cè)旋光角度:100 V =66.5 2 1 = 2.8885 V 1 V = 0.3462 1 = 2.8885 %(蔗糖) 蔗糖(%) = 2.8885 注意:旋光法只能用于糖單獨(dú)存在時(shí)的測(cè)定;旋光法同樣要求除去蛋白物質(zhì),不過與果蔬樣品不同的是要求先中和酸性(特別是未成熟的甘蔗),同時(shí)用堿性醋酸鉛除去蛋白;記住千萬不能過量。一般農(nóng)產(chǎn)品中的蔗糖通過測(cè)定水溶性糖的總量和還原糖的差值得到。水溶性糖的測(cè)定方法:酸水解銅還原直接滴定法和銅還原碘量法。 原理同還原糖的
13、測(cè)定。 兩者均用6NHCl 90水浴10分鐘;水解結(jié)束后需中和酸度蒽酮比色法原理:糖(可溶性糖)在濃硫酸的存在條件下脫水后與蒽酮縮合成蘭綠色化合物,在一定濃度范圍內(nèi)顏色的深淺與糖分含量正相關(guān)。葡萄糖生成黃綠色物,果糖生成藍(lán)綠色物,蔗糖生成顏色在二者之間 注意:蒽酮溶液放置時(shí)間長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生蒽酮沉淀,使蒽酮在溶液中不均勻造成吸取時(shí)產(chǎn)生較大的偏差,溶液的顏色會(huì)應(yīng)蒽酮的含量的不同而有較大的變化。也可先配制成1-2%的蒽酮乙酸乙酯溶液,然后在顯色時(shí)分別加蒽酮和硫酸,保證蒽酮濃度在8-12g/ ml即可得到充分的顯色; 另外因蒽酮保存在乙酸乙酯溶液中可延長(zhǎng)保存的時(shí)間達(dá)數(shù)周。 還原糖或可溶性糖待測(cè)液都可應(yīng)用此法
14、測(cè)定。最好用酒精提取的糖待測(cè)液,防止淀粉的水解影響結(jié)果,同時(shí)由于淀粉的存在還可影響溶液的透光率,造成比較大的誤差;不過有資料認(rèn)為對(duì)于一般的蔬菜和植物樣品若淀粉的含量低則可在沸水浴中提取。 過去的資料認(rèn)為測(cè)定的范圍是20-180g/ml,實(shí)際上樣品的濃度超過50g/ml則應(yīng)吸光度過大而造成誤差;顯色液搖勻時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)混勻的程度而定,以混合均勻?yàn)槎?;顯色保溫的時(shí)間長(zhǎng)短以反應(yīng)完全為度,一般為1-10分鐘,如果含量很低也可縮短時(shí)間,反之也然;蛋白質(zhì)干擾顯色,特別是色氨酸嚴(yán)重干擾顯色。本法不適合蛋白含量高的樣品;顯色液超過標(biāo)線后不能直接稀釋; 測(cè)定用波長(zhǎng)可根據(jù)樣品中的含量高低(顯色顏色的深淺)和樣品中
15、糖的主要類別來選擇,一般有620nm和630nm兩種波長(zhǎng)。谷物中淀粉的測(cè)定HCl水解銅還原直接滴定法原理:淀粉在稀酸(1%HCl)的作用下,水解為糊精和麥芽糖,最后都轉(zhuǎn)化為葡萄糖,葡萄糖用還原糖法滴定。注意:1%HCl沸水浴中,不僅水解淀粉,而且水解半纖維素和果膠;加具有長(zhǎng)玻璃管的塞子的目的是起冷凝作用以免因過度的蒸發(fā)影響酸度和水解的產(chǎn)物,也可用冷凝裝置代替;制備樣品的過程中,三角瓶直接接觸水浴鍋鍋底會(huì)因劇烈的跳動(dòng)使樣品粘到瓶口,從而影響樣品的水解;同時(shí)由于水浴鍋鍋底的溫度超過了100容易使樣品焦化;水解結(jié)束后,用甲基紅作指示劑中和酸度。堿性過大會(huì)影響其他成分的分解影響測(cè)定的結(jié)果;也有結(jié)果認(rèn)為
16、堿性會(huì)導(dǎo)致葡萄糖的分解,影響結(jié)果。酶水解氰化鹽碘量法原理:利用淀粉酶的專一性產(chǎn)生還原糖,氰化鹽碘量法測(cè)定。注意:稱樣量與樣品中的淀粉的含量有關(guān),10%-20%稱樣量可在1-2克,低于10%則要稱樣3-5克。稱樣高低以及淀粉含量高低影響水解的時(shí)間長(zhǎng)度,比酸水解需要的時(shí)間要長(zhǎng)得多;脂肪的存在影響測(cè)定結(jié)果(使結(jié)果偏高),故應(yīng)除去。用乙醚50ml分5次洗脫;用850ml/L的乙醇洗除樣品中可溶性的糖類而淀粉不損失;也可用淀粉指示劑檢查是否有藍(lán)色、紅色、紫色等出現(xiàn),有則表明沒有水解完全;吸取的體積的多少與溶液中的還原糖的含量有關(guān),應(yīng)保持還原糖的濃度在。CaCl2-HOAC 浸提旋光法原理:CaCl2-H
17、OAC為分散和液化劑,在一定的酸度和加熱條件下,使淀粉溶解并部分酸解,生成一定的水解產(chǎn)物,具有一定的旋光性,可用旋光計(jì)測(cè)定。用此法時(shí),各種淀粉的水解產(chǎn)物的比旋指定為203。 注意:CaCl2HOAc溶液的酸度必須準(zhǔn)確調(diào)節(jié)至(在酸度計(jì)上調(diào))。若,易使分散液粘稠,難于過濾;若,易引起淀粉進(jìn)一步水解而降低比旋;樣品若含有水溶性糖類,應(yīng)先用80%乙醇除去,否則影響浸提物的比旋;CaCl2HOAc溶液在要放入油浴之前5分鐘再加入,否則溶液容易使淀粉粘到瓶底影響其水解;要求放入油浴后到3-8分鐘達(dá)到所需溫度;攪拌使樣品水解多度和不均勻的水解,影響比旋(使糖化)。植物樣品中少量淀粉的測(cè)定蒽酮法原理:在一定酸
18、度()和高壓鍋(1kg/cm2) 的條件下水解淀粉,用蒽酮法測(cè)定由淀粉水解得到的糖分,再由測(cè)得糖分量乘以后得淀粉含量。比較簡(jiǎn)便,但準(zhǔn)確度低。適用于精度要求低淀粉含量低的一般莖葉樣品。薯塊中淀粉的測(cè)定密度法原理:馬鈴薯塊莖中的淀粉含量與其密度有正相關(guān)性,故可利用測(cè)定塊莖的密度,查表求得馬鈴薯的淀粉含量。馬鈴薯的密度可由其在空氣中和在水中稱重之差求得。本法的優(yōu)點(diǎn)是快速簡(jiǎn)便,所求的設(shè)備簡(jiǎn)單,也無需使用藥品,但精確度差。適用于同一樣品不同品種之間淀粉含量的初步檢測(cè)比較。要求稱樣量大,5kg,同時(shí)注意做空白實(shí)驗(yàn),消除容器的影響。碳水化合物測(cè)定的一般步驟:農(nóng)產(chǎn)品單糖粗液研磨或過篩待測(cè)樣品糖分待測(cè)液測(cè)定單糖
19、粗液?jiǎn)翁谴忠捍郎y(cè)液水提水提或稀酸解除蛋白和除澄清劑除蛋白和除澄清劑酶解CaCl2-HOAC 浸提酸解旋光法測(cè)定待測(cè)液粗纖維素的測(cè)定 酸堿洗滌法原理:將樣本用酸,堿水解,酸可將淀粉,果膠質(zhì)和部分半纖維素水解后除去;堿可以除去蛋白質(zhì),脂肪及部分半纖維素 和木質(zhì)素。最后將得到的殘?jiān)娓?,稱重。再經(jīng)灰化后減去灰分重,即得粗纖維素重。經(jīng)研究證明在酸堿水解時(shí),尚殘留有20%左右半纖維素和10-50%的木質(zhì)素;另外纖維素也可被除去20-25%,因而,此測(cè)定值除纖維素外,尚有部分其它碳水化合物,故稱“粗纖維素注意:為保證酸或堿的濃度保持在1.25%,開始時(shí)要用酸潤(rùn)洗樣品,抽濾或擠出樣品中的溶液,然后再加微沸的
20、酸至200 ml;換堿性洗滌時(shí)先要用堿洗去將部分的水,抽濾或擠出樣品中的溶液,然后再加微沸的堿至200 ml;所用的酸堿不僅濃度準(zhǔn)確而且要求保持熱的(沸騰的);每次抽提洗滌均須干凈,才不影響后面的效果和結(jié)果。酸洗滌重量法(酸性洗滌纖維,ADF )原理:季銨鹽,例如十六烷基三甲基溴化銨(簡(jiǎn)稱CTAB),是一種表面活性劑,在溶液中能有效地使動(dòng)物飼料、植物樣品中蛋白質(zhì)、多糖、核酸組分水解、濕潤(rùn)、乳化、分散,而纖維素及木質(zhì)素則很少變化。酸-洗滌劑法就是利用著這個(gè)原理,將樣品用20g/LCTAB的溶液(酸-洗滌劑)煮沸1小時(shí),過濾,洗凈酸液后烘干,由殘?jiān)?jì)算酸性洗滌劑纖維(%)。 本法適用于谷物及其加工
21、產(chǎn)品、飼料、牧草、果蔬等植物的莖、稈、葉、果實(shí)以及測(cè)定脂肪后的任何樣品中粗纖維素的測(cè)定。 注意:煮沸的時(shí)間必須嚴(yán)格控制;在洗滌過程中每次都須排盡才能換下一次的溶液。不溶性膳食纖維(中性洗滌纖維)的測(cè)定 原理:在中性洗滌劑的消化作用下,試樣中的糖、淀粉、蛋白質(zhì)、果膠等物質(zhì)被溶解除去,不能消化的殘?jiān)鼮椴蝗苄陨攀忱w維,主要包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、角質(zhì)和二氧化硅等,還包括不溶性灰分。 說明:中性洗滌劑溶液:EDTA二鈉鹽和 四硼酸鈉(A),月桂基硫酸鈉(CP)(作用:軟化細(xì)胞壁)和10ml乙二醇獨(dú)乙醚(CP)(B),合并上述A和B溶液,無水磷酸氫二鈉(C)再并入上述溶液中,用磷酸調(diào)節(jié)上述混合液至
22、,在重復(fù)的條件下兩次獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。果膠物質(zhì)的測(cè)定果膠物質(zhì)的作用具體有:食品生產(chǎn)中果凍材料和增稠劑胃腸道和胃潰瘍疾病的良藥中金屬的解毒劑(特別是甲氧基7%)果膠物質(zhì)的組成:一群復(fù)雜的膠態(tài)的碳水化合物的衍生物。包括:半乳糖醛酸與鼠李糖所組成的雜多糖。另外,許多植物中果膠物質(zhì)還包括:阿拉伯樹膠,聚半乳糖和阿拉伯半乳糖。測(cè)定方法:重量法比色法果膠酸鈣滴定法:適用于純果膠的測(cè)定。 當(dāng)樣品有顏色不易確定終點(diǎn)。同時(shí)分析果膠酸鈣中的鈣量不能用來計(jì)算果膠酸鈣的實(shí)際含量。重量法: 原理:利用果膠酸鈣不溶于水的特點(diǎn)??扇苄怨z物質(zhì)的測(cè)定:沸水浴中把可溶性果膠物質(zhì)提取出來,加堿使
23、皂化形成果膠酸鈉以除去甲氧基,再酸化使形成果膠酸,最后加入氯化鈣,使形成果膠酸鈣不溶性物質(zhì),加熱使反應(yīng)完全,過濾洗滌,烘干稱重。注意:樣品須充分磨碎,新鮮稱30-50g,干燥,5-10g;煮沸過程中要保持水的體積不變;皂化須完全,可以延長(zhǎng)至數(shù)小時(shí)。本法適用于一般的莖葉樣品。對(duì)于含有大量糖類和脂類或色素時(shí),須先預(yù)處理(乙醇,乙醚)(95%乙醇會(huì)溶解果膠)??偣z物質(zhì)的測(cè)定 原理 同上。 介質(zhì)由取代蒸餾水。結(jié)果表示說明:是干基或鮮基,含量是果膠還是果膠酸鈣須注明。 果膠酸=果膠酸鈣比色法原理:果膠物質(zhì)水解,生成半乳糖醛酸在強(qiáng)酸的條件下與咔唑縮合,形成紫紅色溶液,(530nm)注意:硫酸的純度和濃度
24、都要求高,GR,濃硫酸;須嚴(yán)格除去糖分。糖和濃硫酸反應(yīng),并與咔唑反應(yīng),引起正誤差。chapter4 籽粒中脂肪及脂肪酸的測(cè)定脂類:是動(dòng)、植物組織中含有油脂和類脂兩大類物質(zhì)的總稱。油脂:是油和脂肪的總稱。 油:常溫下為液體的油脂。 脂肪:常溫下為固體的油脂。 均有高級(jí)脂肪酸和甘油組成。脂類存在形態(tài): 植物細(xì)胞和組織中的存在形態(tài):游離態(tài)和結(jié)合態(tài)。游離態(tài)特點(diǎn):以小滴形狀大量堆積于植物的貯藏器官中,當(dāng)細(xì)胞破壞和施用壓力則可以將個(gè)別的小滴聯(lián)成大滴,當(dāng)有足夠的大滴定時(shí)就得到了液體油。這是榨油工業(yè)的基礎(chǔ)。 游離態(tài)油脂的含量是作為油料作物的重要品質(zhì)。 游離態(tài)油脂中所含的脂肪酸根不同,他們的理化性質(zhì)也不完全一樣
25、。但有共同的特點(diǎn):不溶于水,溶于有機(jī)溶劑,如乙醚,三氯甲烷,苯,二硫化碳,四氯化碳等,可以將游離態(tài)的油脂提取出來而與其他成分分離。結(jié)合態(tài)特點(diǎn):與其他成分相結(jié)合。如存在于谷物等淀粉顆粒中,以及營(yíng)養(yǎng)組織中結(jié)合態(tài)的脂類。 有機(jī)溶劑不能完全提取出來。需要樣品與鹽酸溶液一起加熱,淀粉,蛋白質(zhì)等分解,使脂類呈游離狀 態(tài),從而用有機(jī)溶劑提取出來。應(yīng)該提到的是,磷脂在酸的分解作用下幾乎完全解離為脂肪酸和堿,用酸解-提取的方法得到的結(jié)果偏低。一般的規(guī)定:國(guó)際糧農(nóng)組織規(guī)定,酸水解法測(cè)定谷物,面粉中的脂類的含量。對(duì)含磷脂高的產(chǎn)品,如大豆則采用氯仿-甲醇混合液提取方法。在生物化學(xué)領(lǐng)域里,對(duì)于脂類含量的研究,采用氯仿-
26、甲醇混合液提取全部的脂類。測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中油脂和脂肪酸的意義: 是油料作物品種鑒定的基礎(chǔ);是評(píng)價(jià)油脂的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和生理特性的前提;是了解和改進(jìn)提高油料作物含油量和油的品質(zhì)的耕作管理,施肥等措施的依據(jù);是評(píng)價(jià)油料作物的成熟程度和了解其生理生化過程的一種必備手段。油料作物和谷類作物籽粒中粗脂肪的測(cè)定方法:油重法殘余法折光法油重法原理:油脂不溶于水,但能溶于低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑中;有機(jī)溶劑將植物樣品中的油脂浸提出來,然后加熱趕去有機(jī)溶劑即得到油脂,計(jì)算得到其含量結(jié)果。有機(jī)溶劑及其沸點(diǎn):乙醚,35; 石油醚,30-60 ; 二硫化碳,;丙酮,56.5 ; 四氯化碳,70 ; 三氯甲烷,61 ;苯,80.粗脂肪:
27、有機(jī)溶劑提取的物質(zhì)包括油脂和類脂。 類脂包括:磷脂,高級(jí)醇,色素,蠟和脂肪酸等方法特點(diǎn):準(zhǔn)確穩(wěn)定,仲裁法。測(cè)定時(shí)間長(zhǎng),10小時(shí);每次測(cè)定的數(shù)量少:索氏脂肪浸提器每次只能測(cè)定一個(gè);按這種原理生產(chǎn)的儀器一次也只能測(cè)定6個(gè)。注意事項(xiàng):乙醚必須無水。如果為化學(xué)純或以上的純度,則無須有除去水分和雜質(zhì)等步驟,若為工業(yè)用乙醚,則須除去水分和雜質(zhì)步驟純化之。乙醚中含有水或者含有能溶于水的有機(jī)溶劑,如丙酮,醇,其中含有水分或未能除干凈,則將試樣中水溶性和醇溶性的有機(jī)物提取出來,結(jié)果偏高。 試樣必須嚴(yán)格烘干。不同的油料作物要求烘干的溫度不同。樣品中含有水分使提取劑的提取能力和提取的對(duì)象改變,結(jié)果偏高。 提取的溫度
28、一般控制在較低溫度。一般調(diào)節(jié)水浴的溫度是冷凝下滴乙醚的速度為120-180d/min。通常調(diào) 節(jié)水浴的溫度,夏天,65 ;冬天,80 。 保證提取充分和樣品的代表性,樣品在提取前要經(jīng)過粉碎(對(duì)于大粒的樣品是必須的,并且這種粉碎是比較粗的),混勻后磨細(xì)(注意在磨細(xì)的過程中油分的損失) 浸提結(jié)束后須除盡乙醚才能烘干。要通過水浴加熱或自然揮發(fā),并注意在通風(fēng)的環(huán)境中。不飽和脂肪酸在加熱過程中易氧化變質(zhì)使油增重,要求以稱量較低者為標(biāo)準(zhǔn)。殘余法原理:利用油脂能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì),抽提前后質(zhì)量之間的差值,計(jì)算粗脂肪的含量。注意事項(xiàng):同油重法 濾紙包或?yàn)V紙筒的編號(hào)用鉛筆寫,不能用記號(hào)筆,油筆,鋼筆 試樣包應(yīng)捆
29、在一根玻璃棒上,以防止樣品上浮,抽提不完全乙醚使用注意事項(xiàng):乙醚易燃易爆,在整個(gè)使用過程中不能有明火;乙醚有毒,麻醉劑,應(yīng)在通風(fēng)的環(huán)境中進(jìn)行;乙醚在存放的過程中,防止其氧化,并用棕色瓶裝滿;乙醚中過氧化物的檢查:10ml乙醚+1ml新配制的10%KI,在沒有陽光直射,稍搖動(dòng)并靜置分層后,對(duì)著白色背景,從橫斷方向觀察,兩液層均應(yīng)無色。若有色(乙醚層)則表明過氧化物的含量較高。若無色,另取9ml乙醚+1ml飽和KI,看乙醚層有無顏色,若無,可安全使用,否則應(yīng)除去。 乙醚中過氧化物的去除: 將500ml乙醚放到1L的分液體漏斗中,加入200gL-1硫酸亞鐵銨溶液15ml,1:1硫5ml,蒸餾水8ml
30、,振動(dòng)數(shù)分鐘,分層后棄去水相,同法再重復(fù)1-2次(除盡為止),并用蒸餾水洗去多余的試劑,然后用干燥劑CaCl2吸去多余水分。 除去乙醚中過氧化物所用的還原劑還有:硫酸亞鐵,亞硫酸鈉,亞硫酸氫鈉,氯化亞錫等。乙醚過氧化的阻化:放活性碳或氧化鋁與溶液既接觸又不混合。折光法原理:利用油的折光率和溶劑的折光率具有顯著差異的特性來測(cè)定樣品中的含油量。一般非揮發(fā)性的有機(jī)溶劑的折光率高,油的折光率低。根據(jù)有機(jī)溶劑的折光率溶于油后折光率降低的大小和油的含量(有機(jī)溶劑中)正相關(guān)的特性來計(jì)算樣品中的油含量。需要用折光儀測(cè)定油的比重(密度)的測(cè)定同一種或同一類種子的油的比重是固定不變的,因此,油的比重作為不同作物品
31、質(zhì)和特性的特征。方法:比重瓶法(同土壤),20。脂肪酸的測(cè)定動(dòng)植物油脂中脂肪酸的種類很多。動(dòng)植物油脂的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值取決于脂肪酸的組成和含量。脂肪酸不具吸光能力,也無適當(dāng)?shù)某噬噭捎靡合嗌V也可用氣相色譜測(cè)定。脂肪酸總量的測(cè)定氣相色譜法原理:利用C18-C24的有機(jī)酸在一定溫度下氣化,并在介質(zhì)氣體(載氣)的流動(dòng)下,在色譜柱中吸收-分離反應(yīng),因不同的有機(jī)酸分離的時(shí)間不同,用氫火焰離子化檢測(cè)器測(cè)定峰高和面積,計(jì)算含量。脂肪酸應(yīng)用氣相優(yōu)勢(shì):本身具揮發(fā)性(對(duì)于飽和的不揮發(fā)的則可用液相色譜分析),碳原子含量較多,氣相的檢測(cè)靈敏度高。同時(shí)脂肪酸一般需要轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性更強(qiáng)的衍生物,如甲酯,而后進(jìn)行分析。氫火焰離
32、子化檢測(cè)器特點(diǎn):氫火焰的溫度高:2100;極化電壓高:150-300V;使難電離有機(jī)化合物裂解產(chǎn)生含碳自由基,被激發(fā)后形成H3O+,在電場(chǎng)的作用下形成電流;電流的大小和化合物的成分和含量正相關(guān)。糧油籽粒中游離脂肪酸的快速測(cè)定意義:糧油籽粒中油脂以游離脂肪酸的形式存在是油脂品質(zhì)下降的重要標(biāo)志之一。原理:有苯提取種子中的脂肪酸,以一定濃度的NaOH溶液滴定,以脂肪酸的摩爾質(zhì)量為282為標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算其含量(%)。注意事項(xiàng):苯有毒,除操作要迅速外,要注意防護(hù);在有通風(fēng)設(shè)備,低溫的環(huán)境中過濾;酚酞試劑(0.04%)溶解在95%的乙醇溶液中;做空白實(shí)驗(yàn)。健康長(zhǎng)壽的植物油一般的長(zhǎng)壽的油類包括芝麻油、玉米油、葵
33、花籽油以及核桃油。芝麻油 其脂肪酸大體含油酸35.0-49.4%,亞油酸37.7-48.4%,花生酸0.4-1.2%。消化吸收率達(dá)98%。芝麻油中不含對(duì)人體有害的成分,而含有特別豐富的維生素E和比較豐富的亞油酸。 可調(diào)節(jié)毛細(xì)血管的滲透作用,加強(qiáng)人體組織對(duì)氧的吸收能力,改善血液循環(huán),促進(jìn)性腺發(fā)育; 保護(hù)嗓子,減少煙酒危害等作用; 延緩衰老保持春青。玉米油:脂肪酸特點(diǎn)是不飽和脂肪酸含量高達(dá)8085。 本身不含有膽固醇,它對(duì)于血液中膽固醇的積累具有溶解作用,故能減少對(duì)血管產(chǎn)生硬化影響。 對(duì)老年性疾病如動(dòng)脈硬化、糖尿病等具有積極的防治作用。 由于天然復(fù)合維生素E的功能,對(duì)心臟疾病、血栓性靜脈炎、生殖機(jī)
34、能類障礙、肌萎縮癥、營(yíng)養(yǎng)性腦軟化癥均有明顯的療效和預(yù)防作用??ㄗ延停褐舅岬臉?gòu)成因氣候條件的影響而變化:寒冷地區(qū)生產(chǎn)的葵花籽油含油酸15%左右,亞油酸70%左右;溫暖地區(qū)生產(chǎn)的葵花籽油含油酸65%左右,亞油酸20%左右。人體消化率96.5%。 含有豐富的亞油酸,有顯著降低膽固醇,防止血管硬化和預(yù)防冠心病的作用。葵花籽油中生理活性最強(qiáng)的a生育酚的含量比一般植物油高。 亞油酸含量與維生素E含量的比例比較均衡,便于人體吸收利用。核桃油:健腦作用:人體的大腦組織細(xì)胞主要是由 60% 的不飽和脂肪酸和 35% 蛋白質(zhì)所組成。健腦原因:核桃油脂肪中含有 70.7% 的亞油酸和12.4% 的亞麻酸,它們都
35、是不飽和脂肪酸,核桃油中還含有多種微量元素。充足的亞油酸和亞麻酸能排除血管壁內(nèi)的代謝垃圾,使血液凈化,為大腦提供新鮮血液,從而提高大腦的生理功能。 益壽美容:富含的各種特殊有機(jī)成份,易被人體消化吸收利用,而且,核桃油中的多種維生素,有助于人的益壽美容。核桃油中還含有人體不可缺少的微量元素鋅、錳、鉻等。鋅和錳是組成腦垂體、胰腺、性腺的關(guān)鍵成分,并有加強(qiáng)心肌功能的作用;鉻有促進(jìn)人體對(duì)葡萄糖的利用和膽固醇排出的作用,這幾種微量元素與保持心臟的健康,維持內(nèi)分泌的正常功能、抗衰老等,都有著密切的關(guān)系。此外,核桃油中的磷脂可以增強(qiáng)細(xì)胞活力,對(duì)促進(jìn)骨髓造血、提高腦神經(jīng)的功能、加強(qiáng)機(jī)體抗病能力乃至延年益壽都有
36、著重要作用。Chapter5 有機(jī)酸 維生素有機(jī)酸的分析:總酸度,有效酸度,揮發(fā)性酸度以及組分的測(cè)定維生素的分析:Vc,VB,胡蘿卜素的測(cè)定有機(jī)酸的分析有機(jī)酸的特點(diǎn)廣泛存在于植物體中,種類包括:蘋果酸,檸檬酸,酒石酸,琥珀酸,乙酸和草酸等,屬于弱酸類游離態(tài)或以鉀,鈉,鈣鹽的形式存在測(cè)定意義:有機(jī)酸是代謝的中間產(chǎn)物,可以很快地參與到人或動(dòng)物體內(nèi)的各種代謝活動(dòng)中,成為調(diào)節(jié)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)代謝的重要成份; 有機(jī)酸的弱酸性,決定了其在人體內(nèi)調(diào)節(jié)酸堿平衡的重要作用,使人體在正常的生活中不因使用了某些的食物導(dǎo)致體內(nèi)pH發(fā)生較大的改變;有機(jī)酸的作用還在于能軟化血管,防止動(dòng)脈硬化延緩衰老的;酸味的成分,適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)酸含
37、量增加農(nóng)產(chǎn)品的風(fēng)味;有機(jī)酸/糖是判定農(nóng)產(chǎn)品的成熟程度和品質(zhì)的重要指標(biāo);有機(jī)酸在貯存,品質(zhì)管理、評(píng)價(jià),食品加工以及生物化學(xué)等領(lǐng)域的重要成分。有機(jī)酸的測(cè)定總酸度的測(cè)定原理:樣品中的有機(jī)酸用堿滴定時(shí),被中和生成鹽類,用酚酞作指示劑,它在時(shí)達(dá)到終點(diǎn)(微紅色),根據(jù)堿的消耗量來計(jì)算有機(jī)酸的總量。 RCOOH +NaOHRCOONa+H2O說明:總酸度的結(jié)果用樣品中所含的主要酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示,如葡萄,酒石酸();柑橘,水稻檸檬酸();核仁,核果以及漿果,蘋果酸();牛乳,乳酸();蒸餾水中應(yīng)無二氧化碳;用酚酞指示劑:1%酚酞溶于95%乙醇中;一般酚酞濃度0.5%,這里用1%,加大濃度,顯色更靈敏農(nóng)產(chǎn)品由于
38、緩沖作用和色素的影響,終點(diǎn)不易判定時(shí),建議采用電位滴定法。顯色時(shí)間一分鐘不褪色為準(zhǔn),一般實(shí)驗(yàn)是30S。Ph計(jì),一般溶液要求是均勻的,因此需要不斷攪拌,測(cè)定兩相溶液時(shí)要求溶液靜止。揮發(fā)性酸度的測(cè)定揮發(fā)性酸包括:醋酸,蟻酸,丁酸和甲酸等。揮發(fā)性酸的特點(diǎn):在形態(tài)上包括游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種,前者在蒸餾的條件下容易揮發(fā),后者不然; 存在于霉?fàn)€的水果,蔬菜,籽粒,未成熟的種子和果實(shí),是品種的重要指標(biāo)揮發(fā)性酸測(cè)定的方法:直接測(cè)定法:用堿滴定有蒸餾或其它方法得到的揮發(fā)性酸;間接測(cè)定法:將揮發(fā)性酸蒸發(fā)除去后,滴定殘?jiān)牟粨]發(fā)性酸的酸度,由總酸度減去殘?jiān)岫鹊玫綋]發(fā)性酸的含量。直接法原理:游離的揮發(fā)性酸在水蒸汽的作
39、用下分離,磷酸的存在使結(jié)合態(tài)的揮發(fā)性酸發(fā)生離析,經(jīng)過冷凝收集后,用標(biāo)準(zhǔn)堿滴定。說明:同總酸度的測(cè)定磷酸的濃度:1:9,每50ml樣品加1ml磷酸;要求蒸餾出的體積在300ml左右,認(rèn)為在這種過程中揮發(fā)性酸蒸餾才完全;滴定過程須加熱,加熱的溫度為60-65,這樣才能發(fā)揮揮發(fā)性酸的酸度,滴定的終點(diǎn)以1min不退色為準(zhǔn);揮發(fā)性酸的結(jié)果的計(jì)算以乙酸計(jì)()。有效酸度的測(cè)定有效酸度的影響因子:有效酸度取決于原料品種和成熟度,加工方法,其值的大小受酸的數(shù)量和性質(zhì)影響,同時(shí)受其中酸,果膠,某些鹽類和蛋白質(zhì)的緩沖能力的影響;意義:有效酸度是人們對(duì)食品味覺中的酸度的主要決定者測(cè)定方法有: pH試紙法,標(biāo)準(zhǔn)色管比色
40、法和pH計(jì)測(cè)定法pH標(biāo)準(zhǔn)液可以用國(guó)家計(jì)量管理機(jī)關(guān)提供的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按規(guī)定配制,也可以按專業(yè)書籍的配方配置有效酸度測(cè)定 通常用pH計(jì)法測(cè)定 準(zhǔn)確,方便一般的 果蔬樣品與水1:1比例研磨后過濾蘋果等核果類與籽粒樣品與水1 :2-3,沸水煮30min,過濾測(cè)定有機(jī)酸組分的測(cè)定意義:有機(jī)酸的種類組成是農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)特征之一; 有機(jī)酸的種類組成與成熟度,氣候條件,施肥等管理措施有關(guān)常用的方法:氣相色譜法,薄層色譜法和液相色譜法氣相色譜法原理:在硫酸的催化下,有機(jī)酸成為丁酯的衍生物,用氣相色譜法分離分別測(cè)定??啥康慕M分有:甲酸,乙酸,丙酸,異丁酸,正丁酸,乳酸,異戊酸,異乙酸,正己酸,乙酰丙酸,草酸,丙二酸,
41、琥珀酸,反丁烯二酸,蘋果酸,酒石酸,反丙烯三羧酸,檸檬酸等易揮發(fā)的小分子的有機(jī)酸。說明:待測(cè)液的制備過程中,用溫水(80)或800mlL-乙醇溶液提取,溫水提取的結(jié)合酸的效率比乙醇高;乙醇可能將部分的果膠物質(zhì)溶解,增加粘稠度,防礙了進(jìn)一步的過濾和分離。乙醇的濃度不要高于800ml/L乙醇濃度75%-80% ;總有機(jī)酸的量要控制在100mg以下(以檸檬酸計(jì)),高則減少稱樣,一般水果1-10g,蔬菜10-15g; 結(jié)果的準(zhǔn)確性與否,于儀器的狀態(tài)有關(guān)(設(shè)定最佳條件)。液相色譜法原理:處理好的樣品注入反相化學(xué)鍵合(CPAB)相色譜體系,5gL- (NH4)2HPO4為流動(dòng)相,有機(jī)酸在兩相中分配分離;按
42、照碳原子數(shù)和羧基數(shù)量的順序從色譜柱中洗脫下來,用紫外檢測(cè)器(214nm)或示差折光檢測(cè)器測(cè)定,并與標(biāo)準(zhǔn)樣品比較定量。有機(jī)物質(zhì),折光性能高說明:樣品中有機(jī)酸的提取結(jié)束后須經(jīng)過微孔濾膜(m)過濾才能上機(jī)測(cè)定,否則引起柱的污染和測(cè)定干擾;載液濃度和酸度都須準(zhǔn)確(),并也須經(jīng)過微孔濾膜(m)過濾脫氣后才能使用,否則誤差大且不穩(wěn)定;標(biāo)準(zhǔn)液的濃度范圍應(yīng)包括樣品的濃度。維生素的分析維生素的特點(diǎn):廣泛存在于各種生物體中,種類多,化學(xué)結(jié)構(gòu)和生理功能各異?,F(xiàn)在已知的維生素成了一個(gè)大家族。人們把它們排列起來以便于記憶,維生素按A、B、C一直排列到L、P、U等幾十種。根據(jù)其溶解特性分為:水溶性維生素:脂溶性維生素:維
43、生素功用 人體不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),必須通過食物來提供;缺少任何一種時(shí)都會(huì)出現(xiàn)特有的缺乏癥狀。 有助于祛除老年斑,防止夜盲癥和視力減退;抗呼吸系統(tǒng)感染;有助于免疫系統(tǒng)功能正常 ;魚肝油, 肝臟, 深綠色, 深黃色蔬菜及水果中較多 對(duì)神經(jīng)組織有良好影響;幫助消化;防止各種皮膚疾病;防止組織器官老化;天然的利尿劑;增強(qiáng)視力;消除口腔炎癥;防止貧血;促進(jìn)注意力集中;增進(jìn)記憶力與平衡感;防止肝病;有防癌作用;牛奶, 肝臟, 腎, 心臟, 蛋, 豬肝, 瘦肉, 麥胚, 黃豆, 花生 等中較多 治療受傷出血;加速手術(shù)后恢復(fù);降低膽固醇;增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能;具有搞癌作用;可治療預(yù)防感冒,預(yù)防壞血癥;建議:抽煙者
44、和老年人需要大量維生素C,都市人比農(nóng)村人更需要維生素C;綠色蔬菜, 枸櫞類水果中較豐富 制造強(qiáng)健的牙齒和骨胳;有助于對(duì)結(jié)膜炎的冶療;可治療佝僂病、蛀牙、骨質(zhì)疏松癥。建議:夜間工作者與小孩必須補(bǔ)充;魚肝油,肝臟,蛋黃,牛奶 中較多 延緩細(xì)胞老化,延緩老年癡呆癥和中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào);美化皮膚,保持青春;防止血液凝固,預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化, ;防止疤痕;防止流產(chǎn);減輕手腳抽筋、僵硬狀況;可治療生殖機(jī)能障礙 豌豆油、葵花子油、芝麻油、蛋黃、核桃、葵花子、花生米、芝麻、萵筍葉、柑橘皮、瘦肉、乳類等中較多防止膽固醇沉積;助長(zhǎng)毛發(fā);有助于鈣的吸收;治療心臟??;可幫助減肥;防止治療粉刺;建議:以大米為主食的南方
45、人,必須提取更多的維生素F 促進(jìn)乳汁分泌;防止寄生蟲和食物中毒;有鎮(zhèn)痛作用;增加食欲;防止口腔潰爛;預(yù)防貧血 防止內(nèi)出血和痔瘡;冶療經(jīng)期月經(jīng)過量;促進(jìn)血液正常凝固,促進(jìn)腸胃健康功能。 綠色蔬菜中較多,紫色的茄子皮中較豐富 防止瘀傷;增加傳染病抵搞能力;可冶療頭暈;冶療牙齦出血;刷牙時(shí)牙齦出血的人多補(bǔ)充維生素P 防止白發(fā);治療謝頂癥;緩解肌肉痛疼,減速輕皮炎癥狀;建義:頭發(fā)稀疏的男性可服用大量維生素H。 維生素跟酶類一起參與著肌體的新陳代謝,能使肌體的機(jī)能得到有效的調(diào)節(jié) 。缺乏嚴(yán)重時(shí)足以致命;不過超過大量的,特別是脂溶性維生素的大量攝入,往往會(huì)引起中毒。維生素含量高低是評(píng)價(jià)農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之
46、一。維生素分析的一般程序:用酸,堿或酶分解樣品,使其中的維生素游離出來; 用溶劑進(jìn)行提取; 分離干擾物質(zhì),對(duì)樣品進(jìn)行分離提純; 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行定量等。維生素分析的方法選擇微生物學(xué)測(cè)定方法生物學(xué)測(cè)定方法儀器分析的方法:熒光分析法,分光光度法,薄層層析法和高效液相色譜法等根據(jù)樣品品種,類型,待測(cè)維生素的性質(zhì),含量以及干擾物質(zhì)的種類和多少來決定。維生素C的測(cè)定維生素C的特點(diǎn)純品為白色無臭結(jié)晶,熔點(diǎn)190-192,溶于水或乙醇中,不溶于油劑。在水溶液中易氧化,在堿性條件下易分解,在弱酸條件下穩(wěn)定。包括還原型和氧化型。維生素C還原型可被氧化為維生素C氧化型,維生素C氧化型仍具備一定的生理的作用。維生素
47、C氧化型進(jìn)一步水解生成2,3-二酮古樂糖酸,失去生理作用。維生素C測(cè)定方法選擇:2,6-二氯靛酚法(測(cè)定還原型維生素C);2,4-二硝基苯肼法;鉛-硫化氫法;碘酸法;熒光分光光度法。還原型維生素C的測(cè)定( 2,6-二氯靛酚法)原理:抗壞血酸結(jié)構(gòu)中有烯二醇結(jié)構(gòu)存在,具有還原性,能將蘭色燃料2,6-二氯靛酚還原為無色的化合物,維生素C 則被氧化為脫氫的維生素C。2,6-二氯靛酚具有酸堿指示和氧化指示的良種性質(zhì)。在堿性介質(zhì)中深蘭色,而在酸性介質(zhì)中呈淺紅色(變色范圍pH4-5);其氧化態(tài)呈蘭色或淺紅色,還原態(tài)為無色。用堿性染料標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定樣品酸性浸出液維生素C中到剛變淺紅色為終點(diǎn),由染料的用量計(jì)算維生
48、素C的含量。滴定終點(diǎn)的紅色是剛過量的未被還原的的燃料在酸性介質(zhì)中的顏色。注意:2,6-二氯靛酚的酸堿指示特性和氧化還原指示特性來判斷滴定終點(diǎn),要求15s不褪色才為真正的終點(diǎn)。2,6-二氯靛酚的商品為2,6-二氯靛酚鈉,在固體或堿性溶液中都能見光分解產(chǎn)生有顏色的分解產(chǎn)物,這中產(chǎn)物不具備其指示特性,并干擾滴定。棕色瓶和冰箱中存放。2,6-二氯靛酚的濃度需要準(zhǔn)確標(biāo)定,所用的維生素C ,碘酸溶液均不穩(wěn)定,須避光低溫存放(包括配制過程);碘酸溶液以貯備液保存(L-1), VC臨用現(xiàn)配,不能加熱。標(biāo)定反應(yīng):5I- + IO3- + 6H+ 3I2 + 3H2O I2 + 維生素C (Red) 2I- +
49、維生素C (OX) +2H+ 維生素C (Red) +靛酚(OX) 維生素C (OX) +靛酚(Red) 制品切碎到制備成待測(cè)液的過程中操作要快,防止VC在空氣中的氧化,且不要與鐵銅等接觸待測(cè)液的制備要盡量獲得無顏色的澄清溶液(特別是影響終點(diǎn)判定的褐色等深顏色(蘭色,紅色),如有需要?jiǎng)t除去,用陶土(高嶺土)。不能用酸性活性碳,并要做維生素C的回收率實(shí)驗(yàn)。 干擾本法的離子有: Fe2+ Sn2+, Cu2+, SO3 2+, S2O32+ ,SO2; 對(duì)含有其它還原性物質(zhì)的樣品,如Fe2+,可用80mlL-的醋酸代替20gL-的草酸作為浸提劑;亞硫化的脫水樣品,在稀釋到一定體積之前加入20ml丙
50、酮,可除去SO2的干擾。說明:通常測(cè)定和浸提維生素C 都是在20gL-的草酸溶液中進(jìn)行的,目的是保持反應(yīng)在一定的酸度環(huán)境中,避免維生素C 的氧化,同時(shí)此染料不致氧化待測(cè)液中非維生素C的還原性物質(zhì),因此,對(duì)維生素C的測(cè)定具有一定的選擇性;干擾本法的離子有:Fe2+, Sn2+, Cu2+, SO3 2+, S2O32+ ,SO2;對(duì)含有其它還原性物質(zhì)的樣品,如Fe2+,可用80mlL-的醋酸代替20gL-的草酸作為浸提劑;亞硫化的脫水樣品,在稀釋到一定體積之前加入20ml丙酮,可除去SO2的干擾。維生素C總量的測(cè)定( 2,4-二硝基苯肼法)原理:將樣品中的還原型維生素C氧化為氧化型維生素C ,氧
51、化型維生素C與2,4-二硝基苯肼法耦聯(lián)生成紅色的脎,其呈色的強(qiáng)度與濃度成正比。 說明:酸性活性碳必須洗凈還原性的其它離子,否則對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大的誤差;酸性活性碳必須充分的酸化才能有較強(qiáng)的氧化能力,且具有除色素的雙重作用:1mol/L HCl 750ml + 100gCARBON 煮沸1-2小時(shí),并用沸水洗凈(用除干凈Fe3+為標(biāo)準(zhǔn)),烘干;硫脲(10%體積比,溶于50%乙醇)的作用是防止維生素C氧化為2,3-二酮古樂糖酸,在37條件下,促進(jìn)氧化型維生素C和2,4-二硝基苯肼形成脎;硫脲干擾其它物質(zhì)的顯色(選擇性),硫脲的用量要嚴(yán)格一致,并且用量多的話,不僅不利于其它還原類化合物的脫水顯色,更不利
52、于脎的穩(wěn)定;溶液中其它的酮或酮的衍生物和2,4-二硝基苯肼也形成脎,故須做空白試驗(yàn)。這里指的空白試驗(yàn)是沒有維生素C參與下形成的脎的量;糖的碳化干擾顯色,在加入85%的硫酸時(shí)邊滴加邊搖且在冰浴中;在室溫條件下30分鐘立即比色;2,4-二硝基苯肼和氧化型維生素C耦聯(lián)生成紅色的脎在脫水的條件下才穩(wěn)定;比色波長(zhǎng):520nm(495-540nm),干擾大則選540nm(靈敏度是520nm的70%)。維生素B1和維生素B2的測(cè)定維生素B1特點(diǎn):又名硫胺素,抗腳氣病和神經(jīng)炎的因素。維生素B1能促進(jìn)胃腸功能,增進(jìn)食欲,幫助消化,消除疲勞,防止肥胖,潤(rùn)澤皮膚和防止皮膚老化。瘦肉、糧食、花生、葵花子、松子、榛子、
53、紫皮蒜中富含維生素B1。常以游離態(tài)或以焦磷酸鹽存在于自然界中。純品為白色結(jié)晶,熔點(diǎn)246-250,溶于水,微溶于乙醇中,不溶于氯仿或乙醚。遇氧化劑或還原劑很不穩(wěn)定,在干燥時(shí)較耐熱,在堿性條件下易分解,在弱酸條件下()穩(wěn)定。 酵母,米糠,麥胚,花生,黃豆,綠色蔬菜和牛乳,蛋黃,肝臟,豬肉中比較豐富。 動(dòng)物組織不如植物組織豐富。在農(nóng)產(chǎn)品中它常于淀粉,蛋白質(zhì)結(jié)合在一起(胚,皮層,糊粉層),需要進(jìn)行各種相應(yīng)的前處理,使其成為游離型的才可以測(cè)定。測(cè)定方法選擇:硫色素?zé)晒夥ǎ壕S生素B1氧化成硫色素;紫外分光光度法;偶氮染料比色法:重氮化,與對(duì)氨基苯乙酮反應(yīng),呈紫紅色;熒光目測(cè)法;液相色譜法。維生素B2特點(diǎn)
54、:又名核黃素,乳黃素,生長(zhǎng)促進(jìn)的因素。維生素B2有保持皮膚健美,使皮膚皺紋變淺,消除皮膚斑點(diǎn)及防治末梢神經(jīng)炎作用。維生素B2供給不足,可引起皮膚粗糙、皺紋形成,還易引起脂溢性皮炎、口角炎、唇炎、痤瘡、白發(fā)、白癜風(fēng)、斑禿等。常以游離態(tài)或以核酸結(jié)合型存在于自然界中。純品為橙黃色針狀結(jié)晶,熔點(diǎn)282,微溶于水,其水溶液呈黃綠色熒光,在強(qiáng)酸或堿性溶液中則充分溶解;在酸性溶液中即使加熱也很穩(wěn)定,在堿性溶液中不穩(wěn)定,特別是遇光易分解,在干燥時(shí)耐熱,對(duì)空氣氧氣穩(wěn)定。酵母,肝、腎、蛋、牛乳,干酪、肉類、蘑菇中的大紅蘑、松蘑、冬菇、干果中杏仁、蔬菜中金針菜、苜蓿菜含維生素B2比較豐富。維生素B1和B2的特殊功能
55、:維生素B1、B2能促進(jìn)皮膚的新陳代謝,使血液循環(huán)暢通,因而被稱為“美容維生素”。含維生素B1、B2的食物有動(dòng)物內(nèi)臟、魚類、蠔類、臭豆腐、醬豆腐等。維生素B1和B2的測(cè)定方法選擇:核黃素?zé)晒夥ü恻S素?zé)晒夥ǚ止夤舛确ㄒ合嗌V法維生素B1和B2的測(cè)定-液相色譜法原理:樣品在稀鹽酸溶液中經(jīng)消化,用淀粉酶和木瓜酶分解樣液中的淀粉和蛋白質(zhì)后,即得到VB2的測(cè)定樣品溶液。此溶液在堿性鐵氰化鉀溶液中氧化后用異丁醇提取所得維生素B1測(cè)定樣品液,用液相色譜分別測(cè)定。制備樣品待測(cè)液一般過程: 1g樣品在棕色容器中L-1鹽酸 超聲波3min或在121高壓滅菌鍋中20-30min或置沸水浴中加熱30min 冷卻(40 )+加酶混合液 37 過夜(8-12小時(shí))或42-43 ,4h冷卻定容,離心過濾得到維生素B2待測(cè)液 堿性鐵氰化鉀,振搖10s+異丁醇10ml 振動(dòng)45s 留有機(jī)相 無水Na2SO4除去水分 維生素B1待測(cè)液說明:堿性鐵氰化鉀:150gL-1NaOH 97ml +10gL-1鐵氰化鉀 3ml混合酶溶液:淀粉酶,木瓜酶各3g溶于2molL-1醋酸鈉溶液100ml中用熒光分光檢測(cè)器測(cè)定-胡蘿卜素-胡蘿卜素的特點(diǎn):具有類似維生素A的生物活性和效力的物質(zhì),稱維生素A原。令粗糙皮膚恢復(fù)正常,也能治夜盲癥和降低血壓。 胡蘿卜素
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