真菌檢測(cè)方法

1、別離培養(yǎng)：無(wú)菌采取病料接種馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基中,置37 C恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí),長(zhǎng)成絨毛樣菌絲,未見(jiàn)其它細(xì)菌生長(zhǎng).經(jīng) 48小時(shí)培養(yǎng)長(zhǎng)成白色菌落.72小時(shí)菌落呈紐扣狀,由中央向外周逐漸變深,轉(zhuǎn)變成灰白色、灰綠色.取培養(yǎng)物鏡檢可見(jiàn)大量球形的分生抱子.通常人們把真菌和霉菌認(rèn)為是一種病原的兩種說(shuō)法.真正真菌包括霉菌,霉菌只是眾多真菌中的一種.真菌是由單細(xì)胞或多細(xì)胞組成,按有性或無(wú)性方式進(jìn)行繁殖的真核細(xì)胞類微生物.根據(jù)其侵犯人體的部位 分為前部真菌和深部通常人們把真菌和霉菌認(rèn)為是一種病原的兩種說(shuō)法.真正真菌包括霉菌,霉菌只是眾 多真菌中的一種.真菌是由單細(xì)胞或多細(xì)胞組成,按有性或無(wú)性方式進(jìn)行繁殖的真核細(xì)胞

2、類微生物.根據(jù) 其侵犯人體的部位分為前部真菌和深部真菌,包括皮膚癬菌、抱子絲菌、念珠菌、曲霉菌、隱球菌、組織 胞漿菌等.而霉菌多為細(xì)胞真菌的一種,也為深部感染真菌,包括煙曲菌、黃曲菌、黑曲菌、土曲菌等, 常發(fā)生于免疫力低下的患者,引起全身播散性感然,影響預(yù)后.培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料和檢驗(yàn)?zāi)康膩?lái)確定.目前國(guó)標(biāo)方法中使用的培養(yǎng)基有：馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA,孟加拉培養(yǎng)基RBC、高鹽察氏培養(yǎng)基CAO,其中PDA和RBC適合于一般的霉菌和酵母菌生長(zhǎng) ,而 CAO那么適合于高滲性霉菌生長(zhǎng),酵母菌幾乎不長(zhǎng).在日常檢測(cè)中我們發(fā)現(xiàn),有些常見(jiàn)的耐高滲性霉菌,如局限 曲霉、謝瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在

3、PDA、RBC上生長(zhǎng)非常緩慢或不長(zhǎng),而這些菌在高滲培養(yǎng)基如 M40Y、 DG18M40Y瓊脂配方：蔗糖400g,麥芽提取汁20g,酵母提取汁5g,瓊脂20g,氯霉素50mg,蒸儲(chǔ)水 1000ml;DG18 瓊脂配方：葡萄糖 10g,蛋白月東 5g,KH2PO41g,MgSO4 7H2O 0.5g,氯霉素 0.1g,0.2% 二氯硝基 苯月登1.0mL,瓊脂15g,蒸儲(chǔ)水1000mL,PH6.5上那么正常生長(zhǎng),抱子、形態(tài)特征發(fā)育良好,而且酵母菌也能在 M40Y、DG18上生長(zhǎng),因此,假設(shè)能同時(shí)采用 PDA和M40Y或DG18別離培養(yǎng)各類樣品中的霉菌,將能更全面地反映出污染霉菌的菌相.特別是對(duì)枯燥

4、食品、高糖食品、淹漬食品等,更有必要同時(shí)采用 M40Y或DG18.由于霉菌中很多種類不會(huì)產(chǎn)生有毒的霉菌毒素,危害較小,而有的菌株即使?染數(shù)量不多,但其產(chǎn)生的霉菌毒素卻危害較大,因此僅作霉菌計(jì)數(shù)并不能全面反映其危害程度,重要的是要知道污染菌的菌相 ,才能更好地判斷被污染食品的平安程度.為此,國(guó)外有些研究者設(shè)計(jì)出各類選擇性培養(yǎng)基,可以識(shí)別產(chǎn)毒的霉菌.如AFPA培養(yǎng)基配方：酵母提取汁20g,蛋白月東10g,檸檬酸鐵俊0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,瓊脂 15g,蒸儲(chǔ)水1000mL,PH5.6用于別離黃曲霉毒素產(chǎn)生菌高污染率的食品.產(chǎn)黃曲霉毒素的菌株黃曲霉和寄生曲霉在AFPA上30 c培養(yǎng)2

5、3天就形成反面有亮橙黃色的特征性菌落,非常容易識(shí)別.有人利用該培養(yǎng)基別離黃曲霉高污染食品花生、玉米等,取得了滿意的結(jié)果.因此,針對(duì)不同樣品,有目的地設(shè)計(jì)出相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基,以篩選污染菌中的危險(xiǎn)菌群,將是一個(gè)值得探索的方向.2接種方式接種方式主要有傾注法和涂布法兩種.目前國(guó)際方法中采用傾注法 ,但近來(lái)國(guó)際上有不少學(xué)者認(rèn)為霉菌計(jì)數(shù)采用涂布法更適宜.Beuchat和Matsuda等人分別對(duì)這兩種方法作了大量比擬試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),對(duì)霉菌計(jì)數(shù)來(lái)說(shuō),涂抹法有以下幾方面優(yōu)越于傾注法：培養(yǎng)出的霉菌菌落數(shù)較多：培養(yǎng)所需的時(shí)間較短；霉菌抱子、菌落形態(tài)特征發(fā)育完全,便于鑒定.這是由于絕大多數(shù)霉菌是好氧的,在培養(yǎng)基外表生

6、長(zhǎng)快,發(fā)育好,而混在培養(yǎng)基中發(fā)育就受影響,而且在培養(yǎng)基傾注時(shí)霉菌抱子易受熱損傷.我們?cè)谧约旱膶?shí)驗(yàn)室也做了類似的比擬試驗(yàn),通過(guò)對(duì)30種常見(jiàn)霉菌的試驗(yàn)證實(shí)了上述的結(jié)論.因此,我們認(rèn)為,霉菌計(jì)數(shù)采用涂布法既準(zhǔn)確又省時(shí),值得推廣.3培養(yǎng)溫度經(jīng)對(duì)多種常見(jiàn)霉菌的最適生長(zhǎng)溫度作了調(diào)查發(fā)現(xiàn),大局部菌種的最適溫度為2530 C.但一些產(chǎn)曲霉毒素的菌株或動(dòng)物致病菌那么需要更高的溫度,如黃曲霉35C、構(gòu)巢曲霉33C、煙曲霉37 C、小抱子菌35 C.因此,培養(yǎng)溫度也應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)目的而定,一般情況下都采用 2528 c培養(yǎng),假設(shè)有特殊培養(yǎng)目的,那么應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)培養(yǎng)溫度.4培養(yǎng)時(shí)間我們對(duì)30種常見(jiàn)霉菌的生長(zhǎng)速度作了調(diào)查,正

7、常培養(yǎng)條件下,培養(yǎng)34天的菌落數(shù)與57天的基本相同,但菌種的特征不明顯,因此,如果只要作霉菌計(jì)數(shù),培養(yǎng)34天已根本到達(dá)目的,但如果還要進(jìn)一步分 類鑒定,那么需要培養(yǎng)更長(zhǎng)的時(shí)間714天.必須特別注意的是,有幾類生長(zhǎng)特別快、菌絲很多的菌,那么必需在 48小時(shí)以內(nèi)計(jì)數(shù),否那么菌絲就會(huì)覆蓋整個(gè)平皿,無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù).這類菌主要有：毛霉、根霉、犁頭霉、共頭霉、 木霉等濕度較大的樣品,這類菌污染較多,檢測(cè)這類樣品,應(yīng)提早觀察記錄.5最適計(jì)數(shù)范圍霉菌菌落由抱子和菌絲組成,相當(dāng)擴(kuò)散,在直徑9cm的平皿里,菌落數(shù)稍多就相互交叉重疊,影響計(jì)數(shù),但 數(shù)量太少又會(huì)產(chǎn)生較大的誤差,因此選擇適當(dāng)?shù)南♂尪扔?jì)數(shù)是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)

8、鍵環(huán)節(jié)之一.我們對(duì)這方面作了一些觀察研究,首先是將實(shí)驗(yàn)菌株的斜面培養(yǎng)物制成含有約106個(gè)/ml的抱子懸液,并用血球計(jì)數(shù)器在顯微鏡下準(zhǔn)確計(jì)數(shù),然后將飽子懸液作10-110-6倍稀釋,吸取不同稀釋度的稀釋液接種于PDA,25 c培養(yǎng)5天后計(jì)數(shù).30種常見(jiàn)霉菌的兩種不同計(jì)數(shù)方法所得結(jié)果比擬顯示,大局部菌株每平板含有 1050個(gè)菌落的稀釋度時(shí)的計(jì)數(shù)與顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)果最接近；有近一半的菌株,每個(gè)平板含50100個(gè)菌落已較難計(jì)數(shù),而大部分菌株,超過(guò)100個(gè)/平皿或小于10個(gè)/平皿的計(jì)數(shù)結(jié)果就與顯微計(jì)數(shù)結(jié)果存在較大差異,因此,應(yīng)盡量選擇1050個(gè)/平皿的稀釋度進(jìn)行霉菌計(jì)數(shù).而對(duì)上述提及的菌絲很豐富、菌落特別擴(kuò)

9、散的毛霉、根霉、犁頭霉等菌株,那么應(yīng)在更少的范圍內(nèi)計(jì)數(shù)30個(gè)/平皿以內(nèi).為限制霉菌的生長(zhǎng)速度和菌落的生長(zhǎng)范圍 ,可在培養(yǎng) 基中添加少量抗生素 ,如氯霉素50100mg/L, 金霉素20100mg/L, 慶大霉素50mg/L, 土霉素100mg/L6霉菌檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)特別注意的事項(xiàng)6.1 由于霉菌檢測(cè)所需的時(shí)間較長(zhǎng),中間又需要屢次觀察,因此實(shí)驗(yàn)前一定要作好實(shí)驗(yàn)方案,明確觀察 記錄的時(shí)間.6.2 霉菌胞子通過(guò)空氣傳播,所以實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)保持實(shí)驗(yàn)室平靜,減少空氣流通；操作時(shí)手腳要快,動(dòng)作要輕,特別是培養(yǎng)過(guò)程中,如果觀察時(shí)動(dòng)作過(guò)大,早期生長(zhǎng)出的霉菌抱子就會(huì)在培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散,形成新的菌落,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確.6.3

10、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)認(rèn)真做好全面的消毒工作,包括操作人員手指、實(shí)驗(yàn)室空間、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等,實(shí)驗(yàn)后應(yīng)第一時(shí)間將有霉菌的培養(yǎng)物高壓滅菌,預(yù)防進(jìn)一步擴(kuò)散.6.4 對(duì)使用的菌株的生理、生態(tài)、形態(tài)、毒理、致病性必需有充分的了解,并作好相應(yīng)的防擴(kuò)舉措,防止污染其它物品.3.2.1 涂片鏡檢分別取l5羽雞肺部或氣囊有結(jié)節(jié)的病料,將結(jié)節(jié)用2片載玻片壓碎后分開(kāi),再用鐐子調(diào)勻,革蘭氏染色后蓋上蓋玻片,置高倍鏡下觀察.結(jié)果在暗視野下可見(jiàn)到大量的分隔菌絲,氣囊上的結(jié)節(jié)除可見(jiàn)到菌絲外,還可以見(jiàn)到散在的藍(lán)色球狀 抱子.3.2.2 別離培養(yǎng)挑取典型病變結(jié)節(jié)接種于血液瓊脂平板培養(yǎng)基上,置于 37 C溫箱中培養(yǎng).24 h后可 見(jiàn)到小米粒大小的白

11、色絨毛狀菌落,48 h后菌落增大,60 h后轉(zhuǎn)為淡綠色,72 h后菌落轉(zhuǎn)為暗綠色,一 個(gè)星期后呈黑褐色4.用接種環(huán)挑取菌落涂片鏡檢,丁 可見(jiàn)到曲霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)菌絲有隔,末端膨大成球 狀,球上有小梗,有的梗上有抱子存在,狀如花冠,符合曲霉菌的特點(diǎn).根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果再結(jié)合病史調(diào)查、現(xiàn)場(chǎng)觀察、臨床病癥及剖檢變化,可確診為禽曲霉菌病.一直接檢查 是最簡(jiǎn)單而重要方法,淺部感染真菌的病變標(biāo)本如毛發(fā)、皮屑、甲屑置玻片上,滴 加10%KOH ,覆蓋玻片微熱熔化角質(zhì)層,再將玻片壓緊,用吸水紙吸去周圍多余堿液,在顯微鏡下觀察, 見(jiàn)皮屑甲屑中有菌絲,或毛發(fā)內(nèi)部或外部有成串抱子,即可初步診斷為癬菌感染,但不能確定菌

12、種.深部 感染真菌標(biāo)本如痰,腦脊液亦可做涂片用革蘭氏染色白色念珠菌或愚汁負(fù)染色隱球菌觀察形態(tài)特 征.二培養(yǎng)檢查 本法可確定菌種,輔助直接檢查缺乏,通常用沙保氏培養(yǎng)基2228 C,深部真菌可用血瓊脂或腦心葡萄糖血瓊脂37c培養(yǎng),或根據(jù)不同菌種運(yùn)用不同培養(yǎng)基,如抱子絲菌可用胱氨酸血液葡萄糖瓊脂,必要時(shí)運(yùn)用鑒別培養(yǎng)基和生化反響,同化試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定.三免疫學(xué)試驗(yàn) 近年來(lái)有許多方法用于檢測(cè)深部感染真菌的抗體,作輔助診斷莢膜組織胞漿菌、念珠菌、曲霉菌.但系統(tǒng)性感染患 者常因免疫功能降低不出現(xiàn)抗體；而且許多真菌間抗原性有交叉反響；有的產(chǎn)生抗體后維護(hù)時(shí)間較長(zhǎng),正 常人群中有一定比例的陽(yáng)性率,那么必須結(jié)合臨床情

13、況分析結(jié)果才能作出恰當(dāng)?shù)脑\斷.由于上述檢測(cè)抗體受到許多因素的限制,及深部真菌感染時(shí),早期培養(yǎng)陽(yáng)性率甚低,晚期那么多于失去治療時(shí)機(jī),因此用免疫 學(xué)方法從血清或其他部位檢測(cè)真菌抗原,對(duì)早期診斷具有重要意義.如乳膠凝集法檢測(cè)新型隱球菌病患者 的莢膜多糖抗原,ELISA法檢測(cè)白色念珠菌感染者的甘露聚糖抗原及免疫熒光法檢測(cè)抱子絲菌病患者的可 溶性抗原等,均為早期,快速、特異的診斷方法.四動(dòng)物試驗(yàn) 其些真菌對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有致病性,如皮炎芽生菌,球抱子菌可在小白鼠,豚鼠體內(nèi)生長(zhǎng),白色念珠接種家兔小白鼠可發(fā)生腎臟膿腫致死.四、防治原那么 真菌感染尚無(wú)特異預(yù)防,主要注意公共衛(wèi)生和個(gè)人衛(wèi)生,碘化物治療抱子絲菌病、毛霉

14、菌病有 一定療效.制霉素、灰黃霉素、克霉嚏三苯甲霉嚏等外用或內(nèi)服過(guò)癬癥和白色念珠菌病等有較好療效. 近年服道5-氟胞喀咤5-FC治療單細(xì)胞真菌感染療效顯著.二性霉素B可用于深部全身真菌感染.玻片培養(yǎng)又稱小培養(yǎng),小培養(yǎng)法可以隨時(shí)觀察真菌的生長(zhǎng)形態(tài)如大分生抱子、小分生抱子及抱子柄 等,還可以隨時(shí)觀察其生長(zhǎng)發(fā)育的全部情況,有利于菌種的鑒定.？1、鋼環(huán)法？1材料：白假絲酵母菌、沙保弱培養(yǎng)基、玻片培養(yǎng)又稱小培養(yǎng),小培養(yǎng)法可以隨時(shí)觀察真菌的生 長(zhǎng)形態(tài)如大分生抱子、小分生抱子及抱子柄等,還可以隨時(shí)觀察其生長(zhǎng)發(fā)育的全部情況,有利于菌種 的鑒定.？1、鋼環(huán)法？1材料：白假絲酵母菌、沙保弱培養(yǎng)基、無(wú)菌玻片、蓋玻片

15、、鋼環(huán)帶有缺口、石蠟.？2方法？用無(wú)菌鐐子取無(wú)菌小培養(yǎng)鋼環(huán),環(huán)的兩面分別蘸取熔化的固體石蠟,平置于無(wú)菌載玻片上,另取一 無(wú)菌蓋玻片,在酒精燈火焰上加熱后覆蓋于鋼環(huán)上,待冷后,小培養(yǎng)鋼圈即被固定于載玻片與蓋玻片之間.用毛細(xì)滴管吸取融化的培養(yǎng)基,從鋼環(huán)上端孔注入,注入量占容積的1/2即可.？培養(yǎng)基冷卻凝固后,用接種針挑取材料,由上端孔接種于環(huán)內(nèi)培養(yǎng)基上.？置濕盒內(nèi),室溫或 37c下培養(yǎng)2 3d后,逐日觀察,鏡下可連續(xù)看到真菌生長(zhǎng)過(guò)程及菌絲、抱子等 特征,一般7d左右即可長(zhǎng)好.？也可不用小培養(yǎng)鋼環(huán),直接將融化的培養(yǎng)基滴于無(wú)菌玻片上,待冷凝后從周邊接種材料,用蓋玻片 覆蓋后培養(yǎng),在顯微鏡下連續(xù)觀察生長(zhǎng)

16、情況.？3結(jié)果：鏡下觀察可見(jiàn)到有胞壁增厚的厚膜抱子及假菌絲.？2、小塊瓊脂玻片培養(yǎng)法 ？用無(wú)菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無(wú)菌接種針或接種環(huán)切成大約1cm2的方塊,將其放置于滅菌的載玻片上.將標(biāo)本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位,然后用無(wú)菌鐐子取一無(wú)菌的蓋玻片蓋在 瓊脂上.在無(wú)菌平皿內(nèi)放入少量無(wú)菌水和一個(gè)無(wú)菌U形或V形玻璃棒.將此載玻片置于玻璃棒上,蓋上平皿蓋培養(yǎng).每日用肉眼和顯微鏡觀察抱子和菌絲的特點(diǎn).涂片找真菌標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程？1檢驗(yàn)?zāi)康模河酶锾m染色找酵母樣菌,為臨床感染的初步診斷和用藥提供依據(jù).2適用范圍：各種涂片標(biāo)本主要如白帶等3檢驗(yàn)原理3.1 真菌的染色結(jié)構(gòu)如革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁.3.

17、2 經(jīng)過(guò)革蘭染色后變成紫色,體形較細(xì)菌大容1檢驗(yàn)?zāi)康模河酶锾m染色找酵母樣菌,為臨床感染的初步診斷和用藥提供依據(jù).2適用范圍：各種涂片標(biāo)本主要如白帶等3檢驗(yàn)原理3.1 真菌的染色結(jié)構(gòu)如革蘭陽(yáng)性菌細(xì)胞壁.3.2 經(jīng)過(guò)革蘭染色后變成紫色,體形較細(xì)菌大容易識(shí)別.4試劑：4.1 試劑廠家：珠海貝索生物科技公司4.2 包裝規(guī)格：250mIX 44.3 試劑盒組成4.3.4沙黃溶液沙黃、乙醇5儀器設(shè)備：奧林巴斯雙目顯微鏡6操作程序6.1 涂片：用無(wú)菌接種環(huán)取一環(huán)無(wú)菌生理鹽水于玻片上,再用無(wú)菌接種環(huán)挑取所需菌落,在玻片的生 理鹽水上均勻涂抹,自然晾干.6.2 固定：6.3 將龍膽紫液Crystal Viole

18、t 滴加在已固定的涂片上,染10秒鐘后,水洗并甩干.6.4 滴加碘溶液Iodine Solution , 10秒鐘后水洗并甩干6.5 再滴加脫色液(Decolorizer ),脫色1020秒(或搖動(dòng)玻片至紫色不再脫落為止,根據(jù)涂片之 厚薄之需要),水洗并甩干.6.6 加沙黃溶液(Safranin Solution) 復(fù)染10秒之后水洗.6.7 以濾紙吸干或在空氣中自然干后,油鏡鏡檢.7結(jié)果觀察7.1有真菌抱子及菌絲出現(xiàn)報(bào)告：找到真菌.7.2無(wú)真菌抱子及菌絲出現(xiàn)報(bào)告：未找到真菌.8質(zhì)量限制：大腸埃希菌呈G-桿菌；金黃色葡萄球菌呈G+球菌.9考前須知9.1 涂片不能太厚,并且要均勻,否那么菌體堆積

19、或分散不勻,會(huì)影響染色結(jié)果.9.2 脫色要至無(wú)藍(lán)色脫落為止.9.3 火焰固定時(shí),應(yīng)預(yù)防菌體過(guò)分受熱而皺縮變形,影響結(jié)果的判斷.9.4 每次染色時(shí)應(yīng)用大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌作陰陽(yáng)性質(zhì)控對(duì)照.9.5 床意義：輔助臨床判斷是否是藥物引起的菌群失調(diào)或真菌感染.9.6 持文件：全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第三版)表3鼻咽喉標(biāo)本標(biāo)本類型采集時(shí)間和溫度重復(fù)采樣限制說(shuō)明原那么裝置和最小量轉(zhuǎn)運(yùn)儲(chǔ)存鼻用預(yù)先被無(wú)菌 鹽水濕潤(rùn)的拭子插 入鼻孔約2cm,對(duì)著 鼻粘膜用力旋轉(zhuǎn),蘸 取粘膜上分泌物,緩 慢抽出,將拭子直接 送檢.拭子轉(zhuǎn)運(yùn)2h,常溫24h,常溫1/d喉用壓舌板壓舌,用無(wú)菌拭子從咽后、 扁桃體和發(fā)炎區(qū)域 采樣,不

20、要碰觸舌頭 和面頰.拭子轉(zhuǎn)運(yùn)2h,常溫24h,常溫1/d喉拭子培養(yǎng)不能用于會(huì)厭發(fā)炎的患者.主要病原菌：A群B溶血鏈球菌可選擇性報(bào)告：溶血隱秘桿菌表6糞便標(biāo)本類型采集時(shí)間和溫度重復(fù)采樣 限制說(shuō)明原那么裝置和轉(zhuǎn)運(yùn)儲(chǔ)存最小量常規(guī)培養(yǎng)直接置入一清潔、廣口的無(wú)菌容器無(wú)菌容器2g 或者1.5ml< 1h,常溫1/d住院時(shí)間超過(guò)3 d 或入院診斷不是胃腸炎 的患者不做常規(guī)糞便培 養(yǎng).對(duì)這些患者應(yīng)進(jìn)行梭 狀芽抱桿菌的培養(yǎng)或毒 素檢測(cè).梭狀芽抱桿菌將液體或軟 大便直接送入清 潔、廣口無(wú)菌容器 內(nèi).無(wú)菌容器：2g或者1.5ml< 1h,常溫1-2h,4 >24h,-20 C培養(yǎng)：2 d ,4,3 d ,4 c 或-70 更長(zhǎng)用于毒素檢測(cè)d1/2患者應(yīng)該是每24h 排瀉液體或軟大便5 次的患者.-20 C冷凍易于使細(xì)胞毒素快速喪失.E. coliO157:H將液體或血便放入一清潔、干燥的容器無(wú)菌容器2g或2ml< 1h,常溫4 c<24h,1/d有腹部痙攣的患者在發(fā)病6小時(shí)內(nèi)采集到 的血或液狀便效果更好直腸拭子1 .小心插入 無(wú)菌拭子超越肛 門括約肌約2-