王雅琳 薄層色譜

1、色譜分離技術(shù)色譜分離技術(shù)王雅琳王雅琳2014.11.06薄層色譜（薄層色譜（TLC） 柱色譜（柱色譜（CC）2 氣相色譜（氣相色譜（GC）3薄層色譜（薄層色譜（TLC） 高效液相色譜（高效液相色譜（HPLC）4薄層色譜薄層色譜 薄層色譜，又稱薄層色譜，又稱薄層層析薄層層析，常用，常用TLCTLC表示。表示。 將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻的鋪成薄層，試樣點在薄層的一端，流動相借毛細(xì)作用流經(jīng)固定相，使被分離的物質(zhì)展開。固定相：固定相：固體吸附劑。流動相：流動相：液體展開劑。特點：特點：方法簡便易行,價格低廉；分析快速（展開時間短）；分離效果高；需要樣品量少；應(yīng)用廣泛；范圍：范圍：適

2、用于揮發(fā)性較小或在較高溫度下易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。一、基本原理一、基本原理（一）吸附色譜分離原理（一）吸附色譜分離原理利用固定相對各組分吸附力的大小及展開劑解吸附作用的差異進(jìn)行分離。使吸附能力較強(qiáng)或溶解度較大的組分隨展開劑移動速度慢，吸附力弱的組分隨展開劑移動快。溶劑溶劑前沿前沿起始線起始線ABabc（二）比移值（二）比移值R Rf f：原原點點到到溶溶劑劑前前沿沿的的距距離離原原點點到到斑斑點點中中心心的的距距離離 fRcbRcaR)b(f)a(f Rf是薄層色譜法基本定性參數(shù)，一定條件時Rf為定值，可用范圍Rf值在0.150.75之間。被分離的物質(zhì)極性越大，越易被吸附，Rf

3、越小,反之越大。二、吸附劑與展開劑二、吸附劑與展開劑（一）吸附劑（固定相）的選擇（一）吸附劑（固定相）的選擇常用吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺。吸附劑的選擇要合適，與流動相、被分離化合物不反應(yīng)。(1）硅膠：硅膠：a.a.極性吸附劑，應(yīng)用范圍廣；b.b.物理吸附為主，氫鍵吸附為輔;c.c.略帶酸性，不直接用于堿性成分的分離;d.d.吸附容量大，與羥基數(shù)目有關(guān).硅膠商品名稱硅膠商品名稱黏合劑黏合劑熒光添加劑熒光添加劑應(yīng)用應(yīng)用硅膠硅膠H H無無無無薄層色譜，柱色譜薄層色譜，柱色譜硅膠硅膠G G有有無無薄層色譜，柱色譜薄層色譜，柱色譜硅膠硅膠GFGF254254有有有有在在254nm254nm紫外燈下看

4、熒光紫外燈下看熒光(2)氧化鋁：氧化鋁：a.a.極性吸附劑，較硅膠強(qiáng)；b.b.物理吸附為主，氫鍵吸附為輔；c.c.略帶堿性，不直接用于酸類成分的分離。氧化鋁極性比硅膠大，適用于分離極性較小的化合物（烴、醚、酮、醛、鹵代烴等），因為極性化合物被氧化鋁較強(qiáng)烈吸收，分離較差，Rf值較小；相反，硅膠適用于分離極性較大的化合物（羧酸、醇、胺等），而非極性化合物在硅膠板上吸附較弱，分離較差，Rf值較大。（二）展開劑（流動相）的選擇（二）展開劑（流動相）的選擇選擇原則：選擇原則：展開劑應(yīng)該對被分離的物質(zhì)有一定的溶解度（相似相溶）。展開劑對被分離組分有一定的解吸能力，但又不能太大。 待測組分Rf值在0.15-

5、0.75之間。常見溶劑極性大?。撼Ｒ娙軇O性大小： 石油醚環(huán)已烷四氯化碳苯甲苯 乙醚三氯甲烷（氯 仿）乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水冰醋酸三、薄層色譜分類三、薄層色譜分類使用目的：定性薄層色譜：分析和鑒別。制備薄層色譜：分離和提純。二者原理相似，主要區(qū)別在于樣品和吸附劑的用量。 吸附劑厚度鑒別的TLC制備TLC0.25mm至少3mm（一）薄層色譜分離操作（一）薄層色譜分離操作1 1、薄層色譜板的制備、薄層色譜板的制備3 3、點樣、點樣4 4、展開、展開5 5、顯色、顯色2 2、活化、活化1 1、薄層色譜板的制備、薄層色譜板的制備要求：要求：玻璃板需光潔，否則吸附劑易脫落；大小由需求決定。薄層板分

6、類和制法：薄層板分類和制法：軟板的制備硬板的制備 軟板軟板：直接將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑。 多用于氧化鋁薄層板的制備。（實驗室：硅膠GF254）優(yōu)點：優(yōu)點：方法簡便、隨用隨鋪、展開速度快。缺點：缺點：吸附劑易脫落、只能用與平面約15的近水平展開，效果差。（1 1）軟板制備（干法鋪板）軟板制備（干法鋪板）浸漬法浸漬法：將兩塊大小一致的干凈玻璃板背靠背緊貼，緩慢、均勻地浸入調(diào)制好的吸附劑中，取出后分開晾干。軟板制備不宜過快及停頓，否則厚薄不均勻影響層析效果。用硫酸鈣為粘合劑鋪成的板稱為硅膠G板；用羧甲基纖維素鈉作黏合劑鋪成的板為硅膠-CMC板。(2)(2) 硬板制備（濕法鋪板）硬板制備

7、（濕法鋪板）硬板硬板：吸附劑加粘合劑制成的板?？捎糜诠枘z、氧化鋁、聚酰胺等薄層板的制備，但常用的還是硅膠硬板。常用的粘合劑：煅石膏（ 2CaSO4H2O ） 羧甲基纖維素鈉（CMC-Na） 機(jī)械強(qiáng)度差，易脫落，但不易腐蝕 機(jī)械強(qiáng)度好，不易脫落，但易腐蝕制備：制備：硅膠中逐漸加羧甲基纖維素鈉水溶液（7-8g/1000mL），調(diào)成均勻的糊狀，超聲，用藥勺涂于潔凈玻璃片上，均勻鋪開，注意不要引入小氣泡，將帶漿玻璃片在水平桌面上下輕微震動數(shù)次，并不時旋轉(zhuǎn)方向，顛制成薄厚均勻、表面光滑平整、沒有氣孔的薄層板，室溫條件下晾干。2 2、活化、活化硅膠和氧化鋁含水量越多，吸附活性越弱。硅膠和氧化鋁含水量越多，

8、吸附活性越弱。 只要在110左右加熱，這些“自由水” 就能被可逆性地除去。利用這一原理可以對吸附劑進(jìn)行活化（去水）和脫活化（加水）處理，以控制吸附劑的活性。 將晾干后的薄層板放入烘箱中，緩慢升溫至110，恒溫30min后取出，冷卻，置于干燥器中備用。注：注：不可將剛鋪好的薄層板立即烘烤活化，否則板子會裂口。點樣工具：點樣工具：玻璃毛細(xì)管或微量點樣器 點樣位置：點樣位置：距底邊約1cm的起始線上，點與點的距離為1-1.5cm,斑點直徑一般不超過2mm。點樣方式：點樣方式：圓點狀點樣。樣品溶解：樣品溶解：用甲醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚、丙酮等揮發(fā)性有機(jī)溶劑，最好選用與展開劑極性相似的溶劑。注意事項

9、注意事項 ：動作要輕，毛細(xì)管不能混用；點樣量勿超載，防止拖尾；樣品濃度較稀時，可多次點樣，每次點樣后要晾干后方可再點 ； 3 3、點樣、點樣 4 4、展開、展開展開方式：展開方式：上行展開展開過程：展開過程：按一定比例配好展開劑，將展開劑（一般210mL）倒入層析缸，待層析缸被展開劑飽和后（平衡系統(tǒng)），再迅速將點樣薄層板放入，在密閉環(huán)境下展開。當(dāng)溶劑移動到接近薄層上端1cm處，取出薄板，劃出溶劑前沿，將溶劑吹干。注意事項：注意事項：a、展開劑不浸沒樣品點。b、薄層板呈傾斜狀。c、展開過程應(yīng)在密閉容器中進(jìn)行。5 5、顯色、顯色顯色也稱定位，即用某種方法使經(jīng)色譜展開后的混合物斑點呈現(xiàn)顏色，以便觀察

10、其位置。常見的定位方法：常見的定位方法： 光學(xué)檢出法：紫外照射法 試劑檢出法：浸漬顯色法（ KMnO4 ），噴霧顯色法（濃H2SO4，F(xiàn)eCl3）(1)蒸氣檢出法：碘蒸氣顯色法1、碘：主要針對不飽和或者芳香族化合物配制方法 ：在100mL廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒?；蛘咴谄恐?，加入10g碘粒，30g硅膠 ；2、高錳酸鉀：主要針對含還原性基團(tuán)化合物，比如羥基，氨基，醛配制方法 ：1.5g KMnO4+10g K2CO3 +1.25mL10%NaOH +200mL水，使用期3個月；3、紫外燈：主要針對含共軛基團(tuán)的化合物，芳香化合物。常用常用顯色劑的顯色目標(biāo)物及其配制方法：顯色劑的顯色目標(biāo)物及其配制方法：（二）制備薄層色譜（二）制備薄層色譜（PTLCPTLC）用作制備的薄層色譜。分離多達(dá)500mg的樣