免疫學(xué)技術(shù)和臨床

1、CONFIDENTIALRev. 05/07/02美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司免疫產(chǎn)品市場(chǎng)部免疫產(chǎn)品市場(chǎng)部洪軍洪軍 2007.4 安徽安徽CONFIDENTIALRev. 05/07/022內(nèi)容摘要內(nèi)容摘要CONFIDENTIALRev. 05/07/023什么是免疫分析的表現(xiàn)什么是免疫分析的表現(xiàn)CONFIDENTIALRev. 05/07/024免疫檢測(cè)的分析表現(xiàn)免疫檢測(cè)的分析表現(xiàn)準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性精密度精密度靈敏度靈敏度特異性特異性檢測(cè)線性范圍檢測(cè)線性范圍試劑穩(wěn)定性試劑穩(wěn)定性定標(biāo)周期定標(biāo)周期開瓶效期開瓶效期CONFIDENTIALRev. 05/07/025免疫分析檢測(cè)的臨床表現(xiàn)免疫

2、分析檢測(cè)的臨床表現(xiàn)臨床靈敏度和特異性是分析結(jié)果準(zhǔn)確性的臨床表現(xiàn)臨床靈敏度和特異性是分析結(jié)果準(zhǔn)確性的臨床表現(xiàn):理想狀態(tài)理想狀態(tài)健康人群健康人群疾病人群疾病人群靈敏度靈敏度 100%特異性特異性 60%特異性特異性 100%靈敏度靈敏度 50%靈敏度增加靈敏度增加 特異性增加特異性增加假陰性假陰性 假陽(yáng)性假陽(yáng)性Cut-off設(shè)置設(shè)置cutoff值在此處值在此處用于篩查分析用于篩查分析設(shè)置設(shè)置cutoff值在此處值在此處減少錯(cuò)誤診斷帶來的高花費(fèi)減少錯(cuò)誤診斷帶來的高花費(fèi)設(shè)置設(shè)置cutoff值在此處值在此處為了最少化錯(cuò)誤結(jié)果為了最少化錯(cuò)誤結(jié)果CONFIDENTIALRev. 05/07/026關(guān)于分析試

3、劑的檢測(cè)靈敏度的定義關(guān)于分析試劑的檢測(cè)靈敏度的定義分析靈敏度分析靈敏度( (Analytical Sensitivity)Analytical Sensitivity)v使用A點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品v分析內(nèi)的測(cè)試v最低可辨別0值的功能v分析試劑的理論上的極限功能靈敏度功能靈敏度( (Functional Sensitivity)Functional Sensitivity)v一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品v分析間的測(cè)試,用0.05AccuTnI (ng/ml)Number of ObservationsFunctional Sensitivity = 0.032 ng/mlFunctional Sensitivit

4、y(Concentration is 0.032ng/ml w hen CV=20%)0204060801001200.0010.0100.1001.000AccuTn I Concentration (ng/ml)Total %CV0.032CONFIDENTIALRev. 05/07/028免疫分析的基本概念免疫分析的基本概念CONFIDENTIALRev. 05/07/029免疫分析的經(jīng)典定義免疫分析的經(jīng)典定義免疫分析（免疫分析（Immunoassay） 是一種技術(shù)用于檢測(cè)和是一種技術(shù)用于檢測(cè)和/或定量或定量 Y抗體（抗體（Antibody）通過一個(gè)特殊的只能和被分析物結(jié)合的抗體通過一個(gè)

5、特殊的只能和被分析物結(jié)合的抗體抗原（抗原（Antigen）CONFIDENTIALRev. 05/07/0210作為免疫反應(yīng)，抗原抗體的選擇是整作為免疫反應(yīng)，抗原抗體的選擇是整個(gè)免疫分析特異性和總體表現(xiàn)的關(guān)鍵個(gè)免疫分析特異性和總體表現(xiàn)的關(guān)鍵l如何選擇好一個(gè)抗體去檢測(cè)一個(gè)被檢物質(zhì)，而不如何選擇好一個(gè)抗體去檢測(cè)一個(gè)被檢物質(zhì)，而不與非常相似結(jié)構(gòu)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)，或漏掉與非常相似結(jié)構(gòu)的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)，或漏掉須反應(yīng)的物質(zhì)，這是分析設(shè)計(jì)的重中之重須反應(yīng)的物質(zhì)，這是分析設(shè)計(jì)的重中之重l抗體的量必須恰當(dāng)，過多會(huì)引起復(fù)合物的溶解抗體的量必須恰當(dāng)，過多會(huì)引起復(fù)合物的溶解CONFIDENTIALRev. 0

6、5/07/0211關(guān)于抗體的親合力關(guān)于抗體的親合力抗體除了要求純度外（單價(jià)特異性）還必須要求抗體除了要求純度外（單價(jià)特異性）還必須要求親合力，親合力，效價(jià)指抗體的量，親合力指抗體的質(zhì)效價(jià)指抗體的量，親合力指抗體的質(zhì)在非競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力比標(biāo)記物在非競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力比標(biāo)記物的最低檢測(cè)極限更能影響分析的靈敏度的最低檢測(cè)極限更能影響分析的靈敏度在競(jìng)爭(zhēng)法免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力直接關(guān)系在競(jìng)爭(zhēng)法免疫反應(yīng)的模式中抗體親和力直接關(guān)系到競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果到競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果對(duì)于樣品中的干擾物質(zhì)對(duì)于樣品中的干擾物質(zhì), ,親合力影響分析的抗干親合力影響分析的抗干擾的能力擾的能力CONFIDENTIAL

7、Rev. 05/07/0212免疫分析的工作定義免疫分析的工作定義免疫分析免疫分析(Immunoassay) 是一種測(cè)試方式是一種測(cè)試方式,使用使用特殊的抗體與被檢測(cè)物質(zhì)的結(jié)合特殊的抗體與被檢測(cè)物質(zhì)的結(jié)合,此被檢測(cè)物質(zhì)不能此被檢測(cè)物質(zhì)不能通過簡(jiǎn)單的化學(xué)方法所容易檢測(cè)到的通過簡(jiǎn)單的化學(xué)方法所容易檢測(cè)到的.通常在檢測(cè)系統(tǒng)中會(huì)使用到一種叫通常在檢測(cè)系統(tǒng)中會(huì)使用到一種叫標(biāo)記物（標(biāo)記物（labeling）的的物質(zhì)物質(zhì),常標(biāo)記在抗體上常標(biāo)記在抗體上通常會(huì)有一個(gè)通常會(huì)有一個(gè)分離（分離（separation）的過程在最后讀取信的過程在最后讀取信號(hào)前號(hào)前總是需要去仔細(xì)關(guān)注一下分析的總是需要去仔細(xì)關(guān)注一下分析的模

8、式（模式（format） CONFIDENTIALRev. 05/07/0213Access 的技術(shù)的技術(shù)免疫分析免疫分析 - “what”檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù) 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光 分離技術(shù)分離技術(shù) 磁性顆粒磁性顆粒 分析模式分析模式 靈活靈活 - “how”分析模式分析模式檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)分離技術(shù)CONFIDENTIALRev. 05/07/0214檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)免疫分析免疫分析檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)(Detection) 有許多可用的方法有許多可用的方法 應(yīng)用一些應(yīng)用一些 “標(biāo)記物標(biāo)記物” 所產(chǎn)生的一些能量進(jìn)行測(cè)定所產(chǎn)生的一些能量進(jìn)行測(cè)定標(biāo)記物可以或可以不被激活而產(chǎn)生能量標(biāo)記物可以或可以不被

9、激活而產(chǎn)生能量通過一些相應(yīng)的檢測(cè)器對(duì)標(biāo)記物產(chǎn)生的能量進(jìn)行測(cè)通過一些相應(yīng)的檢測(cè)器對(duì)標(biāo)記物產(chǎn)生的能量進(jìn)行測(cè)定定分離技術(shù)分離技術(shù) 分析模式分析模式 CONFIDENTIALRev. 05/07/0215放射免疫分析放射免疫分析(Radioimmunoassay)優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)優(yōu)秀的靈敏度優(yōu)秀的靈敏度較寬的檢測(cè)線性范圍較寬的檢測(cè)線性范圍局限性局限性標(biāo)記物的半衰期短標(biāo)記物的半衰期短試劑效期短試劑效期短檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性差檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性差每次檢測(cè)都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線每次檢測(cè)都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線分析的反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，半天分析的反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，半天2天天發(fā)射性污染有害發(fā)射性污染有害很難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)很難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)CONFIDENT

10、IALRev. 05/07/0216熒光熒光熒光素?zé)晒馑?Fluorophores) FIA，DELFIA原理原理熒光底物熒光底物, 4-MUP，或熒光標(biāo)記物，或熒光標(biāo)記物，鑭系元素鑭系元素EuEu3+3+,Tb,Tb3+3+,Sm,Sm3+3+吸收光為一個(gè)短波長(zhǎng)的光，而發(fā)射光為一個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光吸收光為一個(gè)短波長(zhǎng)的光，而發(fā)射光為一個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光通過熒光計(jì)檢測(cè)通過熒光計(jì)檢測(cè)優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)與與RIA具有相似的靈敏度和檢測(cè)線性范圍具有相似的靈敏度和檢測(cè)線性范圍避免了避免了RIA對(duì)危害污染物處理的麻煩和半衰期短的問題對(duì)危害污染物處理的麻煩和半衰期短的問題局限性局限性可能會(huì)有來自樣品中的一些自身熒光物質(zhì)或短壽命的

11、熒光物質(zhì)可能會(huì)有來自樣品中的一些自身熒光物質(zhì)或短壽命的熒光物質(zhì)的干擾的干擾需用空白對(duì)照，速率法或延遲讀數(shù)來克服需用空白對(duì)照，速率法或延遲讀數(shù)來克服CONFIDENTIALRev. 05/07/0217酶酶-顏色的變化顏色的變化酶酶(Enzymes) - EIA原理原理在免疫分析結(jié)束后通過催化所加入的酶底物在免疫分析結(jié)束后通過催化所加入的酶底物典型的催化反應(yīng)包括顏色的變化典型的催化反應(yīng)包括顏色的變化,用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)非常容易使用的技術(shù)用于一些定性的分析非常容易使用的技術(shù)用于一些定性的分析局限性局限性對(duì)定量分析所要求的靈敏度和寬線性難以實(shí)現(xiàn)對(duì)定量分析所要求的靈敏度和

12、寬線性難以實(shí)現(xiàn)ELISA技術(shù)必須每次定標(biāo)技術(shù)必須每次定標(biāo)試劑部分成分要復(fù)溶重組試劑部分成分要復(fù)溶重組反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)CONFIDENTIALRev. 05/07/0218化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光物質(zhì)化學(xué)發(fā)光物質(zhì) - CLEIA原理原理不穩(wěn)定的分子通過加入一些化學(xué)基團(tuán)變得很穩(wěn)定不穩(wěn)定的分子通過加入一些化學(xué)基團(tuán)變得很穩(wěn)定,而移去這些起穩(wěn)定作用的化學(xué)基團(tuán)后而移去這些起穩(wěn)定作用的化學(xué)基團(tuán)后,分子結(jié)構(gòu)變得不穩(wěn)定分子結(jié)構(gòu)變得不穩(wěn)定發(fā)出光發(fā)出光（pH的改變，酶切作用，電激發(fā)等）的改變，酶切作用，電激發(fā)等）優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì) 具備具備RIA所擁有的優(yōu)勢(shì)所擁有的優(yōu)勢(shì)(靈敏度和寬線性靈敏度和寬線性),但但排除其缺點(diǎn)

13、排除其缺點(diǎn)用一個(gè)簡(jiǎn)單的光度計(jì)讀數(shù)用一個(gè)簡(jiǎn)單的光度計(jì)讀數(shù)非常低的背景干擾非常低的背景干擾類型類型 閃爍閃爍(flash), 持續(xù)持續(xù)(glow) 發(fā)光發(fā)光發(fā)光物質(zhì)的穩(wěn)定性發(fā)光物質(zhì)的穩(wěn)定性水溶液中的穩(wěn)定性水溶液中的穩(wěn)定性CONFIDENTIALRev. 05/07/0219化學(xué)發(fā)光物質(zhì)化學(xué)發(fā)光物質(zhì)AMPPD, Dioxetane (Lumi-Phos 530TM)-最穩(wěn)定的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)（第三代）最穩(wěn)定的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)（第三代）第一代：魯米那第一代：魯米那第二代：丫啶酯類，第二代：丫啶酯類，三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕代表性分析系統(tǒng)代表性分析系統(tǒng)貝克曼庫(kù)爾特貝克曼庫(kù)爾特 - Access/Access 2 /

14、DxI800終點(diǎn)讀數(shù)終點(diǎn)讀數(shù), 更穩(wěn)定更穩(wěn)定RLU00 5 10 時(shí)間時(shí)間(分鐘分鐘)55 60 CONFIDENTIALRev. 05/07/0220 ACCESS化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的特點(diǎn)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的特點(diǎn)很寬的檢測(cè)線性范圍很寬的檢測(cè)線性范圍可檢測(cè)到可檢測(cè)到6個(gè)數(shù)量級(jí)個(gè)數(shù)量級(jí)(例如例如: 1 - 100,000 units)極高的靈敏度極高的靈敏度可檢測(cè)到小到可檢測(cè)到小到10-21 摩爾摩爾/升升很底的背景干擾很底的背景干擾對(duì)于一些超敏分析項(xiàng)目對(duì)于一些超敏分析項(xiàng)目,有相當(dāng)接近零值的背景信號(hào)有相當(dāng)接近零值的背景信號(hào)更超強(qiáng)的試劑穩(wěn)定性更超強(qiáng)的試劑穩(wěn)定性試劑效期試劑效期開瓶效期開瓶效期定標(biāo)周期定標(biāo)周

15、期CONFIDENTIALRev. 05/07/0221分離技術(shù)分離技術(shù)免疫分析免疫分析檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)分離技術(shù)(Separation) 有很多方式有很多方式典型的是典型的是,特異性結(jié)合的分析物被保留而未結(jié)合物特異性結(jié)合的分析物被保留而未結(jié)合物質(zhì)和無用的反應(yīng)物被清除質(zhì)和無用的反應(yīng)物被清除 分析模式分析模式 CONFIDENTIALRev. 05/07/0222技術(shù)的創(chuàng)新技術(shù)的創(chuàng)新微粒子包被微粒子包被珠包被珠包被微孔包被微孔包被管包被管包被CONFIDENTIALRev. 05/07/0223磁顆粒包被技術(shù)磁顆粒包被技術(shù)磁顆?？贵w包被技術(shù)磁顆粒抗體包被技術(shù)磁顆粒均勻的懸浮于整個(gè)反應(yīng)體系磁

16、顆粒均勻的懸浮于整個(gè)反應(yīng)體系分析物在磁顆粒表面捕獲分析物在磁顆粒表面捕獲磁顆粒在磁場(chǎng)中被清洗磁顆粒在磁場(chǎng)中被清洗磁顆粒重新懸浮十分容易磁顆粒重新懸浮十分容易優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)快速的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)快速的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)較少的樣品量較少的樣品量提高檢測(cè)的靈敏度提高檢測(cè)的靈敏度極好的批內(nèi)重顯性極好的批內(nèi)重顯性可以探針取放，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化可以探針取放，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化CONFIDENTIALRev. 05/07/0224分析模式分析模式免疫分析免疫分析檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)分離技術(shù)分離技術(shù) 分析模式分析模式- 有很多種方式有很多種方式可定義為分析的可定義為分析的 “處方處方”設(shè)定一個(gè)最優(yōu)化的模式設(shè)定一個(gè)最優(yōu)化的模式(可變量可變量)去最優(yōu)

17、化項(xiàng)目的去最優(yōu)化項(xiàng)目的臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 CONFIDENTIALRev. 05/07/0225分析模式分析模式可變量可變量夾心法夾心法(Sandwich) vs.競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法(competitive)標(biāo)記物的放置標(biāo)記物的放置同步同步(Simultaneous) vs. 分步分步(sequential)試劑試劑/樣品加入的順序樣品加入的順序孵育的次數(shù)孵育的次數(shù)(步驟步驟)清洗分離的次數(shù)清洗分離的次數(shù)(步驟步驟)試劑試劑/樣品的體積樣品的體積/濃度濃度孵育的時(shí)間孵育的時(shí)間孵育的溫度孵育的溫度CONFIDENTIALRev. 05/07/0226Access 的分析模式的分析模式基本分析模式基本分析

18、模式夾心法夾心法(Sandwich)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合(Competitive binding)試劑的加入，孵育和清洗試劑的加入，孵育和清洗 同步同步(Simultaneous) (1步步, 1次清洗次清洗)分步分步(Sequential) (2步步, 2次清洗次清洗)“Piggyback” (2步步, 1次清洗次清洗)CONFIDENTIALRev. 05/07/0227夾心法分析模式夾心法分析模式捕捉抗體捕捉抗體(Capture antibody)和標(biāo)記抗體和標(biāo)記抗體(labeled antibody)每個(gè)不同的抗體可以針對(duì)不同的抗原決定簇，每個(gè)不同的抗體可以針對(duì)不同的抗原決定簇，或二個(gè)在同

19、一個(gè)抗原決定簇或二個(gè)在同一個(gè)抗原決定簇分析更特異因?yàn)槎€(gè)抗體同時(shí)反應(yīng)分析更特異因?yàn)槎€(gè)抗體同時(shí)反應(yīng)適合于檢測(cè)大分子物質(zhì)適合于檢測(cè)大分子物質(zhì)b bhCG TSHIgEProlactinFSH LH Ferritin HBsAgCONFIDENTIALRev. 05/07/0228競(jìng)爭(zhēng)法分析模式競(jìng)爭(zhēng)法分析模式只有捕捉抗體只有捕捉抗體主要針對(duì)小分子物質(zhì)檢測(cè)主要針對(duì)小分子物質(zhì)檢測(cè) 沒有足夠表面積的分析物去符合沒有足夠表面積的分析物去符合 “夾心法夾心法” 要求要求T3 FT3 B12 Digoxin ProgesteroneT4 FT4 Folate Cortisol EstradiolCONFIDE

20、NTIALRev. 05/07/02CONFIDENTIALRev. 05/07/0230一個(gè)免疫分析項(xiàng)目的誕生一個(gè)免疫分析項(xiàng)目的誕生里程碑里程碑(Milestones)市場(chǎng)調(diào)研確定需求市場(chǎng)調(diào)研確定需求項(xiàng)目的詳細(xì)特點(diǎn)要求項(xiàng)目的詳細(xì)特點(diǎn)要求確定分析模式確定分析模式研發(fā)和優(yōu)化研發(fā)和優(yōu)化證明分析表現(xiàn)符合項(xiàng)目的詳細(xì)特點(diǎn)要求證明分析表現(xiàn)符合項(xiàng)目的詳細(xì)特點(diǎn)要求 (beta sites, clinical studies)提交注冊(cè)提交注冊(cè)CONFIDENTIALRev. 05/07/0231項(xiàng)目臨床應(yīng)用的要求項(xiàng)目臨床應(yīng)用的要求臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用(claims)篩查（篩查（Screening）檢測(cè)（檢測(cè)（Det

21、ection）診斷（診斷（Diagnosis）分層（分層（Staging）預(yù)后（預(yù)后（Prognosis）監(jiān)測(cè)（監(jiān)測(cè)（Monitoring）CONFIDENTIALRev. 05/07/0232項(xiàng)目的臨床應(yīng)用與分析表現(xiàn)項(xiàng)目的臨床應(yīng)用與分析表現(xiàn)必須到達(dá)的分析表現(xiàn)特征必須到達(dá)的分析表現(xiàn)特征靈敏度（靈敏度（Sensitivity）特異性（特異性（Specificity）精密度（精密度（Precision）線性范圍（線性范圍（Dynamic range）其它其它CONFIDENTIALRev. 05/07/0233分析模式的選擇分析模式的選擇需考慮的因素需考慮的因素分析物的特征分析物的特征體積（競(jìng)爭(zhēng)法

22、還是夾心法）體積（競(jìng)爭(zhēng)法還是夾心法）濃度（一步法，二步法，反應(yīng)時(shí)間等）濃度（一步法，二步法，反應(yīng)時(shí)間等）潛在的潛在的“鉤狀效應(yīng)鉤狀效應(yīng)”（hook effect）- 假陰性假陰性解決的方法可以使用解決的方法可以使用2步法模式步法模式樣品量和試劑量的平衡樣品量和試劑量的平衡抗干擾能力抗干擾能力儀器的能力局限性儀器的能力局限性預(yù)處理的要求預(yù)處理的要求CONFIDENTIALRev. 05/07/0234試劑原材料的選擇試劑原材料的選擇原材料原材料抗體抗體標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品封閉試劑（稀釋液）封閉試劑（稀釋液）清洗緩沖液清洗緩沖液YYYYYCONFIDENTIALRev. 05/07/0235抗體的選擇抗體

23、的選擇單克隆單克隆(Monoclonal) 和多克隆和多克隆( polyclonal)選擇的標(biāo)準(zhǔn)選擇的標(biāo)準(zhǔn)(criteria)特異性特異性(Specificity)靈敏度靈敏度(Sensitivity)供應(yīng)能力供應(yīng)能力(Supply)相關(guān)性相關(guān)性(Correlation)可制造性可制造性(Manufacturability)花費(fèi)花費(fèi)(Cost)CONFIDENTIALRev. 05/07/0236多克隆抗體多克隆抗體(Polyclonal Antibodies)免疫動(dòng)物獲得免疫動(dòng)物獲得,如羊或兔如羊或兔 時(shí)間長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng),復(fù)雜的制作流程復(fù)雜的制作流程注射注射,監(jiān)測(cè)滴度監(jiān)測(cè)滴度(可能反復(fù)注射可能反復(fù)

24、注射)周期性的抽血獲得周期性的抽血獲得特征化特征化(Characterization)和純化和純化(purification)生產(chǎn)出生產(chǎn)出”雞尾酒雞尾酒”式的抗體式的抗體,針對(duì)所有抗原決定簇針對(duì)所有抗原決定簇適合對(duì)臨床靈敏度要求較高分析測(cè)試適合對(duì)臨床靈敏度要求較高分析測(cè)試YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYCONFIDENTIALRev. 05/07/0237單克隆抗體單克隆抗體(Monoclonal antibodies)YYYYYYYYYYYYY克隆的結(jié)果克隆的結(jié)果 抗體的產(chǎn)生具有高度抗體的產(chǎn)生具有高度的同源性和特異性并的同源性和特異性并針對(duì)一個(gè)抗原決定簇針對(duì)一個(gè)抗原決定簇 可以選擇最

25、好的抗體可以選擇最好的抗體 在大量生產(chǎn)時(shí)可以確在大量生產(chǎn)時(shí)可以確保持續(xù)的供應(yīng)保持續(xù)的供應(yīng) 適合對(duì)臨床特異性和適合對(duì)臨床特異性和批間一致性要求較高批間一致性要求較高的分析測(cè)試的分析測(cè)試CONFIDENTIALRev. 05/07/0238抗體的選擇抗體的選擇篩選篩選抗體需經(jīng)過靈敏度，特異性和穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)抗體需經(jīng)過靈敏度，特異性和穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)許多的抗原決定簇并非一種分子所獨(dú)有許多的抗原決定簇并非一種分子所獨(dú)有被測(cè)抗原的穩(wěn)定性不同被測(cè)抗原的穩(wěn)定性不同被測(cè)抗原的游離和結(jié)合模式被測(cè)抗原的游離和結(jié)合模式CONFIDENTIALRev. 05/07/0239案例案例: hLH 抗原位點(diǎn)圖抗原位點(diǎn)圖BetaA

26、lphaB-D 1hTSHhCGB-D 2hCGA-D 1hCGhFSHhTSHB-D 3A-D 3A-D 2hCGhFSHhTSHCONFIDENTIALRev. 05/07/0240肌鈣蛋白肌鈣蛋白 - I穩(wěn)定性的問題穩(wěn)定性的問題氧化的問題氧化的問題磷酸化的問題磷酸化的問題N-terminalC-terminal0102030405060708090100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200POO_ _Access 1st Gen31-3458-70 (cross-react)157-160PMP Detect Access AccuTnI _2

27、4-4041-49PMPDetectCONFIDENTIALRev. 05/07/0241等分子等分子(Equimolar) vs. 非等分子非等分子(non-equimolar)分析分析依賴于特異性抗體的選擇依賴于特異性抗體的選擇結(jié)合模式結(jié)合模式-一些位點(diǎn)被隱藏一些位點(diǎn)被隱藏游離模式游離模式-所有位點(diǎn)都暴露所有位點(diǎn)都暴露PSAACTPSACONFIDENTIALRev. 05/07/0242病人樣品中可能自然產(chǎn)生一些針對(duì)動(dòng)物免疫病人樣品中可能自然產(chǎn)生一些針對(duì)動(dòng)物免疫球蛋白的抗體球蛋白的抗體(通常是鼠或羊通常是鼠或羊)來源于暴露于這些動(dòng)物或接受過動(dòng)物血清的治療來源于暴露于這些動(dòng)物或接受過動(dòng)物血

28、清的治療分析的干擾分析的干擾可以在雙單克隆夾心法分析模式中引起假陽(yáng)性可以在雙單克隆夾心法分析模式中引起假陽(yáng)性可以在單克隆可以在單克隆/多克隆分析模式中出現(xiàn)假陰性多克隆分析模式中出現(xiàn)假陰性CONFIDENTIALRev. 05/07/0243假陽(yáng)性假陽(yáng)性 較多見較多見嗜異性抗體在捕捉抗體和檢測(cè)抗體中搭橋嗜異性抗體在捕捉抗體和檢測(cè)抗體中搭橋,出現(xiàn)在雙單克隆夾心法模式中出現(xiàn)在雙單克隆夾心法模式中CONFIDENTIALRev. 05/07/0244假陰性假陰性 較少見較少見嗜異性抗體爭(zhēng)奪捕捉或檢測(cè)抗體的抗原結(jié)合嗜異性抗體爭(zhēng)奪捕捉或檢測(cè)抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)位點(diǎn),出現(xiàn)在單克隆出現(xiàn)在單克隆/多克隆分析模式中

29、多克隆分析模式中CONFIDENTIALRev. 05/07/0245封閉劑（稀釋液）可以加在反應(yīng)基質(zhì)中或整合封閉劑（稀釋液）可以加在反應(yīng)基質(zhì)中或整合在試劑盒內(nèi)在試劑盒內(nèi)動(dòng)物蛋白（鼠，兔，羊等）動(dòng)物蛋白（鼠，兔，羊等）各個(gè)廠家生產(chǎn)的分析試劑都有可能會(huì)不同程度各個(gè)廠家生產(chǎn)的分析試劑都有可能會(huì)不同程度的受到任何一個(gè)病人血清的影響！的受到任何一個(gè)病人血清的影響！CONFIDENTIALRev. 05/07/0246廠家產(chǎn)生的主定標(biāo)曲線廠家產(chǎn)生的主定標(biāo)曲線感覺節(jié)省感覺節(jié)省的校正型的校正型 2 點(diǎn)定標(biāo)點(diǎn)定標(biāo)會(huì)增加定標(biāo)的頻率會(huì)增加定標(biāo)的頻率對(duì)非線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能會(huì)有問題對(duì)非線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能會(huì)有問題(大大

30、多數(shù)的免疫分析產(chǎn)生的是非線性的標(biāo)多數(shù)的免疫分析產(chǎn)生的是非線性的標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)曲線)多點(diǎn)定標(biāo)曲線多點(diǎn)定標(biāo)曲線定量定量 典型的是典型的是6個(gè)水平個(gè)水平, 定性定性 典型的是典型的是2個(gè)水平個(gè)水平可以達(dá)到最大的靈敏度可以達(dá)到最大的靈敏度,準(zhǔn)確性和精密度準(zhǔn)確性和精密度可以有更長(zhǎng)的定標(biāo)周期間隔可以有更長(zhǎng)的定標(biāo)周期間隔CONFIDENTIALRev. 05/07/0247標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品 參比物參比物參比物參比物純化蛋白純化蛋白(Purified protein)通常制作較便宜通常制作較便宜相對(duì)較短的穩(wěn)定時(shí)間相對(duì)較短的穩(wěn)定時(shí)間,需特殊的存放條件需特殊的存放條件一般需要凍干保存一般需要凍干保存可能會(huì)有批間的不一致性

31、可能會(huì)有批間的不一致性重組重組(Recombinant)相對(duì)昂貴相對(duì)昂貴很長(zhǎng)的研發(fā)時(shí)間很長(zhǎng)的研發(fā)時(shí)間更穩(wěn)定和可靠更穩(wěn)定和可靠可以以液體的模式供應(yīng)可以以液體的模式供應(yīng)CONFIDENTIALRev. 05/07/0248清洗液使用的類型和量，在清洗步驟結(jié)束后分析物提供的有效保留方式的能力和清洗殘留的有效去除能力等，都會(huì)影響到分析表現(xiàn)清洗液中加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┛梢匀コ恍枰纳锘钚晕镔|(zhì) (干擾物質(zhì))CONFIDENTIALRev. 05/07/0249試劑的優(yōu)化試劑的優(yōu)化需優(yōu)化參數(shù)需優(yōu)化參數(shù)時(shí)間時(shí)間程序步驟程序步驟各類試劑濃度各類試劑濃度pH/離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度需優(yōu)化的內(nèi)容需優(yōu)化的內(nèi)容擴(kuò)散的速率

32、擴(kuò)散的速率結(jié)合的速率結(jié)合的速率復(fù)合物的穩(wěn)定性復(fù)合物的穩(wěn)定性優(yōu)化后達(dá)到的表現(xiàn)優(yōu)化后達(dá)到的表現(xiàn) 靈敏度靈敏度(Sensitivity) 精密度精密度(Precision) 線性范圍線性范圍(Dynamic range) 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性(Accuracy) 相關(guān)性相關(guān)性(Correlation)CONFIDENTIALRev. 05/07/0250試驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇對(duì)臨床檢測(cè)結(jié)果的影響試驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇對(duì)臨床檢測(cè)結(jié)果的影響臨床試驗(yàn)結(jié)果反映了試驗(yàn)過程中各種條件的優(yōu)化臨床試驗(yàn)結(jié)果反映了試驗(yàn)過程中各種條件的優(yōu)化靈敏度特異性精確性試劑穩(wěn)定性檢測(cè)速度質(zhì)量控制抗體 分析步驟 固相載體 檢測(cè)技術(shù) 清洗 封閉試劑 貯存液 定標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)化 儀器 客戶需求客戶需求CONFIDENTIALRev. 05/07/0251免疫分析設(shè)計(jì)及優(yōu)化免疫分析設(shè)計(jì)及優(yōu)化 開發(fā)免疫分析試劑盒的過程就是選擇并優(yōu)化各種實(shí)驗(yàn)條件，達(dá)到預(yù)期結(jié)果并能準(zhǔn)確反應(yīng)臨床真實(shí)情況的過程達(dá)到預(yù)期結(jié)果并能準(zhǔn)確反應(yīng)臨床真實(shí)情況的過程抗原抗原/抗體抗體分析模式分析模式分離技術(shù)分離技術(shù)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)總體分析表現(xiàn)總體分析表現(xiàn)CONFIDENTIALRev. 05/07/0252Beckman Access AccuTn-I符合符合NABC/IFCC/ESC/ACC的導(dǎo)則的導(dǎo)則要求要求最好的最好的99%分位值的比分位值的比值值沒有嗜異性抗體沒有嗜