熱原檢查法(兔法)

1、 1. 目的：建立產(chǎn)品中熱原檢查的標準操作規(guī)程。 2. 范圍：產(chǎn)品的熱原檢查。 3. 責任：質(zhì)量監(jiān)督部。 4. 內(nèi)容：本法適用于中國藥典（1995 年版）附錄中“熱原檢查法 兔法”。 4.1 實驗材料及用具: 4.1.1 天平： 精度 0.01 或 0.1mg 供試品稱量用 精度 0.1 或 1mg 試劑稱量用 精度 10g 家兔稱重用 4.1.2 電熱干燥箱：（50-300 士 1）C。 4.1.3 恒溫水浴：（37-100 士 0.5 ）C。 4.1.4 熱原測溫儀或肛門體溫計，精度 0.1 C。 4.1.5 家兔固定盒：盒的兩側(cè)有通氣孔。 4.1.6 實驗用具：注射器、燒杯、三角瓶、大稱

2、量瓶、吸管、移液管、 表面皿、玻璃棒、廣口試劑瓶、金屬制密圭寸器（均需去熱原） 時鐘、直鑷、脫脂棉或細軟衛(wèi)生紙。 4.1.7 試劑：75%乙醇、凡士林或 50%甘油、新蒸餾水（4 小時內(nèi)蒸 餾）、滅菌注射用水（經(jīng)熱原檢查，3 只家兔中體溫升高 0.4 C的 最多只有 1 只，且 3 只家兔體溫升高總數(shù)低于 1C,或經(jīng)細菌內(nèi) 毒素檢查，含細菌內(nèi)毒素低于 0.5EU/ m。、無熱原氯化鈉（經(jīng) 文件編號 熱原檢查法 XXXXXXX/X 總頁數(shù) 編制者 審核者 編制日期 審核日期 （兔法） 頒發(fā)部門 執(zhí)行日期 批準者 批準日期 250C 30 分鐘或 200C 1 小時或 180C 2 小時加熱除熱原

3、） 4.2 溶液配制：供試品溶液。 4.2.1 原料藥： 4.2.1.1 精密稱取適量，置燒懷、三角瓶或稱量瓶中。 4.2.1.2 按規(guī)定濃度，加精密量取的一定量滅菌注射用水，攪拌使溶 解。 4.2.2 注射液： 4.2.2.1 用 75乙醇棉球消毒安瓶頸部，割開安瓶。 4.2.2.2 精密量取一定量藥液。 4.2.2.3 按規(guī)定濃度，加精密量取的一定量滅菌注射用水，混勻。 4.2.3 注射用生理鹽水： 4.2.3.1 稱取無熱原的氯化鈉適量至燒杯或三角瓶中。 4.2.3.2 加入供試品“注射用水”適量，配成 0.9 的等滲溶液。 4.3 實驗動物： 4.3.1 健康無傷、體重 1.7-3.0

4、kg 、同一來源、同一品系家兔，雌兔 應(yīng)無孕，一兔一籠，標兔號。 4.3.2 新兔預(yù)選： 4.3.2.1 新兔經(jīng)飼養(yǎng) 7 日后，進行預(yù)測體溫，測溫的條件與熱原檢查 要求相同。 4.3.2.2 測量體溫時，測溫儀探頭或肛門計插入肛門的深度各兔應(yīng)相 同約6cm 測溫時間不得少于 1.5 分鐘。 4.3.2.3 每 1 小時測溫一次，共 4 次。 4.324 4 次體溫均在 38.0-39.6 C （般多選用 38439.4 C）的 范圍內(nèi)，且溫度最高最低差數(shù)不超過 0.4 C （以不超過 0.35 C為 佳）的家兔，可供 3 周內(nèi)實驗用。 4.3.2.5 錄選新兔編號、登記入兔史記錄卡，未被錄選家

5、兔，可飼養(yǎng) 7 日再予測體溫 1 次，如仍不符合要求則淘汰。 4.3.3 家兔的重復(fù)使用： 4.3.3.1 供試品判定為符合規(guī)定的家兔，至少應(yīng)休息 2 日，方可供下 一次實驗用。 4.3.3.2 供試品判定為需重復(fù)實驗的家兔，應(yīng)暫做休息處理，如重復(fù) 合格，升溫0.6 C的家兔，應(yīng)重新測溫挑選。 4.3.3.3 供試品判定為不符合規(guī)定的家兔，一般不再使用。如其組內(nèi) 家兔平均升溫未達 0.8 C且已休息兩周以上， 可重新測體溫， 合 格者可用。 4.3.3.4 每一家兔的使用次數(shù)，最多為 10 次，體重逐漸減輕或超過 3.0kg 的家兔，不再使用。 434 復(fù)試用家兔：挑選體重在 2.0-2.4k

6、g、正常體溫在 38.8-39.2 C、 使用過 2-3 次的家兔進行試驗。 4.4 試驗前的準備 4.4.1 測溫儀或肛門溫度計每 3-6 個月校驗一次， 不符合要求者不能 使用。 4.4.2 用具的除熱原：清洗干凈的玻璃器皿、注射器、針頭、直鑷等 放入金屬制容器內(nèi)，密閉，置電熱干燥箱中經(jīng) 250C 30 分鐘或 200C 1 時或 180C 2 小時加熱除熱原。去除熱原未曾開啟的密 封容器內(nèi)用具，可供一周內(nèi)使用。 4.4.3 實驗室的溫度： 4.4.3.1 實驗室的溫度應(yīng)在 17-28 C范圍內(nèi)。 4.4.3.2 實驗室與飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于 5C。 4.4.3.3 試驗全過程中，室溫

7、變化不得大于 3C。 4.5 檢查法： 4.5.1 選符合規(guī)定的家兔，停止給飼料和水，稱重后置于家兔固定盒 內(nèi)至少 1 小時。 4.5.2 每隔 30 分鐘或 1 小時測量家兔體溫 1 次，一般測量 2 次，兩 次體溫之差不得超過 0.2 C,以此兩次體溫的平均值作為該兔的 正常體溫。 4.5.3 當日使用的家兔，正常體溫應(yīng)在 38.2-39.6 C范圍內(nèi)，且各兔 間查差不得超過 1 C。 4.5.4 每個供試樣品用家兔 3 只，再測定正常體溫后 15 分鐘內(nèi)給藥。 4.5.4.1 供試品的劑量，應(yīng)按該藥項下的規(guī)定注射，未規(guī)定劑量的藥 品，可根據(jù)該藥的藥理性質(zhì)，在不影響家兔正常生理的前提下，

8、按體重計算（人按 50kg 計），用臨床一次劑量的 3-10 倍。 4.542 供試品注射的體積，按家兔體重每 kg 不少于 1ml，不大于 10ml。體積在 5-10ml/kg 的溶液應(yīng)在 37-38 C預(yù)熱后注射。 4.5.4.3 供試品配制完畢后，應(yīng)在 30 分鐘內(nèi)注射于家兔體內(nèi)。 4.5.4.4 注射前， 先用 75乙醇棉球輕擦耳靜脈的注射部位， 從耳尖 端靜脈進針，如進針不利，應(yīng)順序向前進行。 4.5.4.5 注射完畢，撥出針頭時，按住針孔數(shù)秒鐘，止血。 4.5.4.6 需緩慢注射的藥液，注射時間一般每兔不超過 3 分鐘。 4.5.4.7 個別肌注品種，測溫時間應(yīng)適當延長 2-3 小

9、時。 4.5.5 給藥后每隔 1 小時測量體溫 1 次，共 3 次。 4.5.6 溫差計算： 4.5.6.1 注射藥液后，以 3 次測得體溫中最高的一次減去正常體溫， 為該兔體溫的升高度數(shù)， 如 3 次體溫低于正常體溫， 則升溫度數(shù) 以“ 0”計。 4.5.6.2 3 次體溫中最低的一次，減去正常體溫，即為降溫值。 4.6 結(jié)果判斷： 4.6.1 判斷復(fù)試： 461.1 初試 3 只家兔中僅有 1 只體溫升高 0.6 C或 0.6 C以上， 或 3 只家兔升溫均低于 0.6 C但升溫的總數(shù)達 1.4 C或 1.4 C以上， 應(yīng)另取 5 只家兔復(fù)試。 4.6.1.2 含有熱原的供試品，一般在給家

10、兔靜脈注射后 1-2 小時出現(xiàn) 升溫高峰，當?shù)?3 小時升溫0.6 C時，宜復(fù)試后再作判斷。 4.6.1.3 3 只家兔中有 1 只降溫值0.6 C時，宜復(fù)試后再作判斷。 4.6.2 判斷合格： 4.6.2.1 初試 3 只家兔中，體溫升高均在 0.6 C以下，并且 3 只家兔 升溫的總數(shù)在 1.4 C以下可判斷為符合規(guī)定。 4.6.2.2 復(fù)試 5 只家兔中，體溫升高 0.6 C或 0.6 C以上的家兔數(shù)僅 有 1只，并且初復(fù)試合并，8 只家免的升溫總數(shù)為 3.5 C或 3.5 C 以下，可判斷為符合規(guī)定。 4.6.3 判斷不合格： 463.1 初試 3 只家兔中，體溫升高 0.6 C或 0.