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1、植物生理學(xué)實驗報告實驗題目:葉綠素含量的測定姓名班級學(xué)號供參考一、實驗原理和目的根據(jù)朗伯 比爾定律,某有色溶液的吸光度A 與其中溶質(zhì)濃度C 和液層厚度L 成正比。葉綠素 (丙酮 )在 652nm(混合)、 663nm、 645nm 有最大吸收峰。葉綠素 (95%乙醇 )在 665nm 、 649nm,類胡蘿卜素在 470nm 有最大吸收峰,根據(jù)在分光光度計下測定的吸光度,求得葉綠素的含量二、實驗器具和步驟植物材料:女貞實驗器具:分光光度計; 電子天平;研缽;試管;小漏斗;濾紙;吸水紙;移液管;量筒;剪刀試劑:95乙醇(或 80丙酮);石英砂;碳酸鈣粉步驟: 1.稱取剪碎的新鮮樣品0.1g 左右
2、,放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及3 5ml95乙醇,研成均漿,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3 5min2. 取濾紙 1 張,置漏斗中, 用乙醇濕潤, 沿玻棒把提取液倒入漏斗中, 過濾到 10ml 試管中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次,最后連同殘渣一起倒入漏斗中。3.用滴管吸取乙醇, 將濾紙上的葉綠體色素全部洗入漏斗中。 直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至 10 ml ,搖勻4. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm 的比色杯內(nèi)。以 95乙醇為空白,在波長665nm 、649nm、 470nm 下測定吸光度5. 計算公式:葉綠素的含量(mg/g ) = (濃度提取液體積稀釋倍數(shù))/
3、樣品鮮重。Ca=13.95A 6656.88A 649;Cb=24.96A 6497.32A 665C 類 =(1000A 470-2.05Ca-114.8Cb)/245單位: mg/L三、實驗數(shù)據(jù)和作業(yè)供參考2、計算葉綠素含量計算公式:葉綠素的含量( mg/g) = (濃度提取液體積稀釋倍數(shù))/樣品鮮重。Ca=13.95A665 6.88A649;Cb=24.96A649 7.32A665C 類 =(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 單位: mg/L由上面的公式進行代入計算,有:C 類=()/245=2.8901則:葉綠素含量 =() /0.1=2.9297四、數(shù)據(jù)分析實驗中可能清洗研缽和濾紙不是特別干凈可能造成誤差五、 思考題為什么提取葉綠素時干材料一定要用80的丙酮,而新鮮的材料可以用無水丙酮提???答:因為葉綠素存在于葉綠體內(nèi)囊體上
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