慢性槲皮素增強(qiáng)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶PPT課件

1、慢性槲皮素增強(qiáng)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶摘要 以往研究發(fā)現(xiàn)，引起腦老化的神經(jīng)系統(tǒng)增齡性退行性變化與學(xué)習(xí)記憶能力衰退存在一致性老齡動物的學(xué)習(xí)記憶能力下降，探究反應(yīng)減弱，自發(fā)行為減少 利用小鼠D-半乳糖衰老模型，通過Morris水迷宮動物行為實驗和小鼠皮層與海馬組織還原型谷胱甘肽和羥自由基含量測定等生化指標(biāo)實驗，對槲皮素延緩腦衰老作用進(jìn)行了研究槲皮素 1.分布 槲皮素是一種在植物界分布很廣的具有多種生物活性的黃酮類化合物 廣泛存在于蔬菜和水果之中，如洋蔥、馬鈴薯、卷心菜、生菜、蘋果、芒果和黑加侖等 多種中草藥中也含有槲皮素 2.功能 擴(kuò)張冠狀血管，降低血脂，抗血小板聚集，抗炎、抗過敏，抗糖尿病并發(fā)癥，防止冠

2、心病、心率失常，抗氧化、清除自由基，以及抗癌、抗腫瘤等藥理作用 3.化學(xué)結(jié)構(gòu) 槲皮素的化學(xué)名為3,5,7,3,4-五羥基黃酮，多酚類化合物，化學(xué)式C15H10O7，分子量302.24 槲皮素具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基的能力 槲皮素及其衍生物具有親水性和親脂性，其主要的抗氧化活性基團(tuán)是酚羥基人體內(nèi)槲皮素抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)的過氧化過程，增強(qiáng)機(jī)體抗活性氧防御系統(tǒng)的能力，保護(hù)細(xì)胞不受過氧化作用破壞實驗材料 槲皮素、D-半乳糖，甘露醇、蔗糖和EDTA，還原型谷胱甘肽試劑、羥自由基試劑 雄性小鼠50只隨機(jī)分籠飼養(yǎng)，每籠10只小鼠，室溫控制在(221)，在12h明暗環(huán)境條件下飼養(yǎng)，自由喂食、飲水實驗方法1.

3、Morris水迷宮實驗2. 小鼠腦組織勻漿的制備3. 腦組織中還原型谷胱甘肽(GSH)的測定4. 腦組織中羥自由基(OH-)的測定 實驗時將其中4組小鼠每天頸后皮下注射 用藥8周后，將5組小鼠分別進(jìn)行行為測試和生化指標(biāo)測試12345組別DgalDq50Dq75Dq100對照組試劑 D-半乳糖50 mg/kg生理鹽水試劑生理鹽水 槲皮素50mg/kg槲皮素75mg/kg槲皮素100mg/kg1.Morris水迷宮實驗 小鼠水迷宮為直徑120cm，高50cm的圓形水池，周圍放有視覺提示物體 水迷宮分為東南、西南、東北、西北4個象限，其中一個象限之中置一平臺，平臺高15cm，表面直徑為6cm，水面高

4、出平臺1cm 水中加入黑色食用色素，使動物在水面不能看見水下平臺 實驗時將小鼠隨機(jī)從一個象限面向池壁放入水迷宮，通過迷宮上方的攝像頭和圖像采集系統(tǒng)記錄小鼠找到平臺休息的運(yùn)動軌跡 每天進(jìn)行4次游泳訓(xùn)練，每次令動物從不同的象限入水對第1天在60s內(nèi)未找到平臺的小鼠，人為引導(dǎo)其找到平臺，以后幾天記錄的最長時間為60s，持續(xù)實驗6天. 第7天，去掉平臺，將小鼠隨機(jī)從一個象限面向池壁放入迷宮，記錄小鼠90s內(nèi)穿越原平臺位置的次數(shù)2.小鼠腦組織勻漿的制備 取小鼠，迅速斷頭，在冰塊上分離出新皮層和海馬，用4生理鹽水沖洗干凈 置于玻璃勻漿器中，加入腦組織重量9倍的冷生理鹽水，在冰水浴中勻漿，充分研磨，使組織塊

5、勻漿化3.腦組織中還原型谷胱甘肽(GSH)的測定 考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量： 取腦組織勻漿1mL，加入0.25molL pH8.0的Tris-HCl 緩沖液3mL，再加入1mL 3甲醛，混勻，室溫下分別準(zhǔn)確靜置60min 取1mL加入預(yù)先恒溫于25水浴中的5mL DTNB分析溶液，混勻，靜置5 min后，于波長412nm處測定吸光計算每毫克蛋白質(zhì)中GSH的含量4.腦組織中羥自由基(OH-)的測定 通過比色法檢測抗氧化物質(zhì)總抗氧化以及清除活性氧能力 Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的OH-量與H202的量成正比，當(dāng)用Gress試劑顯色時，形成紅色物質(zhì)，其呈色與OH-的多少成正比關(guān)系利用這一原理，進(jìn)行清除活

6、性氧能力的測定 羥自由基測試盒為活性氧試劑盒，使樣本產(chǎn)生羥自由基，其測試結(jié)果顯示組織抗氧化能力的大小 計算公式:總抗氧化能力=(測定管A-對照管A)反應(yīng)液(mL)樣品測試前稀釋倍數(shù)0.0130取樣量(mL)數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理 所有實驗數(shù)據(jù)均經(jīng)一元方差分析過程進(jìn)行單變量方差分析實驗結(jié)果1.槲皮素對D-半乳糖處理小鼠Morris水迷宮實驗的影響入水后到達(dá)平臺的潛伏期隨時間的變化游泳速度隨時間的變化到達(dá)平臺路程長度隨時間的變化小鼠水迷宮第六輪試驗時小鼠潛伏期的變化數(shù)值示每組鼠從數(shù)值示每組鼠從4 4個入水點到達(dá)平臺的平均值個入水點到達(dá)平臺的平均值與與DgalDgal組比較：組比較：* *表示表示P0.05

7、P0.05 * * *表示表示P0P00101與與YoungYoung組相比較：組相比較：表示表示P0.05,P0.05,表示表示 P0.01,P0.01,表示表示P0.001P0.001小鼠水迷宮第六輪實驗時游泳平均速度的變化數(shù)值示每組鼠從數(shù)值示每組鼠從4 4個入水點到達(dá)平臺的平均值個入水點到達(dá)平臺的平均值與與DgalDgal組比較：組比較：* * 表示表示P0.05 P0.05 * * *表示表示P0P00101與與YoungYoung組相比較：組相比較：表示表示P0.05,P0.05,表示表示 P0.01,P0.01,表示表示P0.001P0.001 在第五輪和第六輪訓(xùn)練中 青年組小鼠

8、70可找到平臺 灌喂槲皮素100 mgkg 41.32 灌喂槲皮素75 45.45 灌喂槲皮素50 18.18 D-半乳糖衰老組 8.33除平臺后小鼠在原平臺所在象限游泳時間占總游泳時間的百分比數(shù)值示平均值數(shù)值示平均值標(biāo)準(zhǔn)誤標(biāo)準(zhǔn)誤與與DgalDgal組比較組比較: :* * *示示P0.01 P0.01 * * * *示示P0P0001001與與YoungYoung組相比較組相比較:#:#示示P0.001P0.001 2.槲皮素對D-半乳糖處理小鼠皮層和海馬組織中GSH的影響數(shù)值示平均值數(shù)值示平均值標(biāo)準(zhǔn)誤標(biāo)準(zhǔn)誤與與DgalDgal組比較組比較: :* * *示示P0.01 P0.01 * *

9、* *示示P0P0001001與與YoungYoung組相比較組相比較:#:#示示P0.001P0.0013.槲皮素對D-半乳糖處理小鼠皮層和海馬組織中羥自由基的影響數(shù)值示平均值數(shù)值示平均值標(biāo)準(zhǔn)誤標(biāo)準(zhǔn)誤與與DgalDgal組比較組比較: :* * *示示P0.01 P0.01 * * * *示示P0P0001001與與YoungYoung組相比較組相比較:#:#示示P0.001P0.001討論 1.槲皮素的抗氧化機(jī)制 槲皮素是有效的自由基捕獲劑和抗氧劑。 有實驗表明黃酮類化合物對超氧陰離子、羥自由基和單線態(tài)氧均有良好的清除作用，且這種作用可能與其化學(xué)結(jié)構(gòu)上的3，7羥基有關(guān)。 進(jìn)一步的研究表明槲

10、皮素可與某些金屬離子結(jié)合，其抗氧化作用可能是通過影響金屬離子的體內(nèi)平衡，從而改變細(xì)胞內(nèi)氧化狀態(tài)而實現(xiàn)的，與鐵離子絡(luò)合阻止羥自由基的形成。 2.本實驗的結(jié)果分析 在Morris水迷宮實驗中槲皮素可以明顯縮短衰老模型小鼠的逃避潛伏期，并改善衰老模型小鼠的空間搜索學(xué)習(xí)能力這表明，長期給小鼠灌喂槲皮素能使小鼠的空間學(xué)習(xí)能力和記憶的保持能力得到改善 本實驗中，灌喂槲皮素的衰老小鼠皮層和海馬組織內(nèi)羥自由基含量下降，同時使GSH含量增加GSH具有清除自由基的作用（GSH含量的增加也可促進(jìn)抗活性氧酶GSH-Px的活性）槲皮素可以通過抑制D-半乳糖引起的小鼠皮層和海馬GSH的減少而改善衰老模型小鼠的腦認(rèn)知功能。

11、 本實驗表明：槲皮素能改善衰老動物學(xué)習(xí)和記憶活動，推測其機(jī)制與其抗氧化的功能有關(guān)。小鼠的新皮層和海馬是與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的重要腦區(qū)。但槲皮素是否對這兩個腦區(qū)的衰老性氧化損傷有抑制作用尚未見報道。 綜上所述，槲皮素可明顯改善D-半乳糖引起的小鼠腦功能的衰退，包括自發(fā)探究活動和空間搜索學(xué)習(xí)記憶行為等其作用機(jī)制主要包括增加還原型谷胱苷肽以減少小鼠皮層和海馬羥自由基這項研究為利用槲皮素作為一種天然的抗衰老制劑，提供了一定的基礎(chǔ) 謝謝！D-半乳糖半急性致衰老模型 連續(xù)一段時間內(nèi)給小鼠注射D-半乳糖機(jī)體細(xì)胞內(nèi)半乳糖濃度在醛糖還原酶催化半乳糖還原為半乳糖醇細(xì)胞內(nèi)半乳糖醇影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、功能障礙、代

12、謝紊亂，破壞并消耗機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，使自由基累積半乳糖還原過程中又產(chǎn)生活性氧，這樣使細(xì)胞膜受損，過氧化脂質(zhì)等增高小鼠出現(xiàn)衰老 返回自由基 自由基，機(jī)體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強(qiáng)氧化性，可損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，進(jìn)而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)。 自由基，化學(xué)上也稱為“游離基”，是指化合物的分子在光熱等外界條件下，共價鍵發(fā)生均裂而形成的具有不成對電子的原子或基團(tuán)。 在書寫時，一般在原子符號或者原子團(tuán)符號旁邊加上一個“”表示沒有成對的電子。 如氫自由基 H 即氫原子，氯自由基 Cl 即氯原子，甲基自由基 CH3 返回海馬組織 海馬組織主要負(fù)責(zé)存儲信息,是人學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)鍵部位，不過卻是一個暫存系統(tǒng)，當(dāng)一種信息接觸到以后，便被存于海馬組織 大腦會定期的檢查這個信息，有沒有被再次使用，如果在某一個時期內(nèi)這個信息被連續(xù)的多次的使用，那么便判定這個信息是有用的，然后把他轉(zhuǎn)存到大腦另一個地方，以固化的形式做永久的保存。 返回還原型谷胱甘肽(GSH) 還原型谷胱甘肽是一種低分子自由基清除劑。它可清除O2，H202等 GSH是甲硫氨酸、甘氨酸和半胱氨酸組成的一種小分子肽. 是GPX和GST兩種酶類的底物，為這兩種酶分解氫過氧化物所必需.谷胱甘肽過氧化