直抗陽性和免疫溶貧

1、直抗陽性和免疫溶直抗陽性和免疫溶貧貧2021/4/272抗球抗球蛋白蛋白試驗(yàn)試驗(yàn) - - 檢測檢測 IgGIgG通過抗人球蛋白通過抗人球蛋白抗體的特異性橋抗體的特異性橋連作用，促進(jìn)紅連作用，促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集?？杉?xì)胞的凝集?？煞譃橹苯雍烷g接分為直接和間接抗球蛋白試驗(yàn)?？骨虻鞍自囼?yàn)。2021/4/273直接抗球蛋白試驗(yàn)直接抗球蛋白試驗(yàn) 檢查受檢者紅細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)是否被抗體致敏檢查受檢者紅細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)是否被抗體致敏 產(chǎn)生直抗陽性的條件產(chǎn)生直抗陽性的條件 自身免疫溶血性貧血自身免疫溶血性貧血 溶血性輸血反應(yīng)溶血性輸血反應(yīng) 新生兒溶血病新生兒溶血病2021/4/274間接抗球蛋白試驗(yàn)間接抗球蛋白試驗(yàn) 證實(shí)

2、紅細(xì)胞在體外被抗體結(jié)合的試驗(yàn)證實(shí)紅細(xì)胞在體外被抗體結(jié)合的試驗(yàn) 是檢查血清中是檢查血清中IgGIgG抗體特異性抗體特異性 或紅細(xì)胞抗原的重要手段或紅細(xì)胞抗原的重要手段 可用于可用于 未知抗體的檢出與確認(rèn)未知抗體的檢出與確認(rèn) 交叉配合試驗(yàn)交叉配合試驗(yàn) 確認(rèn)抗原確認(rèn)抗原2021/4/275間接抗球蛋白試驗(yàn)間接抗球蛋白試驗(yàn) 步驟1：致敏 步驟2：洗滌 步驟3：加入抗人球蛋白試劑（AHG） 2021/4/276增強(qiáng)介質(zhì)增強(qiáng)介質(zhì) 可以增強(qiáng)反應(yīng)性和減少孵育時(shí)間可以增強(qiáng)反應(yīng)性和減少孵育時(shí)間 LISS 電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù)，減弱了抗原抗電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù)，減弱了抗原抗體的靜電作用。降低離子強(qiáng)度可以顯著

3、增加抗原抗體的靜電作用。降低離子強(qiáng)度可以顯著增加抗原抗體結(jié)合率體結(jié)合率 Polybrene 堿性高分子物質(zhì)，有效中和紅細(xì)胞表面堿性高分子物質(zhì)，有效中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，降低負(fù)電荷，降低zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離 PeG 極強(qiáng)的親水性，減少紅細(xì)胞與抗體周圍的水分極強(qiáng)的親水性，減少紅細(xì)胞與抗體周圍的水分 22Bovine albuminEnzymes2021/4/277增強(qiáng)介質(zhì)增強(qiáng)介質(zhì) 柱凝集（柱凝集（Column agglutination） 固相技術(shù)（固相技術(shù)（Solid-phase technology） 復(fù)合方法復(fù)合方法Red blood cells pa

4、nelPlasma or serumScreen DiluentNanoLysAnti-Human Globulin (AHG) 2021/4/2782. Incubation 20 at 37C3. Shake and Magnetize in the same time12 l of serum or plasmaScreenLysH1 H2 H3NanoLys60 l of NanoLys15 l of Hemascreen1,2,3ScreenDiluent60 l of Screen Diluent抗體篩選方法抗體篩選方法1.Dispensing2021/4/279MAGNET抗體篩

5、選方法抗體篩選方法MAGNETMAGNETMAGNET2021/4/2710DATDAT陽性血液標(biāo)本的收集陽性血液標(biāo)本的收集 EDTAEDTA抗凝血抗凝血 提供紅細(xì)胞提供紅細(xì)胞 DAT DAT測定，定型，洗脫，自身吸收測定，定型，洗脫，自身吸收 不抗凝血不抗凝血 提供血清提供血清 抗體篩選，抗體鑒定抗體篩選，抗體鑒定2021/4/2711DAT陽性血清學(xué)研究陽性血清學(xué)研究 多特異性抗球蛋白，抗多特異性抗球蛋白，抗IgG，抗，抗C3 測定附著在紅細(xì)胞上的免疫球蛋白的類型測定附著在紅細(xì)胞上的免疫球蛋白的類型 血清抗體篩選與鑒定血清抗體篩選與鑒定 自身抗體，同種抗體自身抗體，同種抗體 自身同種抗體自

6、身同種抗體 放散試驗(yàn)放散試驗(yàn) 確認(rèn)附著抗體的特異性確認(rèn)附著抗體的特異性 直抗（直抗（IgG）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng)）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng) 需進(jìn)一步研究：需進(jìn)一步研究： 藥物處理細(xì)胞，藥物處理細(xì)胞，A和和B細(xì)胞，酶處理細(xì)胞細(xì)胞，酶處理細(xì)胞2021/4/2712紅細(xì)胞鑒定紅細(xì)胞鑒定 定型定型 ABO/ ABO/RhRh，磷酸氯奎放散，收集網(wǎng)織紅細(xì)胞，磷酸氯奎放散，收集網(wǎng)織紅細(xì)胞 DAT IgG，C3 放散放散 陰性：陰性：A A和和B B細(xì)胞，酶處理，藥物處理細(xì)胞細(xì)胞，酶處理，藥物處理細(xì)胞 陽性：同種抗體，自身抗體，同種自身陽性：同種抗體，自身抗體，同種自身 自身吸收自身吸收 202

7、1/4/2713血清抗體鑒定血清抗體鑒定 陽性陽性 自身抗體自身抗體 溫抗體，冷抗體溫抗體，冷抗體 同種抗體同種抗體 特異性鑒定特異性鑒定 自身吸收鑒定同種抗體自身吸收鑒定同種抗體 陰性陰性 IgGIgG抗抗A A，抗，抗B B抗體抗體 酶處理細(xì)胞酶處理細(xì)胞 藥物依賴抗體藥物依賴抗體2021/4/2714抗體放散方法抗體放散方法方法方法用途用途要點(diǎn)要點(diǎn)Lui freeze-thawABO HDFN快速；紅細(xì)胞用量少；快速；紅細(xì)胞用量少；其它抗體難放散其它抗體難放散Heat(56 0C)ABO HDFN；IgM凝集抗體容易；容易；IgG同種和自身同種和自身抗體難放散抗體難放散酸放散試劑盒溫自身和

8、同種抗體容易；當(dāng)高效價(jià)的抗體存容易；當(dāng)高效價(jià)的抗體存在時(shí)放散液有假陽性在時(shí)放散液有假陽性洋地黃皂苷酸溫自身和同種抗體 洗滌消耗時(shí)間洗滌消耗時(shí)間乙醚放散溫自身和同種抗體2021/4/2715紅細(xì)胞疾病紅細(xì)胞疾病 紅細(xì)胞增多紅細(xì)胞增多 紅細(xì)胞減少紅細(xì)胞減少 紅細(xì)胞生成減少紅細(xì)胞生成減少 紅細(xì)胞破壞過多（溶血性貧血）紅細(xì)胞破壞過多（溶血性貧血） 紅細(xì)胞丟失過多紅細(xì)胞丟失過多2021/4/2716溶血性貧血溶血性貧血 紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷 遺傳性紅細(xì)胞增多癥遺傳性紅細(xì)胞增多癥 紅細(xì)胞酶缺乏的貧血紅細(xì)胞酶缺乏的貧血 珠蛋白生成障礙性貧血珠蛋白生成障礙性貧血 異常血紅蛋白病異常血紅蛋白病 陣發(fā)性睡

9、眠性血紅蛋白尿癥陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥 紅細(xì)胞外來因素紅細(xì)胞外來因素 免疫溶血性貧血免疫溶血性貧血 機(jī)械性溶血性貧血機(jī)械性溶血性貧血 其它因素引起的溶血性貧血其它因素引起的溶血性貧血2021/4/2717免疫溶血性貧血的分類免疫溶血性貧血的分類 自身免疫溶血性貧血自身免疫溶血性貧血（AIHA） Warm AIHA (WAIHA) Cold Agglutinin Syndrone (CAS) Mixed-type AIHA Paroxysmal Cold Hemoglobinura (PCH) DAT-negative AIHA 同種免疫溶血性貧血同種免疫溶血性貧血 Hemolytic Tra

10、nsfusion Reaction Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN) 藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血 Drug-dependent Drug-independent2021/4/2718自身免疫溶血性貧血的血清學(xué)特征自身免疫溶血性貧血的血清學(xué)特征WAIHACASMixed-type AIHAPCHDATIgGIgGIgG+C3IgG+C3C3C3C3 onlyIgG+C3C3C3 only免疫抗體免疫抗體類型類型IgGIgMIgG,IgMIgG放散液放散液IgG抗體沒有反應(yīng)IgG抗體沒有反應(yīng)血清血清IAT；在2

11、0 C，35%未凝集IgM凝集抗體，4 C效價(jià)1000 (60%)IgG IAT-反應(yīng)抗體和IgM凝集抗體在DLT試驗(yàn)中IgG雙相溶血特異性特異性廣范圍反應(yīng)；多種特異性報(bào)道通常為抗I通常未知抗P2021/4/2719溫抗體型自身免疫溶血性貧血溫抗體型自身免疫溶血性貧血(WAIHA) 發(fā)病率發(fā)病率 1/800001/80000，女性比男性高，年齡多數(shù)，女性比男性高，年齡多數(shù)4040 病因分類病因分類 網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤 慢性淋巴瘤慢性淋巴瘤; ;霍奇金病霍奇金病; ;非霍奇金淋巴瘤病非霍奇金淋巴瘤病 膠原病膠原病 系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡; ;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等

12、免疫性疾病免疫性疾病 免疫缺陷綜合癥免疫缺陷綜合癥; ;低球蛋白血癥等低球蛋白血癥等 胃腸道疾病胃腸道疾病 某些良性腫瘤某些良性腫瘤2021/4/2720WAIHA 發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制 免疫調(diào)節(jié)紊亂免疫調(diào)節(jié)紊亂 免疫器官對(duì)自身紅細(xì)胞失去識(shí)別能力免疫器官對(duì)自身紅細(xì)胞失去識(shí)別能力 紅細(xì)胞膜損傷，改變膜的抗原性紅細(xì)胞膜損傷，改變膜的抗原性 2021/4/2721WAIHA 診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 起病慢，數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血，表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。起病慢，數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血，表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。 各有各有1/31/3患者皮膚粘膜蒼白及黃膽，半數(shù)以上有脾腫大?；颊咂つw粘膜蒼白及黃膽，半數(shù)以上有脾

13、腫大。 實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查 1. 1.貧血：程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見貧血：程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見 多量球形細(xì)胞及數(shù)量不等的幼紅細(xì)胞，；多量球形細(xì)胞及數(shù)量不等的幼紅細(xì)胞，； 2.2.骨髓涂片：呈幼紅細(xì)胞增生象；骨髓涂片：呈幼紅細(xì)胞增生象； 3.3.再生危象：網(wǎng)織紅細(xì)胞極度減少，骨髓象呈細(xì)胞再生障礙，再生危象：網(wǎng)織紅細(xì)胞極度減少，骨髓象呈細(xì)胞再生障礙， 血象呈全細(xì)胞減少；血象呈全細(xì)胞減少； 4.DAT4.DAT試驗(yàn)陽性，為抗試驗(yàn)陽性，為抗IgGIgG和抗和抗C3C3型。型。 2021/4/2722WAIHA 診斷依據(jù)診斷依據(jù) 直抗陽性直抗陽性 患者近

14、患者近4 4個(gè)月無輸血或特殊藥物服用史，個(gè)月無輸血或特殊藥物服用史，結(jié)合臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查，可診斷為結(jié)合臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查，可診斷為溫抗溫抗體型自身免疫溶血性貧血。體型自身免疫溶血性貧血。 直抗陰性直抗陰性 但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀，腎上腺皮但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀，腎上腺皮質(zhì)激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，質(zhì)激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，可診斷為抗球蛋白蛋白試驗(yàn)陰性的溫抗體型可診斷為抗球蛋白蛋白試驗(yàn)陰性的溫抗體型自身免疫溶血性貧血。自身免疫溶血性貧血。 2021/4/2723WAIHA 療效標(biāo)準(zhǔn)療效標(biāo)準(zhǔn) 緩解緩解 患者臨床癥狀消失患者臨床癥狀消失 部分緩解部分緩解 患者臨床

15、癥狀基本消失。血紅蛋白量在患者臨床癥狀基本消失。血紅蛋白量在80g/L80g/L以上，以上，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)在網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)在5 5以下，血清總膽紅素測定以下，血清總膽紅素測定34umol/L1000； 4.4.DAT試驗(yàn)陽性，為試驗(yàn)陽性，為C3型型2021/4/2729PCH 發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制 以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血管內(nèi)溶血和血紅蛋白尿?yàn)樘卣?，罕見管?nèi)溶血和血紅蛋白尿?yàn)樘卣?，罕?原發(fā)性發(fā)病者極為罕見原發(fā)性發(fā)病者極為罕見 繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期梅毒靜止期所引起，現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某梅毒靜止期

16、所引起，現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、傳染性單核細(xì)胞增多癥等傳染病之后，以兒傳染性單核細(xì)胞增多癥等傳染病之后，以兒童居多童居多 2021/4/2730PCH 診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) 患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作，表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā)患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作，表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā) 熱（體溫可高達(dá)熱（體溫可高達(dá)40 0C），全身無力及腰背痛，隨后），全身無力及腰背痛，隨后即即 有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時(shí)，偶有幾天有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時(shí)，偶有幾天 實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查 1. 1.發(fā)作時(shí)貧血嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，外周血有紅細(xì)胞大發(fā)作時(shí)

17、貧血嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，外周血有紅細(xì)胞大 小不一及畸形，并有球形紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、小不一及畸形，并有球形紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、 嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞及幼紅細(xì)胞；嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞及幼紅細(xì)胞； 2.2.反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿；反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿； 3.3.DL試驗(yàn)陽性；試驗(yàn)陽性； 4.4.DAT試驗(yàn)陽性，為試驗(yàn)陽性，為C3型型2021/4/2731DL 冷溶血試驗(yàn)冷溶血試驗(yàn) Donath-Landsteiner test DL冷溶血素冷溶血素IgG冷反應(yīng)性抗體，能結(jié)合于幾冷反應(yīng)性抗體，能結(jié)合于幾乎所有正常人紅細(xì)胞均有的乎所有正常人紅細(xì)胞均有的P血型抗原，是一血型抗原，是一種冷溫雙相溫度的冷溶血素，具有

18、強(qiáng)烈的溶種冷溫雙相溫度的冷溶血素，具有強(qiáng)烈的溶血作用。體外最適反應(yīng)溫度血作用。體外最適反應(yīng)溫度0 0C -4 0C，150C以下補(bǔ)體不能按序最終激活，故不發(fā)生補(bǔ)體以下補(bǔ)體不能按序最終激活，故不發(fā)生補(bǔ)體溶血，回升溶血，回升37 0C時(shí)抗體與細(xì)胞解離，但補(bǔ)體時(shí)抗體與細(xì)胞解離，但補(bǔ)體卻依次激活，導(dǎo)致溶血。卻依次激活，導(dǎo)致溶血。 先置于冰水中約先置于冰水中約30分鐘，再置于分鐘，再置于37 0C水浴中水浴中2小時(shí)，溶血，小時(shí)，溶血，DL抗體存在?？贵w存在。 2021/4/2732冷自身免疫溶血性貧血的輸血冷自身免疫溶血性貧血的輸血 慢性冷凝集素病很少需要輸血，但是發(fā)生大慢性冷凝集素病很少需要輸血，但是

19、發(fā)生大量溶血時(shí)，病人溫度約量溶血時(shí)，病人溫度約40 0C的環(huán)境。當(dāng)?shù)沫h(huán)境。當(dāng)紅細(xì)紅細(xì)胞輸入開始胞輸入開始10分鐘紅細(xì)胞快速在病人血液中分鐘紅細(xì)胞快速在病人血液中破壞，然后破壞速度變慢破壞，然后破壞速度變慢 陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，因抗體反應(yīng)溫度常只到因抗體反應(yīng)溫度常只到20 0C ，所以很少引起，所以很少引起溶血，當(dāng)抗體反應(yīng)溫度如上升到溶血，當(dāng)抗體反應(yīng)溫度如上升到30 0C即可引即可引起溶血。輸起溶血。輸P陰性血，但有人成功的輸予沒洗陰性血，但有人成功的輸予沒洗滌，沒加溫，滌，沒加溫，P陽性的細(xì)胞陽性的細(xì)胞2021/4/2733自身吸收自

20、身吸收區(qū)分自身和同種抗體區(qū)分自身和同種抗體 患者血清：自身抗體患者血清：自身抗體+ +同種抗同種抗K 洗滌患者細(xì)胞，洗滌患者細(xì)胞，56 0C水浴中孵育水浴中孵育5分鐘，分鐘，洗脫部分自身抗體洗脫部分自身抗體 酶處理洗脫紅細(xì)胞，可增大吸附抗體的酶處理洗脫紅細(xì)胞，可增大吸附抗體的能力能力 37 0C吸附患者血清，移去自身抗體，只吸附患者血清，移去自身抗體，只留下同種抗體留下同種抗體2021/4/27342021/4/2735Blood-Matching Goes Genetic Hoping to prevent adverse transfusion reactions and save liv

21、es, European researchers are lobbying to replace serology-based blood typing with matchingbased on DNA tests 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE 2021/4/2736配血步入基因時(shí)代配血步入基因時(shí)代 為了預(yù)防輸血不良反應(yīng)和挽救生命，歐州學(xué)者們正在呼吁用DNA檢測替代血清學(xué)方法來鑒定血型 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE 2021/4/2737Blood-Matching Goes Genetic Two decades ago, a 2

22、0-year-old man entered Duke University hospital for a hip replacement. He had sickle cell disease and because he was anemic, he needed a blood transfusion before the operation. As with most sickle cell patients, he had received transfusions before. But on this occasion, his body rejected the blood. The doctors tried again and again with different blood, but the mans immune system rebelled against every new transfusion, generating antibodies that killed