國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃申請(qǐng)表1-湖南師范大學(xué)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)項(xiàng)

1、湖南師范大學(xué)“國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃”項(xiàng)目申請(qǐng)表 2007-2008 年 1 學(xué)期項(xiàng)目名稱(chēng)利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)研究人RMND5A基因的心臟功能個(gè)人申請(qǐng) 團(tuán)隊(duì)申請(qǐng) 團(tuán)隊(duì)名稱(chēng)RMND5A基因心臟功能研究小組申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)20000元起止時(shí)間2007 年 11 月 至 2008 年 11 月申請(qǐng)人或團(tuán)隊(duì)姓名潘旭明王沁陳曉胡雪晴蔡娟年級(jí)2005級(jí)2005級(jí)2005級(jí)2005級(jí)2005級(jí)專(zhuān)業(yè)生物基地生物基地生物基地生物基地生物基地聯(lián)系人陳曉所在院、專(zhuān)業(yè)生科院生物基地聯(lián)系電mailChenxiao1620導(dǎo)師吳秀山職務(wù)/職稱(chēng)院長(zhǎng)/教授聯(lián)系電話8872780EmailXiushanwu20

2、03計(jì)劃時(shí)數(shù)100建議學(xué)分2(每人)主體設(shè)備斑馬魚(yú)養(yǎng)殖系統(tǒng)注射儀顯微鏡離心機(jī)消耗材料經(jīng)費(fèi)預(yù)算種類(lèi)斑馬魚(yú)飼料DNA試劑盒核酸內(nèi)切酶原位雜交試劑盒抗體其他試劑測(cè)序用量2公斤1個(gè)4種1個(gè)4種10種10次經(jīng)費(fèi)（元）100150015002500800045001900總計(jì)（元）20000申請(qǐng)理由（包括自身具備的知識(shí)條件：自己的特長(zhǎng)、興趣等）我們團(tuán)隊(duì)的每一個(gè)成員都對(duì)生命科學(xué)充滿著濃厚的興趣，總以極大的熱情去探索未知的生命之謎。經(jīng)過(guò)兩年多的專(zhuān)業(yè)學(xué)習(xí)，我們對(duì)生命科學(xué)的基礎(chǔ)知識(shí)有了一定的了解，對(duì)其各個(gè)領(lǐng)域也有所涉獵。懷著對(duì)心臟發(fā)育的共同興趣，我們組建了RMND5A基因心臟功能研究小組，經(jīng)過(guò)大家的仔細(xì)思考研究，

3、吳秀山教授的悉心指導(dǎo)，我們決定借助心臟發(fā)育實(shí)驗(yàn)室利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)研究人的RMND5A基因。作為生物基地專(zhuān)業(yè)的學(xué)生，我們已經(jīng)具備遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育學(xué)等方面的基本知識(shí)，并掌握了相關(guān)的基本實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。五位成員皆能吃苦耐勞，意志堅(jiān)強(qiáng)，品學(xué)兼優(yōu)，善于思考，有創(chuàng)新意識(shí)。其中兩人曾分別獲專(zhuān)業(yè)一等和二等獎(jiǎng)學(xué)金，四人有多種學(xué)生干部經(jīng)歷，有較強(qiáng)的分析問(wèn)題、處理問(wèn)題的能力和溝通協(xié)調(diào)能力。一人在心臟發(fā)育實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)做過(guò)三個(gè)多月的前期準(zhǔn)備工作，并已熟練掌握質(zhì)粒載體構(gòu)建，原位雜交，免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)方法和技巧。一人曾在中科院生物物理所感染與免疫中心，學(xué)習(xí)過(guò)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)方法，基本功扎實(shí)?？傊瑘F(tuán)隊(duì)構(gòu)建合理，人員之間經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期

4、共同實(shí)習(xí)，配合默契，具備了一定的科學(xué)研究能力。我們所研究的RMND5A基因是一個(gè)功能未知的新基因，主要在心臟和骨骼肌中表達(dá)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)室在前期曾采用RNA干擾技術(shù)，抑制該基因表達(dá)，使得斑馬魚(yú)圍心腔擴(kuò)大。我們計(jì)劃建立一個(gè)該基因的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)穩(wěn)定系，來(lái)研究其功能，此方法將會(huì)在該基因的進(jìn)一步研究上有很大優(yōu)勢(shì)。經(jīng)過(guò)前期準(zhǔn)備，目前實(shí)驗(yàn)室已具備我們開(kāi)展研究所需的RMND5A基因，cmlc2心臟啟動(dòng)子，plres2-egfp質(zhì)粒載體。項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)及方案設(shè)計(jì)項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)：1 RMND5A作為人類(lèi)一個(gè)新基因，主要在心臟與骨骼肌中表達(dá)，可能與心臟發(fā)育相關(guān)，而目前還沒(méi)有對(duì)它的功能進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的研究。2 首次利用斑馬魚(yú)作為模式

5、動(dòng)物研究RMND5A這個(gè)基因的功能。3 該研究有可能從生物整體水平上，闡明該基因在心臟中的功能。利用轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)研究人RMND5A基因的功能基本方案：1 插入心臟啟動(dòng)子cmlc2于plres2-egfp質(zhì)粒載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒。2 將RMND5A基因插入重組質(zhì)粒多克隆位點(diǎn)，連入載體。3 將cmlc2-RMND5A-ires-egfp質(zhì)粒片段切下，純化回收。4 將前一步所得片段注入二細(xì)胞期或四細(xì)胞期的斑馬魚(yú)受精卵中，制備轉(zhuǎn)基因個(gè)體。5 觀察篩選具有綠色熒光蛋白的個(gè)體。6 篩選純合體后代。7 檢測(cè)心臟解剖結(jié)構(gòu)等相關(guān)指標(biāo)。8 分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)得出結(jié)論。（詳細(xì)附后）預(yù)期成果1成功構(gòu)建重組質(zhì)粒，并使用cmlc2-RMND5A-ires-egfp質(zhì)粒片斷，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)穩(wěn)定系，為進(jìn)一步相關(guān)研究打下基礎(chǔ)。2通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因斑馬魚(yú)穩(wěn)定系，證明RMND5A基因與心臟發(fā)育的重要關(guān)系，探討該基因的心臟功能，進(jìn)一步弄清心臟發(fā)育機(jī)制，為心臟病的治療做出貢獻(xiàn)。3團(tuán)隊(duì)的每一成員都能通過(guò)這次活動(dòng)，鞏固專(zhuān)業(yè)知識(shí)，