pTRIzolPlantReagentpTRIzol植物RNA分離試劑

1、GENFINE BIOTECH (BEIJING) CO., LTD版本號： FRH1719pTRIzol Plant ReagentpTRIzol 植物 RNA 分離試劑目錄號 :FR301產(chǎn)品內(nèi)容：目錄號產(chǎn)品組成FR30195 ml儲存條件：室溫 (15-25 )運輸并保存，添加-巰基乙醇之后可4 保存 6 個月。產(chǎn)品簡介：pTRIzol 植物 RNA 分離試劑可從植物組織，特別是富含多酚或淀粉的植物組織（如馬鈴薯塊莖，白松松針，吊蘭葉片，山藥，香蕉，蘋果，木瓜，梨等）中提取高純度的總RNA 。每 100 ml （加入 -巰基乙醇后的終體積）可處理100 mg 組織 200 次，處理 5

2、g 組織 4 次。準(zhǔn)備試劑：-巰基乙醇， 液氮，研缽，無 RNase 離心管，氯仿，異丙醇， 75% 乙醇，RNase Free ddH2O。樣品處理 :1. 準(zhǔn)備新鮮植物組織，在液氮中研磨成粉狀，如果是干種子，可在室溫研磨。2. 處理過的植物材料應(yīng)一直保持冷凍保存，直至加入提取試劑并懸浮。3. 先將無 RNase 離心管置于干冰中再放入研磨好的冷凍的組織樣品。本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品及化妝品等用途。1預(yù)防 RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面:1.經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。2. 使用 RNase Free 的塑料制品和槍頭避免交叉污

3、染。3. RNA 在 pTRIzol Plant Reagent 中時不會被 RNase 污染。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。 玻璃器皿可在 150 烘烤 4h ，塑料器皿可在 0.5 MNaOH中浸泡 10 min ，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase 。小量提取操作步驟：（樣品0.1 g ，使用小量提取方法）注意： pTRIzolPlant Reagent會出現(xiàn)白色沉淀，使用前需在60 加熱溶解后搖勻使用。使用前請先在pTRIzol Plant Reagent加入 -巰基乙醇至終濃度5% 。本試劑體積為95 ml ，可加入 5 ml -巰基乙醇后

4、搖勻使用。1.取不多于 0.1 g 冷凍研磨過的植物組織，加0.5 ml pTRIzol Plant Reagent(4)，振蕩至徹底混勻。2. 室溫放置 5 min 。注意：平放離心管，使表面積最大。3.4 12, 000 rpm離心 1 min ，將上清轉(zhuǎn)入新的無RNase 離心管。4. 加入 0.3 ml 氯仿，上下顛倒混勻。5.4 12,000 rpm離心 10 min ，取上層水相轉(zhuǎn)入新的無 RNase離心管。注意：若提取富含多酚或淀粉的植物組織，可重復(fù)步驟5、 6 一次。6.加入與所得水相等體積的異丙醇，混勻，室溫放置10 min 。7.4 12,000 rpm離心 10 min

5、。棄掉上清，注意不要倒出沉淀。加1 ml 75% 乙醇。（沉淀可能很難看見，應(yīng)小心操作。）8. 4 5,000 rpm 離心 3 min 。倒出液體， 注意不要倒出沉淀。 剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，室溫晾干5-10 min 。9.加 50-100 l RNase Free ddH 2O，反復(fù)吹打、混勻，充分溶解RNA 。如有絮狀物，可在室溫條件下12,000 rpm離心 1 min ，取上清轉(zhuǎn)入干凈的無RNase 離心管中， -70 保存。大量提取操作步驟（樣品 >0.1 g 到 5 g ，使用大量提取方法）：注意：使用前在pTRIzol Plant Reagent加入 -

6、巰基乙醇至終濃度5% 。1.每 1 g 冷凍的研磨過的植物組織，加5 ml pTRIzol Plant Reagent，振蕩至徹底混勻。22. 室溫放置 5 min 。注意：平放離心管，使表面積最大。3.4 10,000 rpm離心 1 min ，上清轉(zhuǎn)入新的無RNase 離心管。4. 每 10 ml 上清加 6 ml 氯仿，上下顛倒混勻。5.4 10,000 rpm離心 15 min ，取上層水相轉(zhuǎn)入新的無 RNase離心管。注意：若提取富含多酚或淀粉的植物組織，可重復(fù)步驟5、 6 一次。6.測量所得水相體積，加0.9 倍體積異丙醇，混勻，室溫放置10 min 。7.4 10,000 rpm離心 15 min 。棄掉上清，注意不要倒出沉淀。加510 ml 75% 乙醇。8. 4 5,000 rpm 離心 5 min 。小心倒出液體，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液體短暫離心，然后用槍頭吸出，室溫晾干5-10 min 。9. 加 RNase Free ddH 2O，反復(fù)吹打、 混勻， 充分溶解 RNA （例如每 1 g 葉片可用 200 lRNase Fre