腸道病毒的分類與檢測

1、腸道病毒的分類與檢測腸道病毒的分類與檢測摘要腸道病毒可引發(fā)多種感染， 并且發(fā)病以綜合癥出現(xiàn)， 一種綜合癥可有不同病毒所 引起，同一種病毒可以導致不同綜合癥是腸道病毒感染的普遍現(xiàn)象。 目前除脊髓灰質(zhì) 炎外，尚無疫苗可供預防， 是當前嚴重影響人類健康的重要病原之一。 腸道病毒主要 經(jīng)糞一口或呼吸道傳播，所以對腸道病毒感染作出準確、及時的診斷是非常必要的。 腸道病毒(Enterovirus )是小RNA病毒科，有67個血清型。人類腸道病毒包括： 脊髓灰質(zhì)炎病毒( Poliovirus )、柯薩奇病毒( Coxsackievirus )、?？刹《? Echo)、 甲型肝炎病毒以及新型病毒。 目前常用的

2、檢測腸道病毒的方法有病毒分離培養(yǎng)、 血清 學鑒定、 分子生物學方法， 近年來， 一些新型方法也使得腸道病毒的檢測快速化與準 確化。關(guān)鍵詞 腸道病毒 / 診斷/分類1 腸道病毒形態(tài)特點腸道病毒是球形、無包膜、核衣殼 20 面體立體對稱。腸病毒屬病毒粒子在酸性 pH 下穩(wěn)定，在病毒制品中可觀察到空衣殼，有時可觀察到少量( 1% )的重顆粒 基因組編碼單一的 VPg 蛋白，但不編碼 L 蛋白。不同腸道病毒及腸道病毒與鼻病毒 間整個核苷酸序列一致性大于 50% ，一種腸道病毒不同株之間整個核苷酸序列的一 致性大于 75% 。病毒主要在腸道細胞中復制，也能在神經(jīng)、肌肉和其它一些組織中 復制。大多數(shù)病毒感

3、染無明顯癥狀，病毒感染的臨床癥狀包括輕微腦膜炎、腦炎、肌 炎、心肌炎和結(jié)締組織炎。耐酸和脂溶劑，不易被胃酸和膽汁滅活，在污水和糞便中 活數(shù)月。2 腸道病毒的分類2.1 脊髓灰質(zhì)炎病毒此病癥的典型臨床經(jīng)過六個階段（潛伏期、前驅(qū)期、癱瘓前期、癱瘓期、恢復期 和殘留麻痹）。感染期間患者表現(xiàn)為低熱及咽痛、咳嗽、腹瀉、不安、嗜睡、多汗、 腦膜刺激癥、肌肉疼痛、皮膚感覺過敏，突發(fā)急性弛緩性麻痹等癥狀，最后多遺留下 終生殘疾。 脊髓灰質(zhì)炎病毒通過患者的糞便或口腔分泌物傳染。 人類是脊髓灰質(zhì)炎病 毒的唯一宿主， 長期攜帶病毒的情況 （例如無癥狀， 但仍持續(xù)排出病毒長達 6 個月以 上）很罕見。服用脊髓灰質(zhì)炎疫

4、苗（現(xiàn)在我國使用I 、II 、III 型混合糖丸疫苗，是由減毒的脊髓灰質(zhì)炎病毒制成的） 是預防本病的主要措施。 消滅脊髓灰質(zhì)炎最根本的 手段是提高人群免疫水平，斷絕脊髓灰質(zhì)炎野毒株在人群中的傳播。脊髓灰質(zhì)炎病毒分為三個血清型；兩種不同抗原：D抗原和C抗原。D （dense,致密）抗原：具有病毒RNA為完整的病毒顆粒，又稱N（native ）抗原；C（coreless , 無核心）抗原：不含 RNA是D顆粒經(jīng)56 C滅活，RNA釋放后形成的無核酸空心衣 殼，故又稱H（heated）抗原；不同型別病毒C抗原可發(fā)生交叉反應，但 D抗原無交 叉反應；傳播方式主要是糞 - 口傳播，所致疾病是脊髓灰質(zhì)炎。

5、中毒機理：糞口途徑傳 播為主上呼吸道，咽喉，腸道為侵入門戶先在局部粘膜和淋巴結(jié)中增殖入血， 形成第一次病毒血癥帶有受體的靶組織 （脊髓前角細胞、 背根神經(jīng)節(jié)細胞、 運動神 經(jīng)細胞等）在靶細胞中再次增殖后形成第二次病毒血癥及臨床癥狀。檢測方法第一是微生物學檢查，檢測方法：病毒分離檢查：取咽漱液、糞便等樣 本，細胞培養(yǎng)出現(xiàn) CPE血清學診斷：中和試驗；病毒核酸測定。第二是防治 ：口服 減毒活疫苗或者注射滅活疫苗 .2.2 柯薩奇病毒柯薩奇病毒 2對乳鼠的敏感性很高，根據(jù)它們感染乳鼠產(chǎn)生的病灶，柯薩奇病毒 可以分為a、b兩組。a組有23型病毒，b組有6型病毒。A組病毒：誘發(fā)新生乳鼠 彌漫性骨胳肌炎，

6、導致馳緩性麻痹。 B 組病毒：誘發(fā)新生乳鼠局灶性骨胳肌炎，導致 痙攣性麻痹。通過型特異性抗原，經(jīng)中和試驗。 Elisa 方法等可以對各型進行鑒定。 所有的b組及a組的第9型有共同的組特異性抗原，在 b組內(nèi)病毒之間有交叉反應， 但是a組病毒沒有共同的組特異性抗原。a組某些型別的型特異性抗原可在 37C引起 人類0型紅細胞凝集反應。柯薩奇病毒 A 型感染潛伏期 1-3 天，上呼吸道感染， 起病急，流涕、咳嗽、咽痛、 發(fā)燒，全身不適。典型癥狀為皰疹性咽峽炎，即在鼻咽部、會厭、舌和軟腭部出現(xiàn)小 皰疹，粘膜紅腫，淋巴濾泡增生、滲出，扁桃體腫大，伴吞咽困難，食欲下降。據(jù)調(diào) 查（RObinson ,1958

7、）伴有口咽部皰疹和皮疹的急性熱病中， 79%為柯薩克A型病毒 所致。檢測方法： 1. 病人體液（腦脊液、皰疹液、心包液、胸水等）分離出病毒即可確 診。） 2恢復期血清出現(xiàn)抗體，或雙份血清抗體效價增高 4 倍以上。2.3 ?？刹《景？刹《荆‥CHO）（ ECHO-viruses）病毒即腸性細胞致病性人類孤獨型病毒（ enteric cytopatho-genic human orphan virus）。只對人類有感染性，多發(fā)于夏、秋季，絕大多數(shù)是隱性感染。ECHO病毒分為30多個型（1-34型，其中& 10、28、 34型已歸入其他病毒）。各型致病力和致病類型也不同，如ECHO619型致

8、病力較強， 它類似于柯薩奇病毒B型引起急性胸痛和心肌病。主要經(jīng)口 -糞途徑傳播，也可通過 咽喉分泌物排除病毒經(jīng)呼吸道傳播。 病毒進入人體在咽部機腸粘膜細胞增殖后， 侵入 血流，形成病毒血癥。ECHO病毒感染的臨床表現(xiàn)類似于風疹，第一孕季感染雖可累及胎兒，但很少引 起畸形。發(fā)病年齡2.533歲，常見的癥狀為上呼吸道感染、發(fā)燒、非化膿性腦膜炎 和皮疹。皮疹為斑丘疹或麻疹樣皮疹，持續(xù) 13天自然消退?？蓮拇蟊恪⒀史置谖?和腦脊液中分離出病毒。防治：?？刹《菊钌袩o特殊療法。 皮疹對癥處理。 對易感的嬰幼兒可注射丙球蛋 白 3 6ml ，脊髓灰質(zhì)炎減毒疫苗可干擾本病毒的感染。 ECHO-3， 4， 6，

9、 9， 11 型減毒 活疫苗正在研制中。 目前尚未有特效治療， 主要采用對癥和支持療法。 靜脈注射人血 丙種球蛋白對新生兒嚴重感染可能有效，嬰幼兒腹瀉也有導致脫水及酸中毒的可能， 須酌情給予輸液治療。2.4 甲型肝炎病毒臨床上表現(xiàn)為急性起病，主要表現(xiàn)為乏力、食欲減退、及肝功能異常，部分病例 可出現(xiàn)黃疸。 甲型肝炎病毒主要通過糞口途徑傳播， 傳染源多為病人。 甲型肝炎的潛 伏期為 15-45天，病毒常在患者轉(zhuǎn)氨酸升高前的 5-6 天就存在與患者的血液和糞便中。 發(fā)病 2-3 周后， 隨著血清中特異性抗體的產(chǎn)生， 血液和糞便的傳染性也隨之消失。 從 感染者的糞便中排出， 通過不同的途徑污染了食物和

10、用具， 又經(jīng)過口侵入人體。 這就 是甲肝病毒的傳播方式。2.5 新型病毒新型病毒指在 1969年以后鑒定的除脊髓灰質(zhì)炎病毒、 柯薩奇病毒、 埃可病毒以外 的幾種小RNA病毒，主要包括68-71共四個血清型。其中68型分離自下呼吸道感染 者， 69 型分離自健康人肛門拭子， 70 型分離自急性出血性結(jié)膜炎患者， 71 型分離自 無菌性腦膜炎患者的糞便和腦脊液。EV70主要引起流行性出血性結(jié)膜炎；EV71感染 主要引起手足口病，還可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾 病。3 檢測方法3.1 病毒分離培養(yǎng)利用組織培養(yǎng)技術(shù)從感染部位或傳染源分離出病毒并鑒定其特異性血清型是病毒 性疾病診

11、斷的標準。 病人標本是最常采集的標本。 病毒培養(yǎng)對縮短抗生素治療和住院 期有積極作用，但是病毒的分離鑒定繁瑣、費力、耗時，一般一周才能觀察到細胞病 理反應，而且許多腸道病毒不能進行細胞培養(yǎng)， 或者可以培養(yǎng)但不出現(xiàn)細胞病理效應。3.2 血清學鑒定 2分離病毒和利用組合血清中和試驗是對病毒定型的重要方法。腸道病毒的血清學 鑒定中，多選用組合血清。此方法檢測中不適用于早期診斷，可作為回顧性診斷；且 由于腸道病毒血清型眾多，臨床使用檢測價值有限，而多為流行病學采用。3.3 分子生物學診斷3.3.1 PCR 技術(shù)由于各型病毒具有共同基因組序列，也可檢出幾乎所有血清型。PCR檢測材料用 量少、快速、靈敏度

12、高且具有特異性，并可通過設計不同的引物進行病毒分型，用于 檢測相當寬的腸道病毒血清型。盧亦愚 3等人發(fā)明了用腸道病毒核酸熒光定量RT-PCR檢測試劑盒及檢測方法，靈敏度高，非常適用于如手足口病等有腸道病毒感 染引起突發(fā)疫情的實驗室早期診斷，該方法具有高特異性。3.3.2 核酸雜交技術(shù) 4由于EV各型間存在序列高度保守區(qū)，利用針對此保守區(qū)的通用互補脫氧核 糖核酸（cDNA）核酸探針可進行大范圍的EV診斷。3.3 其他新型方法2000年， Notomi 等開發(fā)了一種新穎的恒溫核酸擴增方法，即所謂環(huán)介導等溫擴增法。該方法利用一種鏈置換DNA聚合（BstDNApolymerase）和兩對特殊的引物，特 異地識別靶序列上的 6 個獨立區(qū)域， 使反應在模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈 結(jié)構(gòu)，從而保證引物可以在等溫條件下（65 C左右）與模板結(jié)合并進行鏈置換擴增反 應。RT-LAMP僉測方法在滿足特異性同時，靈敏度可達到普通 RT-PCR法的10-100倍, 或熒光RT-PCR法的1/10或與之在同一水平。優(yōu)點：（ 1 ）高特異性 （2）高靈敏度 （3）鑒定簡便 （4）操作簡單 （5）快速、 高效：整個擴增反應只需 1-1.5小時5。參考文獻腸道病毒的檢測方法及評價中國醫(yī)學文摘腸道病毒核酸熒光