驗證型實驗(最終版)

1、生 化 實 驗 講 義驗證型實驗 實驗一 實驗基本操作技能培訓一、玻璃器皿的洗滌與干燥1.玻璃器皿的洗滌化學實驗中經(jīng)常使用的玻璃器皿和瓷器，常常由于污物和雜質(zhì)的存在而得不出正確的結(jié)果。因此，在進行化學實驗時，必須把器皿洗滌干凈。玻璃儀器的洗滌方法很多，應(yīng)根據(jù)實驗的要求、污物的性質(zhì)、沾污程度來選擇。常用的洗滌方法如下：(1)用水刷洗用水和毛刷刷洗，再用自來水沖洗幾次，可除去附在儀器上的塵土、可溶性和不溶性雜質(zhì)。注意洗刷時不能用禿頂?shù)拿?，也不能用力過猛，否則會戳破器皿。(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗滌劑洗去污粉由碳酸鈉、白土、細砂等組成，它與肥皂、合成洗滌劑一樣，能去除油污和一些有機物。由于

2、去污粉中細砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗滌的效果更好。洗滌時，可用少量水將要洗的器皿潤濕，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗儀器的內(nèi)外壁，最后用自來水沖洗。用去污粉、洗衣粉、洗滌劑洗這些洗滌劑可以洗去油污和有機物質(zhì)。若油污和有機物質(zhì)仍然洗不干凈，可用熱的堿液洗。 (3)用鉻酸洗液洗鉻酸洗液是由濃硫酸和重鉻酸鉀配制而成的，具有很強的氧化性，對有機物和油污的去污能力特別強。使用鉻酸洗液時要注意被洗滌的器皿內(nèi)不宜有水，以免洗液被沖淡或變綠而失效。能用一般洗滌劑洗凈的器皿，盡量不要選用洗液洗滌。(4)用特殊的試劑洗應(yīng)根據(jù)沾在器壁上污物的性質(zhì)，采用合適的方法或藥品來處理。例如，沾在器壁上的二氧化錳用濃鹽酸處理；

3、AgCl沉淀可以用氨水洗滌；硫化物沉淀可選用硝酸加鹽酸洗滌等等。洗滌時應(yīng)遵循“少量多次”的原則，一般以洗三次為宜。2玻璃器皿的干燥可根據(jù)不同的情況，采用下列方法將洗凈的儀器干燥：(1)晾干不急用的儀器在洗凈后，可倒置在干凈的實驗柜內(nèi)或儀器架上任其自然干燥。(2)烘干將洗凈的儀器盡量倒干水后放入烘箱內(nèi)烘干。放入烘箱前要先把水瀝干，放置儀器時，儀器的口應(yīng)朝下。(3)吹干用吹風機或氣流烘干器把儀器吹干。3. 基本度量容器的使用和滴定分析的基本操作1)量筒量筒是實驗中經(jīng)常使用的度量液體的儀器之一，常見量筒的容量有10 mL、20 mL、50 mL、100 mL 、500 mL等，可根據(jù)需要來選用。量取

4、液體時，應(yīng)用左手持量筒，并以大拇指指示所需體積的刻度處，右手持試劑瓶，將液體小心倒入量筒。讀取刻度時，應(yīng)讓量筒垂直，使視線與量筒內(nèi)液面的彎月形最低點處于同一水平面上，偏高或偏低都會產(chǎn)生誤差。量筒不能作反應(yīng)器用，也不能裝熱的液體。2)滴定管滴定管是用來進行滴定的器皿，用于測量在滴定中所用溶液的體積。酸堿滴定管滴定管一般分為兩種，一種是酸式滴定管，另一種是堿式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞，可盛放酸液或氧化性溶液，不能盛放堿液，因為堿液會腐蝕玻璃，使活塞不能轉(zhuǎn)動。盛放堿液時要用堿式滴定管，它的下端連接一橡皮管，內(nèi)放一個比橡皮管管徑稍大的玻璃珠作為開關(guān)以控制溶液的流出，橡皮管

5、下端再連一尖嘴玻璃管，這種滴定管不能盛放會腐蝕橡皮的溶液，例如酸或氧化性溶液等。滴定管洗滌：在洗滌前，應(yīng)檢查酸式滴定管的玻璃活塞與塞槽是否符合，活塞轉(zhuǎn)動是否靈活。堿式滴定管下端連接一段橡皮管的粗細、長度是否適當，橡皮管的內(nèi)管徑應(yīng)稍小于玻璃珠的直徑，玻璃珠應(yīng)圓滑，橡皮管應(yīng)有彈性，否則難于緊固玻璃珠，操作時易上下移動而影響滴定。滴定管在用前必須仔細洗滌，當沒有明顯污物時，可以直接用自來水沖洗，或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗(注意滴定管刷的刷毛必須相當軟，刷頭的鐵絲不能露出，也不能向旁邊彎曲，以免刷傷內(nèi)壁)，然后再用自來水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管，應(yīng)將其直立，使水流盡，若滴定管的內(nèi)壁透明并不附著液滴，表

6、示已洗凈。洗凈后，滴定管用蒸餾水淌洗三次，第一次用蒸餾水10 mL，第二次及第三次各用蒸餾水5 mL。每次加入蒸餾水后，邊轉(zhuǎn)邊向管口傾斜使蒸餾水布滿全管，并稍振蕩，將管直立，使水流盡。在用自來水洗滌后，應(yīng)檢查滴定管是否漏水。檢查酸式滴定管時，把玻璃活塞關(guān)閉，用水充滿至“0”刻度線以上，直立約2分鐘，仔細觀察有無水滴滴下，有無水由活塞隙縫滲出。然后將活塞轉(zhuǎn)180°，再如此直立12 分鐘后觀察有無水滴滴下或從活塞隙縫滲出。如果檢查堿式滴定管，只需裝水直立2分鐘即可。如果發(fā)現(xiàn)漏水或酸式滴定管活塞轉(zhuǎn)動不靈時，把酸式滴定管取下將活塞涂油，堿式滴定管則需換玻璃珠或橡皮管?；钊坑蜁r，把滴定管平放

7、在桌面上，先取下活塞上的橡皮圈，再取下活塞(拿在手上、放在干凈的表面皿或濾紙上均可)，用濾紙把活塞、活塞套、活塞槽內(nèi)的水吸干，用手指粘少量凡士林擦在活塞兩頭，沿玻璃塞兩端圓周各涂一薄層(如圖3-6所示)，但要避免涂得太多，尤其是在孔的近旁，油層要均勻涂滿全圈，要盡可能薄些。涂完以后將活塞一直插入塞套中(不要轉(zhuǎn)著插)，插活塞時孔應(yīng)與滴定管孔平行。然后向一個方向轉(zhuǎn)動活塞，直到內(nèi)外面觀察時全部都透明為止。如果發(fā)現(xiàn)旋轉(zhuǎn)不靈活，或出現(xiàn)紋路，表示涂油太多。遇到這些情況，都必須重新涂油。注意在套橡皮圈時，應(yīng)該將滴定管放在桌上，一手頂住活塞大頭，一手套橡皮圈或系橡皮圈，以免將活塞頂出。然后再用前面所介紹的方法

8、檢查是否漏水。 按前述方法用自來水沖洗干凈以后，分別用蒸餾水和標準溶液各洗滌兩到三次。用標準溶液淌洗時，第一次用10 mL，第二次及第三次各用5 mL。每次加入溶液后，也是邊轉(zhuǎn)邊向管口傾斜使溶液布滿全管，直立以后，打開活塞使溶液從管尖口放出。在放出時一定盡可能完全放盡，然后再洗第二次。但要特別注意，在裝入標準溶液之前應(yīng)先將試劑瓶中的標準溶液搖勻，使凝結(jié)在試劑瓶內(nèi)壁的水混入溶液中(這在天氣比較熱或室溫變化較大時更有必要)，混勻后，溶液應(yīng)從試劑瓶中直接倒進滴定管，而不要經(jīng)過其他器皿(如燒杯、漏斗、滴管等)。一定要注意，不要使溶液從試劑瓶移到滴定管的時候，改變它的濃度。 滴定管讀數(shù)：讀取滴定管容積刻

9、度的數(shù)值，稱為讀數(shù)。正確地讀數(shù)是減少容量分析實驗誤差的重要措施。讀數(shù)時應(yīng)遵守下列規(guī)則：(1)讀數(shù)前應(yīng)觀察，管壁是否掛有水珠，管內(nèi)的出口尖嘴處有無懸掛液滴，管嘴是否有氣泡。(2)讀數(shù)時應(yīng)把滴定管從滴定管架上取下，用右手大拇指和食指捏住管上部無刻度部位，使滴定管自然垂直，然后讀數(shù)。每次裝入溶液或放出溶液后，應(yīng)等12分鐘，待附著在管內(nèi)壁的溶液流下后再讀數(shù)。(3)對于無色和淺色溶液，應(yīng)讀取彎月面下緣實線的最低點，視線應(yīng)與彎月面下緣實線的最低點相切。對于有色溶液，如KMnO4、I2溶液等，視線應(yīng)與液面兩側(cè)的最高點相切。若滴定管的背后有一條藍線或帶，無色溶液就形成了兩個彎月面，并且相交于藍線的中線上，讀數(shù)

10、時讀此交點的刻度。(4)滴定時，最好每次從0.00 mL開始，或從“05 mL”的范圍內(nèi)的任一刻度開始，這樣可以減少體積誤差。滴定管讀數(shù)必須準確至0.01 mL。(5)讀取的讀數(shù)立即記錄在實驗記錄本上。滴定操作：使用酸式滴定管時，用左手控制活塞，大拇指在管前，食指和中指在管后，三指輕輕捏住塞柄，無名指和小指向手心彎曲，手心內(nèi)凹，以防活塞被頂出造成漏液(如圖3-9所示)。滴定時，右手握錐形瓶上部，將滴定管下端伸入錐形瓶口約l cm，然后邊滴加溶液邊向同一方向搖動錐形瓶。滴定的速度開始時可稍快，一般為34/秒滴左右，但不能滴成水線，應(yīng)呈“見滴成串”。接近終點時，應(yīng)逐滴加入，即加一滴搖動后再加，馬上

11、到達終點時，應(yīng)控制半滴加入，即將活塞稍稍轉(zhuǎn)動，使半滴懸于管口，用錐形瓶內(nèi)壁將其沾下，再用洗瓶吹洗內(nèi)壁，使附著的溶液全部流下，然后搖動錐形瓶。如此繼續(xù)滴定至滴定終點為止。 酸式滴定管的操作 堿式滴定管的操作使用堿式滴定管時(如圖3-10所示)，左手捏住乳膠管，拇指在前，食指在后，其余三指輔助夾住出口管，用拇指和食指捏住玻璃珠中上部，向一邊擠壓玻璃珠外面的乳膠管，使玻璃珠和乳膠管之間形成一個狹縫，溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠，也不要使玻璃珠上下移動，更不要捏玻璃珠下部的乳膠管，以免進入空氣形成氣泡，影響讀數(shù)。在燒杯中滴定滴定通常在錐形瓶中進行，必要時也可以在燒杯中進行(如圖3-11所示)。把

12、燒杯放在實驗臺上，滴定管的高度應(yīng)以其下端伸入燒杯內(nèi)約1 cm為宜。滴定管的下端應(yīng)在燒杯的左后方處，如放在中央，會影響攪拌；如離杯壁過近，滴下的溶液不易攪拌均勻。左手控制滴定管滴加溶液，右手持玻璃棒攪拌溶液。玻璃棒應(yīng)作圓周攪動，不要碰到杯壁和底部。接近終點加半滴時，可用玻璃棒下端輕輕沾下，再浸入燒杯中攪勻。3）容量瓶容量瓶是一個細頸梨形的平底瓶。瓶塞是帶有磨口的玻璃塞，細頸上刻有環(huán)形標線，瓶上標有容積(mL)和標定時的溫度(一般為20)。在指定的溫度下(一般為20)，當液體充滿到標線時，液體體積恰好與瓶上所標的體積相等。容量瓶有10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、1000mL、

13、2000 mL幾種規(guī)格，并有白、棕兩色，棕色的用來配制見光易分解的試劑溶液。容量瓶不能加熱，磨口瓶塞是配套的，不能互相調(diào)換。容量瓶用于配制準確的一定體積的溶液。也用于標準的濃溶液稀釋。在使用容量瓶之前，要選擇好容量瓶：(1)要選擇與所要求配制的溶液體積相一致的容量瓶。 (2)要選擇瓶塞與瓶口相符合、不漏水的容量瓶。選好容量瓶后，首先仔細檢查有無裂痕破損，然后進一步檢查瓶口與瓶塞間是否漏水。檢查瓶口與瓶塞間是否漏水，可在瓶中放入自來水到標線附近，將瓶塞塞好，左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子，右手指尖頂住瓶底邊緣，倒立2分鐘左右，觀察瓶塞周圍是否有水滲出，如果沒有，把瓶直立，轉(zhuǎn)動瓶塞180

14、76;后，再倒立過來試一次。這樣做兩次檢查是必要的，因為有時瓶塞與瓶口不是在任何位置都是密合的。容量瓶在使用前要充分洗滌干凈，無論用什么方法洗，絕對不能用毛刷刷洗內(nèi)壁。洗滌時，蓋好瓶塞，充分振蕩，洗完后立即將瓶塞塞好，以免灰塵落入或瓶塞被污染。 用容量瓶配制溶液時，如果是用固體配制準確濃度的溶液(或稱標準溶液)，一般是將固體物質(zhì)稱在大小適當?shù)母蓛魺?，往其中加入少量的蒸餾水或適當溶劑使之完全溶解。溶解過程不論放熱或吸熱，都需待溶液至室溫時，才能定量地將溶液轉(zhuǎn)入容量瓶中。轉(zhuǎn)移時，要把溶液順玻璃棒加入，玻璃棒下端要靠住瓶頸內(nèi)壁，使溶液順內(nèi)壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在標線稍低一點的地方，

15、不要高到接近瓶口，玻璃棒稍向瓶中心傾斜，燒杯嘴應(yīng)靠近瓶口并緊靠玻璃棒，使溶液完全順玻璃棒流入瓶內(nèi)，待溶液全部流盡后，將燒杯輕輕向上提(燒杯嘴口仍應(yīng)緊靠玻璃棒)，同時直立，使附著在玻璃棒與燒杯嘴之間的溶液流入燒杯中或容量瓶內(nèi)，然后先把玻璃棒放入燒杯中，才能把燒杯拿開放在桌上，用洗瓶吹水洗滌燒杯內(nèi)壁和玻璃棒接觸到溶液的部分3次，每次用水應(yīng)盡量少些為宜，每次洗滌的水溶液應(yīng)無損地轉(zhuǎn)入容量瓶中。然后慢慢加蒸餾水至接近標線稍低1 cm左右，等12分鐘，使黏附在瓶頸內(nèi)壁的水流下后，再用細而長的滴管加蒸餾水恰至標線，這一過程稱為定容。用滴管加水時，視線要平視標線，然后將滴管伸入瓶頸使管口盡量接近液面，稍向旁傾

16、斜，使水順壁流下，注意液面上升，滴管應(yīng)隨時提起，勿使溶液接觸滴管，直到彎月面下緣最低點與標線相切為止。定容以后，塞好瓶塞。左手拇指在前，中指、無名指及小指在后拿住瓶頸標線以上部分，右手托住瓶底。如果容積小于100mL的容量瓶，就不必用右手托住容量瓶瓶底，以免由此造成的溫度變化對小體積產(chǎn)生較大的影響。將容量瓶倒轉(zhuǎn)，使氣泡上升到頂，再充分振蕩，如此反復(fù)35次，即可搖勻。容量瓶不能久貯溶液，尤其是堿性溶液會侵蝕瓶塞，使瓶塞無法打開，配制好溶液后，應(yīng)將溶液倒入清潔干燥的試劑瓶中貯存。容量瓶不能用火直接加熱及烘烤。4) 移液管、吸量管用于準確移取一定體積的溶液的移液管，通常有兩種形狀，一種移液管中間有膨

17、大部分，稱為胖肚移液管(胖肚吸管)，常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等幾種；另一種是直形的，管上有刻度，稱為吸量管(刻度吸管)，常用的有1mL、2 mL、5 mL、10 mL 等多種(如圖3-15所示)。 移液管和吸量管 洗滌移液管 移液管的使用用移液管或吸量管移取溶液前，先將用蒸餾水洗凈過的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗23次，以免被移取溶液的濃度發(fā)生改變。為此，可倒少許溶液于一潔凈而干燥的小燒杯中，用移液管吸取少量溶液，將管橫向轉(zhuǎn)動，使溶液流過管內(nèi)標線下所有的內(nèi)壁，然后使管直立將溶液由尖嘴口放出。吸取溶液時，一般可以用左手拿洗耳球，右手把移液管插入溶液中吸取。當溶液吸至標

18、線以上時，馬上用右手食指按住管口，取出并用濾紙擦干下端，并把管尖接觸于干凈小燒杯壁上。然后轉(zhuǎn)動移液管，稍松食指，使液體平穩(wěn)下降，直至溶液的彎月面與標線相切，立即按緊食指，將移液管垂直放入接受溶液的容器中，管尖與容器壁接觸(如圖3-17所示)，放松食指，使溶液自由流出，流完后再等15秒左右，殘留于管尖的液體不必吹出(刻“吹”字的移液管例外)，因為在校正移液管時，也未把這部分液體體積計算在內(nèi)。移液管使用后，應(yīng)立即洗凈并放在移液管架上。4. 藥品的取用方法1) 液體試劑的取用從滴瓶或者試管、錐形瓶等中取液體，使試劑滴入試管中(如圖3-30所示)，試管應(yīng)垂直不要傾斜。滴管或移液管尖決不能伸入所用容器中

19、，以免觸及器壁而沾污藥品；裝有試劑的滴管或移液槍不能平放或管口向上斜放，以免試劑倒流腐蝕。倒入試管里液體的量一般不超過其容積的1/3。 正確 不正確2) 固體藥品的取用(1)取用試劑前應(yīng)看清標簽。取用時，先打開瓶塞，將瓶塞倒放在實驗臺上。如果瓶塞一端不是平頂而是扁平的，可用食指和中指將瓶塞夾住(或放在清潔的表面皿上)，決不可將它橫置桌面上以免污染。不能用手接觸化學試劑，應(yīng)根據(jù)用量取用試劑。取用完畢，一定要把瓶塞蓋嚴，絕不允許將瓶塞張冠李戴。然后把試劑瓶放回原處，以保持實驗臺整齊干凈。 (2)要用清潔、干燥的藥匙取試劑。用過的藥匙必須洗凈擦干后才能再使用。(3)注意取藥不要超過指定用量，多取的不

20、能倒回原瓶，可放在指定的容器中供他人使用。(4)一般固體試劑可以放在干凈的紙或表面皿上稱量。具有腐蝕性、強氧化性或易潮解的固體試劑應(yīng)放在表面皿或玻璃容器內(nèi)稱量。(5)往試管(特別是濕的試管)中加入固體試劑時，可用藥匙或?qū)⑷〕龅乃幤贩旁趯φ鄣募埐凵希爝M試管約2/3處，小心地將藥品倒入試管內(nèi)。加入塊狀固體試劑時，應(yīng)將試管傾斜，使其沿著試管壁慢慢滑下，以免碰破試管二、常用儀器及設(shè)備的使用：1. 移液槍（微量移液器）使用方法：1)選擇適當?shù)奈⒘恳埔浩鳎翰煌吞柕奈⒘恳埔浩?，各有其吸取體積范圍，請依取用溶液體積取用適當?shù)奈⒘恳埔浩鳌Y100 20ul 100ulQY200 50ul 200ulQY1

21、000 100ul 1000ul2)設(shè)定體積：設(shè)定體積時，請勿將體積調(diào)整圈轉(zhuǎn)到超過最低或最高的使用范圍,以免損壞移液槍。3)套上微量移液器頭，吸取溶液： 吸取溶液時，尖端請先套上微量移液器頭 (槍頭)，QY1000 使用藍色微量移液器頭，QY200 及QY100 使用黃色微量移液器頭。標準操作： 適用的液體：水、緩沖液、稀釋的鹽溶液和酸堿溶液。 1)按到第一檔，垂直進入液面幾毫米。 2)緩慢松開控制按鈕，否則液體進入吸頭過速會導(dǎo)致液體倒吸人移液器內(nèi)部吸人體積減少。 3)打出液體時貼壁并有一定角度，先按到第一檔，稍微停頓1s后，待剩余液體聚集后，再按到第二檔將剩余液體全部壓出。適用的液體：黏稠或

22、易揮發(fā)液體 在移取黏稠或易揮發(fā)的液體時，很容易導(dǎo)致體積誤差較大。為了提高移液準確性，可以采取以下方法： 1)移液前先用液體預(yù)濕吸頭內(nèi)部，即反復(fù)吸打液體幾次使吸頭預(yù)濕，吸液或排出液體時最好多停留幾秒。尤其對于移取體積大的液體，建議將吸頭預(yù)濕后再移取。 2)采用反相移液法：吸液時按到第二檔，慢慢松開控制按鈕，打液時按到第二檔，部分液體殘留在吸頭內(nèi)。 3)適當加熱液體，使其易于吸取。注意事項：1) 勿將微量移液器本體浸入溶液中。2) 吸液時，移液器本身傾斜，導(dǎo)致移液不準確(應(yīng)該垂直吸液，慢吸慢放)。3）吸取黏度高之試液，請先將微量移液器頭尖端以刀片或剪刀將出口切大，并先行預(yù)潤后再吸取。4) 用大量程

23、的移液器移取小體積樣品(應(yīng)該選擇合適量程范圍的移液器)。直接按到第二檔吸液5）吸取酸液或具腐蝕性溶液后，請將微量移液器拆解開，各部位零件以蒸餾水沖洗干凈，擦干后再正確組合回復(fù)原狀。6) 微量移液器的任何部份切勿用火燒烤，亦不可吸取溫度高于70的溶液，避免蒸氣侵入腐蝕活塞。7) 套有微量移液器頭的微量移液器，無論微量移液器頭中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。2.電子天平的使用方法：1) 事先檢查電源電壓是否匹配（必要時配置穩(wěn)壓器），接通電源并預(yù)熱使天平處于備用狀態(tài)。并檢查并調(diào)整天平至水平位置。2) 預(yù)熱足夠時間后打開天平開關(guān)，天平則自動進行靈敏度及零點調(diào)節(jié)，使天平處于零位，否則按去皮鍵。待穩(wěn)

24、定標志顯示后，可進行正式稱量。3) 稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關(guān)上側(cè)門，輕按一下去皮鍵，天平將自動校對零點，然后逐漸加入待稱物質(zhì)，直到所需重量為止。記錄讀數(shù)。4) 將稱量瓶或稱量紙拿出，轉(zhuǎn)移所稱量物質(zhì)至錐形瓶或燒杯，將稱量紙扔到垃圾桶，稱量瓶清洗干凈。按天平去皮鍵清零，以備再用。5）稱量結(jié)束后，或者關(guān)上側(cè)門，切斷電源，并做好使用情況登記。電子天平使用注意事項：1）在使用前調(diào)整水平儀氣泡至中間位置。2）電子天平應(yīng)按說明書的要求進行預(yù)熱3）稱量時應(yīng)從側(cè)門取放物質(zhì)，讀數(shù)時應(yīng)關(guān)閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。前門僅在檢修或清除殘留物質(zhì)時使用。4）稱量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時，要盛放在密閉

25、的容器中，以免腐蝕和損壞電子天平。5）操作天平不可過載使用以免損壞天平.目前我們所用天平最大量程為200g.3. 722S分光光度計使用方法：1）預(yù)熱：開機后燈及電子部分需預(yù)熱平衡，故一般開機20min 后可開始測定。2）調(diào)波長：用旋鈕調(diào)節(jié)，波長顯示窗讀數(shù)時目光垂直觀察。3）調(diào)零及調(diào)100%T進入測試狀態(tài)。操作：打開樣品槽蓋，按100%鍵，即可自動調(diào)整到零位。蓋好蓋按下“100%T”即可自動調(diào)100%。（注：調(diào)100% 可能影響0%，調(diào)整后請檢查0%，如有變化可重調(diào)0%一次）。4）改變樣品槽位置讓不同樣品進入光路。槽有四位置，用拉桿改變，離測試者最近為“0”，依次為“1”、“2”、“3”位置。

26、將空白放入“0”號位置，蓋好蓋子，按100%鍵調(diào)零，拉動拉桿，可依次讀取“1”、“2”、“3”位置各管吸光度值。5）確定濾光片位置：當測試波長在340380nm 內(nèi)作高精度測試可將撥桿推向前，通常不用此濾光片，可將其置于4001 000nm 處。6）改變模式透射率：用于透明液體和固體測量透射測量。吸光度：用于標準曲線法或絕對吸收法定量分析，在作動力學測試時可使用。濃度因子：用于在濃度因子法濃度直讀時設(shè)定濃度因子。濃度直讀：用于標樣法濃度直讀時，作設(shè)定和讀出。注：各標尺的轉(zhuǎn)換用MODE 鍵并由各自指示燈指示。注意事項：1）操作應(yīng)輕緩，不要將樣品溶液弄到儀器上2）不要用手拿比色皿的光面3）比色皿用

27、畢應(yīng)及時清洗干凈4. METLER DELTA 320 pH計使用方法：1）打開電源開關(guān)，進入測量狀態(tài)。2）校正：長按“模式”鍵，進入“Prog”狀態(tài)，按“模式”進入b2，按 或選擇b 1或b3，LCD會逐一顯示蓋緩沖溶液組內(nèi)的緩沖溶液pH值，按“模式”確認，按“讀數(shù)退回正常測量狀態(tài)。3）將電極放在一個標準緩沖液中并按“校正”，儀表將顯示相應(yīng)緩沖液pH。4）用去離子水沖洗電極，將電極放入下一個標準緩沖液中，重復(fù)3，進行兩點或三點校準，儀器更新零點和斜率，標定完成，按“讀數(shù)”退回測量狀態(tài)。5）用蒸餾水清洗電極頭部，用被測溶液再洗一次，把電極浸入被測溶液中，再用玻璃棒攪拌，使溶液均勻，按“讀數(shù)”鍵

28、測量，儀器穩(wěn)定后顯示 A，在顯示屏上讀數(shù)即溶液的pH值。6）測量結(jié)束，及時將電極保護套套上。注意事項：1）一般情況下，24h內(nèi)儀器不需再標定。2）電極保護套內(nèi)及時補加3M KCl，切忌浸泡在蒸餾水中，防止干涸。3）儀器pH測量范圍為014.00，溫度范圍為-5-105，精確度0.01pH、1mV。4）如果斜率下降、響應(yīng)速度慢或電極膜干涸，將電極頭浸入0.1MHCl中過夜。5. Sigma SK30低溫高速冷凍離心機操作方法：操作步驟：1）裝好所需轉(zhuǎn)子：本實驗室Sigma離心機配有兩個型號的轉(zhuǎn)子：12150H，容量6×140g,最高轉(zhuǎn)速21000轉(zhuǎn)/min；12154H，容量24

29、15;5g,最高轉(zhuǎn)速26000轉(zhuǎn)/min，離心中，一定要注意，轉(zhuǎn)子和轉(zhuǎn)頭要同一型號。用專用扳手擰緊轉(zhuǎn)軸螺母，蓋好同型號轉(zhuǎn)子的蓋子，擰緊。2) 設(shè)置參數(shù)：打開機身背側(cè)電源開關(guān)，機身前面面板有數(shù)字顯示，轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)旋鈕，可在面板上“DREHZAHL”（離心速度，rpm）、“RZB”（相對離心力，×g）“ZEIT”（離心時間）、“TEMP”（離心溫度）、“ROTOR”（轉(zhuǎn)子選擇）等顯示欄之間選擇，選擇需設(shè)定參數(shù)，按下調(diào)節(jié)旋鈕，“SET”同時被選擇，轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)旋鈕，設(shè)定溫度、離心速度、時間、轉(zhuǎn)子型號等參數(shù)，蓋好離心機蓋門，等待降溫。3）離心：溫度達到所需溫度后，打開離心機蓋門，擰開蓋子，放入已經(jīng)平

30、衡過的離心樣品，擰緊蓋子，關(guān)閉離心機蓋門，啟動按鈕和開蓋按鈕亮。按下啟動按鈕，開始離心。4）等離心機完全停下，開蓋指示燈亮后，打開離心機，取出樣品，蓋好蓋子，關(guān)閉離心機。如果在離心過程中，發(fā)現(xiàn)有異常情況，立即按下“停止” 按鈕，如不能完全停止，可關(guān)閉電源，等待離心機完全停止。注意事項：1、本設(shè)備最大離心力可達60000 g以上，離心轉(zhuǎn)速范圍100 30000 rpm（依據(jù)轉(zhuǎn)頭型號確定），設(shè)置不能超過最大轉(zhuǎn)速，設(shè)定步長1 rpm，溫度范圍-20-+40，最大功率1300W。2、離心前，一定要平衡，對稱放置，離心期間，不得離人。實驗二 氨基酸紙層析法一、實驗?zāi)康?學習紙層析法的基本原理和方法二、實

31、驗原理 氨基酸混合液經(jīng)紙層析,由于不同的氨基酸有不同的分配系數(shù),移動速度不同,從而達到分離。經(jīng)顯色后,與標準氨基酸圖譜比較或與氨基酸的標準Rf值比較,可辨別各種氨基酸。三、實驗儀器（器材） 層析缸、分液漏斗、吹風機、毛細管。四、實驗試劑和材料試劑：擴展劑：正丁醇:88甲酸:水15:3:2（體積比）0.2茚三酮正丁醇顯色液：幾種氨基酸標準溶液（0.5）氨基酸混合液材料：新華濾紙五、實驗流程畫線（下沿1.5cm）Æ標記樣點（1.5cm一個）Æ配制擴展劑Æ取樣Æ點樣練習Æ（選好毛細管）點樣Æ卷紙筒Æ取擴展劑（放于培養(yǎng)皿）Æ

32、;放濾紙于層析缸,蓋好Æ擴展（3小時）Æ配染色劑Æ取濾紙Æ剪紙、吹干Æ染色Æ吹干Æ量各樣品移動距離Æ結(jié)果分析。六、主要實驗環(huán)節(jié)1、擴展劑的配制及層析缸飽和：將配好的溶液倒入分液漏斗,等分層后,放掉下部水層,再把展開劑放入培養(yǎng)皿,使液面達培養(yǎng)皿高度的一半,把它放入層析缸進行飽和。2、記號：取層析紙一張（12×24CM）。在紙的一端距邊緣2厘米處用鉛筆劃一條直線,在此直線上每間隔1.5厘米作一記號,共6個記號。3、點樣：用毛細管將各氨基酸樣品分別點在這六個位置上, 干后再點一次。每點在紙上的擴散直徑最大不超過

33、3毫米。4、擴展：用線將濾紙縫成筒狀,紙張兩邊不能接觸,不能用手觸碰濾紙中部。將盛有擴展劑的培養(yǎng)皿迅速的置于密封的層析缸中,并將濾紙直立于培養(yǎng)皿中（點樣的一端在下,擴展劑的液面需低于點樣線）到溶劑上升15-20厘米時即取出濾紙,用鉛筆描繪出溶劑前沿線,自然干燥或用吹風機熱風吹干。5、顯色：用噴霧器均勻的噴上0.2%的茚三酮正丁醇溶液；然后置于烘干箱烘干5分鐘就可顯現(xiàn)出各個層析斑點七、結(jié)果及分析 繪出氨基酸層析圖,標明混合樣各成分的名稱,計算各個氨基酸的遷移率,并分析說明。 八、注意事項（1）點樣要適量,不宜太多,樣點直徑不超過0.3厘米。（2）點樣毛細管,一樣一支,不要重復(fù)使用。九、思考題為什

34、么擴展劑要用兩種溶劑系統(tǒng)？實驗三 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)一、實驗?zāi)康模菏煜ず驼莆盏鞍踪|(zhì)沉淀的相關(guān)原理。二、實驗原理：多數(shù)蛋白質(zhì)是親水膠體，當其穩(wěn)定因素被破壞或與某些試劑結(jié)合成不溶解的鹽后，即產(chǎn)生沉淀。蛋白質(zhì)鹽析作用：向蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽至一定濃度，蛋白質(zhì)即沉淀析出，這種作用稱為鹽析。乙醇沉淀蛋白質(zhì)：乙醇為脫水劑，能破壞蛋白質(zhì)質(zhì)點的水化層使其沉淀出來。重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)與重金屬離子結(jié)合成不溶性鹽類而沉淀。三、實驗儀器及用品實驗器材：試管、吸管、吸濾瓶、布式漏斗。試劑：蛋白質(zhì)試液、硫酸銨結(jié)晶體、飽和硫酸銨溶液、95%乙醇、結(jié)晶氯化鈉、1%醋酸鉛、5%鞣酸溶液、1%硫酸銅溶液、飽和苦味酸溶液、

35、1%醋酸溶液。四、實驗內(nèi)容及步驟一）蛋白質(zhì)鹽析作用1.取蛋白質(zhì)溶液5ml，加入等量飽和硫酸銨溶液，微微搖動試管，使溶液混合靜置幾分鐘，球蛋白即析出。2. 將上述混合液過濾，濾液中加硫酸銨粉末，至不再溶解，析出的即為清蛋白。再加水稀釋，觀察是否溶解。二）乙醇沉淀蛋白質(zhì)取蛋白質(zhì)溶液1ml，加晶體NaCl少許，待溶解后再加入95%乙醇2ml混勻。觀察有無沉淀析出。三）重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)取試管2支各加蛋白質(zhì)2ml，一管內(nèi)滴加1%醋酸鉛溶液，另一管內(nèi)滴加1%CuSO4溶液，至有沉淀生成。四）生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取2支試管各加2ml蛋白質(zhì)溶液及1%醋酸溶液4-5滴，向一管中加5%鞣酸溶液數(shù)滴，另一管內(nèi)加飽

36、和苦味酸溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果了。五）實驗現(xiàn)象觀察及記錄 仔細觀察實驗現(xiàn)象變化，并記錄。實驗四 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定一、實驗?zāi)康?掌握酶活性的測定原理和方法二、實驗原理 ALT（血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）在適宜的溫度及pH條件下作用于丙氨酸及-酮戊二酸組成的基質(zhì),生成丙氨酸及谷氨酸,反應(yīng)至所規(guī)定的時間后加入2,4-二硝基苯肼-鹽酸溶液終止反應(yīng),同時2,4-二硝基苯肼與丙酮酸的羰基加成,生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色,根據(jù)顏色深淺確定酶的活力強弱。三、實驗儀器（器材） 722分光光度計、試管、移液管、恒溫水浴四、實驗試劑和材料試劑：0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液：將0.1mol/L磷酸氫二

37、鈉溶液420ml,0.1mol/L磷酸二氫鉀80ml,混勻,即為pH7.4、0.1mol磷酸鹽緩沖液,加氯仿數(shù)滴,4保存。ALT底物液：稱DL-丙氨酸1.79g,-酮戊二酸29.2mg,加磷酸鹽緩沖液（pH7.4）約50ml煮沸溶解后,待冷,用1mol/L NaOH調(diào)整pH7.4（約加0.5ml）,緩沖液加到100ml,加氯仿數(shù)滴, 4保存。該溶液可穩(wěn)定2周。2,4-二硝基苯肼溶液：稱取,-二硝基苯肼19.8mg,溶于10mol/L鹽酸10ml中,完全溶解后蒸餾水至100ml,置棕色瓶中,室溫保存,若有結(jié)晶析出,應(yīng)重新配置。0.4mol/L的氫氧化鈉溶液丙酮酸標準溶液：精確稱取純丙酮酸鈉22.

38、0mg于100ml容量瓶中,加0.1mol/L磷酸鹽緩沖溶液至刻度.此溶液需在臨用前配制。 材料：動物血清五、實驗步驟器皿洗滌Æ取試劑Æ標準曲線制作ÆALT活力測定1、標準曲線制定試管號12345丙酮酸鈉（ml）00.050.100.150.20ALT底物（ml）0.50.450.400.350.30磷酸鹽緩沖液（ml）0.1相當ALT活力單位028579715037水浴（min）52,4-二硝基苯肼（ml）0.537水?。╩in）200.4mol/L NaOH（ml）5722S測定（505nm）混勻，放置5min，在波長505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度

39、，各管吸光度均減“1”號管吸光度為該標準管的吸光度值。以吸光度值為縱坐標，對應(yīng)的酶活性單位為橫坐標，各標準管代表的活性單位與吸光度值作圖，即成標準曲線。2、血清ALT測定樣樣樣對照血清0.10.10.10.1ALT底物0.40.40.4037水?。╩in）303030302,4-二硝基苯肼（ml）0.50.50.50.5ALT底物（ml）0000.537水?。╩in）202020200.4mol/L NaOH（ml）5555722S測定（505nm）室溫放置5min，在波長505nm處以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度。測定管吸光度減去樣本對照管吸光度的差值為標本的吸光度。該值在校正曲線上查得ALT

40、活力。六、結(jié)果及分析從標準曲線查找血清吸光值對應(yīng)的ALT活力,分析影響標準曲線的質(zhì)量高低及樣品活力大小的原因。七、注意事項1丙酮酸標準液的配制 丙酮酸不穩(wěn)定，見空氣易發(fā)生聚合反應(yīng)，生成多聚丙酮酸，而失去其化學性質(zhì)。在配制校正曲線時，不會出現(xiàn)顯色反應(yīng)。此時應(yīng)將變性的丙酮酸放在干燥箱（4055）23h，或干燥器中過夜后再使用。2基質(zhì)液中的-酮戊二酸和顯色劑2，4-二硝基苯肼均為呈色物質(zhì)，稱量必須很準確。各試劑加量必須準確。3當血清標本酶活力超過150時，應(yīng)將血清用0.145mol/L NaCl溶液稀釋后重測，其結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。 4加入2，4-二硝基苯肼溶液后，應(yīng)充分混勻，使反應(yīng)完全。加入NaOH

41、溶液時要緩慢并且邊加邊搖勻，如液體混合不完全或NaOH溶液的加入速度不同， 則-酮戊二酸引起的發(fā)色增強，導(dǎo)致吸光度讀數(shù)的差異。呈色的深淺與NaOH的濃度也有關(guān)系，NaOH濃度越大呈色越深。NaOH溶液0.25mol/L時，吸光度下降變陡，因此NaOH濃度要準確。備注：酶活力定義為： 1ml血清與基質(zhì)液在37，保溫30分鐘，生成2.5ug丙酮酸為一個活力單位。八、思考題影響血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活力測定的因素有哪些？實驗五 維生素C的定量測定一、實驗?zāi)康恼莆?，6-二氯酚靛酚法測定維生素C含量的原理和方法熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技術(shù)。二、實驗原理測定維生素C（抗壞血酸）的化學方法，

42、一般是根據(jù)它的還原性。本實驗即是利用維生素C的這一性質(zhì)，使其與2，6-二氯酚靛酚作用。2，6-二氯酚靛酚鈉鹽的水溶液呈藍色，在酸性環(huán)境中為玫瑰色，當其被還原時，則脫色。根據(jù)上述反應(yīng)，利用2，6-二氯酚靛酚在酸性環(huán)境中滴定含有維生素C的樣品溶液。開始時，樣品液中的維生素C立即將滴入的2，6-二氯酚靛酚還原脫色，當樣品液中維生素C全部氧化時，再滴入的2，6-二氯酚靛酚就不再被還原脫色而呈玫瑰色。故當樣品液用2，6-二氯酚靛酚標準液滴定時，溶液出現(xiàn)淺玫瑰色時表明樣品液中的維生素C全部被氧化，達到了測定終點。此時，記錄滴定所消耗的2，6-二氯酚靛酚標準液量，按下述公式計算出樣品液中還原型維生素C的含量

43、。計算公式：維生素C毫克數(shù)/100g樣品= 式中 VA：滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫升數(shù)； VB：滴定空白對照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均毫升數(shù)； S：1mL 2，6-二氯酚靛酚溶液相當于維生素C的毫克數(shù)； W：10mL樣品提取液中含樣品的克數(shù)。三、實驗儀器（器材） 研缽、容量瓶、錐形瓶、微量滴定管、天平等。四、實驗試劑和材料 試劑：10鹽酸溶液偏磷酸-醋酸溶液：稱取偏磷酸15g，溶于40mL冰醋酸和450mL蒸餾水所配成的混合液中。過濾。貯于冰箱內(nèi)，此液保存不得超過10天。2，6-二氯酚靛酚溶液：稱取9.21g碳酸氫鈉，026g2，6二氯酚靛酚溶于 250mL蒸餾水中，稀

44、釋至1000mL。過濾，裝入棕色瓶內(nèi)，置冰箱內(nèi)保存，不得超過3天。使用前用新配制的標準抗壞血酸溶液標定。取5mL標準抗壞血酸镕液加入5ml偏磷醋酸溶液， 然后用2，6二氯酚靛酚溶液滴定，以生成為微玫瑰紅色持續(xù)15秒鐘不退為終點。計算2，6二氯酚靛酚溶液的濃度，以每mL 2，6二氯酚靛酚溶液相當于抗壞血酸的mg數(shù)來表示。標準抗壞血酸（Vc）溶液：準確稱取純抗壞血酸結(jié)晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液，定容到250mL。裝入棕色瓶，貯于冰箱內(nèi)。酸化蒸餾水：每10mL蒸餾水加入10%HCl 1 滴。材料：綠豆芽五、實驗步驟1、制備含維生素C的樣品提取液。 稱取30g綠豆芽置研缽中研磨，放置片刻(約10分

45、鐘)，用2層紗布過濾，將濾液(如混濁可離心)濾入50mL容量瓶中,用酸化的蒸餾水定容，混勻，備用。2、量取樣品提取液10mL于錐形瓶中,以2，6二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液，呈微弱的玫瑰色，持續(xù)5秒鐘不退為終點，記錄所用2，6二氯酚靛酚的mL數(shù)。整個滴定過程不要超過2分鐘。另取10ml用10鹽酸酸化的蒸餾水做空白對照滴定（滴定時用微量移液器滴定）。樣品提取液和空白對照各做三份。計算結(jié)果。六、結(jié)果及分析按上述公式計算各樣品中Vc含量七、注意事項 (1) 整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1ml或多于4ml，如果樣品含維生素C太高或太低

46、時，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。(2) 本實驗必須在酸性條件下進行。在此條件下，干擾物反應(yīng)進行得很慢。(3) 滴定時每次均應(yīng)從0刻度開始，減少誤差。(4) 樣品中可能有其它雜質(zhì)還原二氯酚靛酚，但反應(yīng)速度均較抗壞血酸慢，因而滴定開始時，染料要迅速加入，而后盡可能一點一點地加入，并要不斷地搖動三角瓶直至呈粉紅色，于15s內(nèi)不消退為終點。八、思考題為了測得準確的維生素C含量，實驗過程中都應(yīng)注意哪些操作步驟？為什么？實驗六 血清總膽固醇的測定（鄰苯二甲醛法）一、實驗?zāi)康?掌握鄰苯二甲醛法測定血清總膽固醇的原理和方法二、實驗原理 膽固醇是環(huán)戊烷多氫菲的衍生物，它不僅參與血漿蛋白的組成，而且也是

47、細胞的必要結(jié)構(gòu)成分，還可以轉(zhuǎn)化成膽汁酸鹽、腎上腺皮質(zhì)激素和維生素D等。膽固醇在體內(nèi)以游離膽固醇及膽固醇酯兩種形式存在，統(tǒng)稱總膽固醇?？偰懝檀嫉臏y定有化學比色法和酶學方法兩類。本實驗采用前一種方法。 膽固醇及其酯在硫酸作用下與鄰苯二甲醛產(chǎn)生紫紅色物質(zhì)，此物質(zhì)在550nm波長處有最大吸收，可用比色法作總膽固醇的定量測定。膽固醇含量在400mg/100ml內(nèi)，與OD值呈良好線性關(guān)系。 本法不必離心，顏色產(chǎn)物也比較穩(wěn)定，膽紅素及一般溶血對結(jié)果影響不大，嚴重溶血者才使結(jié)果偏高。本法在2037條件下顯色，顯色后5分鐘開始至半小時以上顏色基本穩(wěn)定。溫度過低，顯色劑強度減弱；加混合酸后振搖過激能使產(chǎn)熱過高，也可使顯色減弱。三、實驗儀器（器材） 722可見分光光度計、試管、移液槍等。四、實驗試劑和材料試劑：鄰苯二甲醛試劑：稱取鄰苯二甲醛50mg，以無水乙醇溶至50ml冷藏，有效期為一個半月。醋酸（90）：取冰醋酸90ml加入10ml蒸餾水中?；旌纤幔?0醋酸100ml與濃硫酸100ml混合。標準膽固醇貯