河北科技師范學(xué)院教案

1、 河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 1 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)一 植物組織水勢(shì)的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題小葉流法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握小葉流法測(cè)定植物組織水勢(shì)和方法、原理，要求配制的蔗糖溶液一定要準(zhǔn)確，并且要充分搖勻。教學(xué)重點(diǎn)小葉流法測(cè)定植物組織水勢(shì)的方法和原理難 點(diǎn)小葉流法測(cè)定植物組織水勢(shì)的原理教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、 目的意義測(cè)定植物組織水勢(shì)是了解植物體內(nèi)水分狀況及其與環(huán)境關(guān)系的重要生理

2、指標(biāo)。二、實(shí)驗(yàn)原理：當(dāng)植物組織浸在已知濃度的外液中，可能有三種情況：一是組織水勢(shì)高于外液，組織失水，外液濃度降低，比重變??；二是組織水勢(shì)低于外液，組織吸水，外液濃度升高，比重變大；三是兩者水勢(shì)相等，外液濃度與比重均不變。本測(cè)定就是根據(jù)外液比重的變化（通過藍(lán)色小液滴的升降）找出與組織水勢(shì)相等的已知濃度外液，此溶液的滲透勢(shì)即等于組織的水勢(shì)。二、 實(shí)驗(yàn)儀器、材料、試劑53051 / 24課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配1.儀器：打孔器（0.5cm2左右）、玻璃板、大試管與小試管、移液管、毛吸移液管、試管架、洗耳球、青霉素瓶、鑷子、解剖針、濾紙等； 2. 材料：土豆；3、試劑：1mol

3、·L-1蔗糖溶液、甲烯藍(lán)粉末。三、實(shí)驗(yàn)步驟：1、配制蔗糖系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液：2、測(cè)定：五只試管，各裝入五片土豆片，分別取上面所配的蔗糖溶液2mL，靜置20分鐘后染色，用毛細(xì)移管分別從小試管中吸取藍(lán)色溶液插入相對(duì)應(yīng)的大試管中部，放出1滴，觀察液滴升降情況，不動(dòng)則意味著葉片組織水勢(shì)等于該溶液的滲透勢(shì)；如無不動(dòng)的液滴，可取下降與上升兩管溶液濃度的平均值作為等滲溶液。3、 計(jì)算：帶入公式：組織水勢(shì)=-icRTs滲透勢(shì)（×10 5Pa）； R氣體常數(shù)（0.083L·×105Pa·mol-1·度-1）； i解離系數(shù)（蔗糖為1）； T絕對(duì)溫度（273

4、t度）。 C等滲溶液濃度（mol·L-1）；四、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日40602020作業(yè)及 參考文獻(xiàn)如果檢驗(yàn)結(jié)果是所有濃度中小液滴全部上升或下降，這是什么原因？應(yīng)如何進(jìn)行調(diào)整才能獲得所需數(shù)據(jù)？李合生主編.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù).北京：高等教育出版社，2000。課后小結(jié)教研室主任（簽字）： 河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 3 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)二 呼吸強(qiáng)度的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)授課日期課 題呼吸強(qiáng)度的測(cè)定小籃子法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握呼吸強(qiáng)度測(cè)定的原理和方法，學(xué)會(huì)使用酸

5、堿滴定管教學(xué)重點(diǎn)小籃子法測(cè)呼吸強(qiáng)度的原理難 點(diǎn)小籃子法測(cè)呼吸強(qiáng)度的原理教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、目的意義二、實(shí)驗(yàn)原理呼吸強(qiáng)度可用單位重量的植物材料在單位時(shí)間內(nèi)所釋放的CO2mg數(shù)來表示。呼吸放出的CO2被Ba(OH)2吸收生成BaCO3沉淀，用草酸滴定剩余的Ba(OH)2，并與空白滴定相比，根據(jù)草酸實(shí)際用量之差，即可求出被測(cè)植物的呼吸強(qiáng)度。反應(yīng)如下：Ba（0H）2CO2一一BaCO3H20剩余Ba（0H）2H2C2O4BaC2O4H20三、實(shí)驗(yàn)儀器、材料、試劑材料：發(fā)芽大豆種子。儀器：托盤天平；酸、堿滴定管及管架一套；廣口瓶

6、測(cè)呼吸裝置。試劑：（1）0.0225 moLL-1草酸溶液： （2）酚酞指示劑：（3）0.05 moLL-1 Ba（0H）2溶液 4010課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 三、操作步驟：1樣品測(cè)定：加 Ba（0H）2溶液20m1，同時(shí)稱取植物材料（大豆種子）5g裝入小籃子內(nèi)，掛在橡皮塞下。把塞子塞在廣口瓶上，開始記錄時(shí)間，經(jīng)過30分鐘，其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次，使溶液表面的碳酸鋇薄膜被破壞，利于CO2的吸收。到預(yù)定時(shí)間后，輕輕開塞，把裝有植物材料的小籃子迅速取下，立即重新塞緊。充分搖動(dòng)2分鐘，使瓶中的CO2全部被吸收。然后拔出小橡皮塞。加入酚酞1滴，用草酸滴定，記錄草酸用量。2空白滴定

7、：在廣口瓶中準(zhǔn)確加入 Ba（0H）2溶液20ml，立即塞緊橡皮塞（不帶小籃子），充分搖動(dòng)廣口瓶4分鐘。待瓶?jī)?nèi)CO2全部被吸收后，打開小橡皮塞，加入酚酞1滴，把滴定管插入孔中，用草酸溶液進(jìn)行空白滴定，至紅色剛剛消失為止。記錄草酸用量。4.計(jì)算（空白滴定值（ml）-正式滴定值（ml）×C）/植物組織鮮重（g）×時(shí)間（小時(shí)） C：1ml草酸相當(dāng)于CO2毫克數(shù)，本實(shí)驗(yàn)中為1。四、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日60302020作業(yè)及 參考文獻(xiàn)本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置對(duì)照瓶的原因。中國(guó)科學(xué)院上海植物生理研究所,上海市植物生理學(xué)會(huì)編,現(xiàn)代植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),北京:科學(xué)出版社,1999.李合生主編.植物生理生化實(shí)

8、驗(yàn)原理與技術(shù).北京：高等教育出版社，2000。課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 3 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)三 丙二醛含量的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題丙二醛含量的測(cè)定時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握測(cè)定丙二醛含量的原理和操作步驟，要求能夠熟練使用722分光光度計(jì)。 教學(xué)重點(diǎn)測(cè)定丙二醛含量的原理和操作步驟難 點(diǎn)測(cè)定丙二醛含量的原理和操作步驟教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、目的意義植物器官

9、衰老時(shí)或在逆境條件下，往往發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛（malondisldehyde，MDA）是其產(chǎn)物之一，通常利用它作為膜質(zhì)過氧化指標(biāo)，表示細(xì)胞膜脂過氧化程度和植物對(duì)逆境條件反應(yīng)的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)植物組織中丙二醛含量測(cè)定的原理及操作。二、原理MDA在高溫、酸性條件下與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)，形成的有色三甲基復(fù)合物在532nm波長(zhǎng)處有最大光吸收，并且在600nm波長(zhǎng)處有最小光吸收。但是，測(cè)定植物組織中MDA時(shí)受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)在450nm，但532nm處也有吸收。為消除這種干擾，可用下列經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算比色液中MDA的濃度，進(jìn)

10、一步計(jì)算出植物組織中的含量。520課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑1. 實(shí)驗(yàn)材料：油菜葉片。2. 儀器：723分光光度計(jì)、冷凍離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可調(diào)加樣器、研缽、試管等。3. 試劑：（1）5三氯乙酸（TCA）（2）0.5硫代巴比妥酸（TBA）：稱取TBA 0.5g溶于5TCA（W/V）溶液，并用其定容至100mL。四、操作步驟1.材料提?。悍Q取0.5g植物樣品（葉、根），加5TCA 5mL，研磨后所得勻漿3000rpm離心10min。取上清液2mL，加0.67TBA 2mL，混合后在100水浴上煮沸30min，冷卻后再離心一次。2.723分光光度計(jì)的

11、使用3. 樣品測(cè)定：分別測(cè)定上清液在450nm、532nm和600nm處的吸光值，并按公式算出MDA濃度，再算出單位鮮重組織中MDA含量（mol·g-1）。五、結(jié)果計(jì)算式中：為MDA含量（mol·g-1）；為MDA濃度（mol·L-1）；為提取液體積（mL）；為樣品鮮重（g）。六、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日56025251030作業(yè)及 參考文獻(xiàn)以0.2 mol·L-1NaH2PO4 Na2HPO4的為母液如何配制50 mol·L-1 PH7.8的磷酸緩沖液50Ml?薛應(yīng)龍主編.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn).北京:高等教育出版社,1985.李合生主編.植物生理生化實(shí)驗(yàn)

12、原理與技術(shù).北京：高等教育出版社，2000。課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 4 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)四超氧化物岐化酶活性的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題超氧化物岐化酶活性的測(cè)定NBT還原法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握超氧化物岐化酶活性的測(cè)定原理和方法，要求學(xué)會(huì)酶活力的表示法。 教學(xué)重點(diǎn)超氧化物岐化酶活性的測(cè)定原理和方法難 點(diǎn)超氧化物岐化酶活性的測(cè)定原理和方法教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)

13、間分配一、 目的意義超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是需氧生物中普遍存在的一種金屬酶。它與過氧化氫酶（CAT）、過氧化物酶（POD）統(tǒng)稱為保護(hù)酶系統(tǒng)，三者協(xié)同一致，防御活性氧（如超氧自由基）或其它過氧化物自由基對(duì)細(xì)胞膜系統(tǒng)的傷害，從而抵御不良環(huán)境的影響和細(xì)胞衰老。因此，常用于植物抗性生理和細(xì)胞衰老的研究。本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)掌握超氧化物歧化酶活性的測(cè)定原理與方法。二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)采用NBT光化還原法測(cè)定超氧化物歧化酶活性。氮藍(lán)四唑其水溶液為淡黃色。照光時(shí)，反應(yīng)體系產(chǎn)生氧自由基，可將NBT還原為藍(lán)色的甲月簪，該產(chǎn)物在560nm處有一最大吸收峰。當(dāng)有SOD存在時(shí)，

14、 它可以清除氧自由基而抑制此反應(yīng)。SOD活性越強(qiáng)，抑制作用越明顯，根據(jù)抑制的程度可以測(cè)530課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配定SOD的活性。同時(shí)，在反應(yīng)體系中加入核黃素和甲硫氨酸，前者可被光還原，并在有氧條件下再氧化產(chǎn)生超氧自由基，后者可保持酶的活性。通常，以抑制NBT光化還原50時(shí)的酶量作為一個(gè)酶活單位。三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑、1. 實(shí)驗(yàn)材料：油菜葉片。2. 儀器：分光光度計(jì)、人工智能氣候箱（光強(qiáng)達(dá)到50007000Lx的照光條件）、臺(tái)式高速離心機(jī)、研缽、小燒杯、具蓋白瓷盤等。四、操作步驟1. 酶液提?。喝∮筒巳~片剪碎（去掉葉脈），稱取0.2g，加2mL提取介質(zhì)研磨成勻漿，

15、15000rpm離心10min，上清液即為酶提取液。2. 酶活測(cè)定：取3支干潔小燒杯，按下表添加試劑（如需要設(shè)置重復(fù)或增加不同條件處理，可根據(jù)需要增加組合）。將2號(hào)置于暗中，1、3號(hào)置于人工智能氣候箱中照光10min。照光結(jié)束后迅速放入白瓷盤內(nèi)，蓋蓋，避免見光。以2號(hào)中的反應(yīng)液調(diào)零，測(cè)定1、3號(hào)反應(yīng)液在560nm下的OD值。編 號(hào)123反應(yīng)介質(zhì)（mL）酶提取液（mL）核黃素溶液(mL)磷酸緩沖液（mL）備 注3.90.010.1照光用于酶活測(cè)定3.90.10.01避光用于調(diào)零3.90.10.01照光用作對(duì)照五、結(jié)果計(jì)算超氧化物歧化酶活性單位（U）定義為1g鮮樣1h內(nèi)抑制NBT還原50所需的酶量

16、。六、登記數(shù)據(jù)、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日5803030作業(yè)及 參考文獻(xiàn)1. 0.082mol·L-1核黃素溶液250mL如何配制？2. 30%的H2O2配成40 mmol·L-1 的H2O2（密度1.438）薛應(yīng)龍主編.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn).北京:高等教育出版社,1985.課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 5 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)五 過氧化物酶活性的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題愈創(chuàng)木酚比色法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)

17、過氧化物酶活性的原理和方法，要求學(xué)會(huì)721分光光度計(jì)的使用。 教學(xué)重點(diǎn)愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)過氧化物酶活性的原理和方法、721分光光度計(jì)的使用難 點(diǎn)愈創(chuàng)木酚比色法測(cè)過氧化物酶活性的原理、 721分光光度計(jì)的使用教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、 目的意義過氧化物酶活性測(cè)定常作為植物組織老化和抗性的一個(gè)診斷指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)植物組織過氧化物酶活性的測(cè)定方法、原理及操作技術(shù)。二、原理在過氧化物酶催化下，過氧化氫將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產(chǎn)物，其在470nm處有最大吸收峰。該生成物顏色的深淺與其濃度成線性關(guān)系，故可用分光光度計(jì)測(cè)量生成物的含量

18、，間接測(cè)定過氧化物酶的活性。三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑1. 實(shí)驗(yàn)材料：油菜葉片2. 儀器：分光光度計(jì)、離心機(jī)、研缽、容量瓶、量筒、移液管等。3. 試劑：（1）10mmol·L-1 pH 7.0磷酸緩沖液（2）40mmol·L-1 H2O2：（3）20mmol·L-1愈創(chuàng)木酚： （4）20三氯乙酸2025課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 四、操作步驟： 1. 酶液制備：稱取油菜葉片0.2克，加入適量的pH 7.8磷酸緩沖液，充分研磨至無粗纖維為止，分裝在兩個(gè)塑料小離心管中，再用pH 7.8磷酸緩沖液洗凈研缽，洗液一并轉(zhuǎn)入小離心管，10000rpm離心2

19、0min，上清液即為酶提取液。2. 酶活性測(cè)定：取兩只試管，1支為測(cè)定管（可設(shè)重復(fù)），另1支為對(duì)照管，按下表加入試劑，配成POD反應(yīng)體系（隨酶量的增減，相應(yīng)改變加入磷酸緩沖液的量，以保持總體積不變）。搖勻，放入34水浴中保溫3min后，加入60L左右三氯乙酸，搖勻，以對(duì)照管作用液為空白，在470nm波長(zhǎng)下比色，讀取OD值。五、登記數(shù)據(jù)、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日556020作業(yè)及 參考文獻(xiàn)1、 配制0.5mol·L-1 的磷酸鈉溶液20010mL 需稱取Na2CO3.10H2O多少克，如何配制？2、 用12mol·L-1 濃鹽酸配成0.3mol·L-1 的稀鹽酸500mL

20、，如何配制？3、 掌握植物體內(nèi)三大保護(hù)酶系統(tǒng)的作用原理.薛應(yīng)龍主編.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn).北京:高等教育出版社,1985.課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 6 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)六 種子生活力的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題紅墨水染色法、TTC顯色法、BTB變色法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握三種方法測(cè)種子生活力的原理和方法，從而能夠快速測(cè)定種子生活力。 教學(xué)重點(diǎn)三種方法的原理及BTB顯色法的操作過程難 點(diǎn)三種方法的原理及BTB顯色法的操作過程（制膠

21、）教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、目的意義 在確定播種量以及種子生理研究中具有重要意義。二、紅墨水染色法 （一）原理 植物活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有分別透性，使得某些染料分子不能透過，因而不能將具生活力的種胚染色；而死的種胚，其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞，通透性增大，于是染料分子便能透膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而將無生活力的種胚染色。（二）材料、儀器、試劑材料：吸脹和煮過的玉米種子 儀器：刀試劑：稀釋20倍的紅墨水。 （三）方法步驟 染色：取已吸脹的玉米種子20粒，在闊面將胚縱切為兩半。將其中的一半放入試管中（另一半用來做TTC），加入稀釋20倍的紅墨水，以浸沒

22、種子為度，以便充分染色。 （四）結(jié)果計(jì)算 經(jīng)過5分鐘染色后，傾出紅墨水，用自來水反復(fù)沖洗種子，直至洗液不具紅色為止。對(duì)比觀察種胚著色情況。540課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 活種子（） 胚不著色的種子數(shù)/供試種子數(shù)×100 二、BTB變色法 （一）原理 活細(xì)胞在呼吸過程中釋放的CO2溶于水變成H2CO3， 后者解離成H+與HCO3-，使得活組織周圍介質(zhì)的酸度增加， 用BTB（溴麝香草酚藍(lán)）檢測(cè)酸度的變化，因此可鑒定種子的生活力。因?yàn)锽TB是酸堿指示劑，變色范圍為pH6.07.6，酸性呈黃色，堿性呈藍(lán)色，中間經(jīng)過綠色（變色點(diǎn)為pH7.1） 。 （二）材料、儀器、試劑

23、 材料：吸脹小麥種子。試劑：0.1BTB溶液 （三）方法步驟 播種：首先制膠。小燒杯1只裝入BTB溶液50mL，加熱當(dāng)溶液沸騰時(shí)加入剪碎的瓊脂0.5g，改用溫火加熱并不斷攪拌（勿使瓊脂結(jié)底），待瓊脂全部溶解后趁熱倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中，使成一均勻的薄層，待成凝膠后將種子播種于膠上（種子可胚朝下）。如30度保溫時(shí)間至2小時(shí)以上，則結(jié)果更明顯。 （四）結(jié)果計(jì)算 從溫箱中取出，在藍(lán)色背景（或?qū)猓┯^察，如種子周圍呈現(xiàn)較深黃色暈圈者為活種子，否則為死種子。并按下式計(jì)算出結(jié)果： 活種子（）=出現(xiàn)黃色暈圈的種子數(shù)/供試種子數(shù)×100 三、TTC顯色法 （一）原理 生活種胚進(jìn)行呼吸作用會(huì)NADH或NAD

24、PH，其可使進(jìn)入細(xì)胞的某些染料被還原而顯色（如TTC）或褪色（如甲烯藍(lán)）。失去生活力的種子，脫氫酶已失活，故無顏色變化；（二）：另一半玉米種子放入試管中，使0.1%的TTC浸沒，30度保溫30分鐘觀察，計(jì)算活種子數(shù)。五、登記數(shù)據(jù)、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日754020作業(yè)及 參考文獻(xiàn)本實(shí)驗(yàn)中，用紅墨水染色法和TCC顯色法測(cè)得的活種子百分?jǐn)?shù)是否相同？為什么?薛應(yīng)龍主編.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn).北京:高等教育出版社,1985.課后小結(jié)教研室主任（簽字）： 河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 7 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié)

25、：實(shí)驗(yàn)七 葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)原理和方法，尤其是理化性質(zhì)原理。 教學(xué)重點(diǎn)葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)原理和方法難 點(diǎn)葉綠體色素的提取、分離及理化性質(zhì)原理和方法教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、 目的意義葉綠體色素是參與光合作用的內(nèi)在因素，其理化性質(zhì)與光合能力密切相關(guān)，通過實(shí)驗(yàn)，將進(jìn)一步了解光合色素的一些理化性質(zhì)，掌握提取及測(cè)定方法與技術(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)原理（1）高等植物所含有的葉綠素溶于有

26、機(jī)溶劑，因此可用有機(jī)溶劑提?。唬?）4種色素顏色不同，在有機(jī)溶劑中的分配系數(shù)及在吸附劑上被吸附力度不同，可將色素分開；（3）葉綠素為雙羧酸酯，可與堿發(fā)生皂化反應(yīng)生成溶于水的皂化葉綠素和醇，從而與類胡蘿卜素分開；（4）分層后的色素吸收光譜不同，類胡蘿卜素吸收藍(lán)、紫光，葉綠素吸收藍(lán)、紫、紅、橙光；可在分1040課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配光棱鏡下觀察其吸收光譜（5）葉綠素卟啉環(huán)中的鎂可被H+取代，生成褐色去鎂葉綠素，在有Cu2+存在時(shí)，H+易被Cu2+取代，生成Cu2代葉綠素；（6）不加任何電子受體的色素提取液可觀察熒光現(xiàn)象。 三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑 材料：干菠菜葉粉 儀器：

27、天平、研缽、剪刀、漏斗等。試劑 80%丙酮、50%醋酸、醋酸銅溶液、30%KOH甲醇溶液、展層劑（石油醚：丙酮為10：1） 四、操作步驟：1. 色素提?。焊刹げ巳~粉0.5克，于研缽中加10ml95%乙醇研磨成勻漿再加10ml95%乙醇，浸提5分鐘，過濾于三角瓶中。2. 色素分離：用毛細(xì)管吸取濾液向圓形層析紙圓心點(diǎn)樣20次（每點(diǎn)一次干后再點(diǎn)）至濃綠，放紙捻，向蒸發(fā)皿中加入3ml展層劑，立即將直徑相同的另一培養(yǎng)皿蓋上，待展層劑前沿接近培養(yǎng)皿邊緣時(shí)打開培養(yǎng)皿，待展層劑揮發(fā)后觀察。3. 理化性質(zhì)的觀察：（1） 熒光現(xiàn)象 取15ml具塞試管一支，加入稀釋液5ml（2ml濾液+3ml95%乙醇）在入射光和

28、反射光下觀察液體顏色。（2） 皂化反應(yīng) 向上述試管的稀釋液中依次加入1.5ml30%KOH甲醇溶液。搖勻后加石油醚（或苯）5ml搖勻，沿試管壁緩慢加入1ml蒸餾水，搖勻后靜止分層判斷上下層溶液成分。（3） 吸收光譜的觀察 將分層后的色素在手持分光棱鏡下觀察吸收光譜。（4） 取代反應(yīng) 取一支試管加濾液5ml（同上（1步），傾出一半于另一試管中并向其滴加50%醋酸溶液，至溶液變褐；將變褐的溶液再傾一半于另一試管，滴加醋酸銅溶液至綠色，比較三支試管的顏色。五、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日20504020作業(yè)及 參考文獻(xiàn)把圓形層析紙一半放在光下一半放在書里，觀察有何不同？李合生主編.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù).

29、北京：高等教育出版社，2000。課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 8 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)八 光合色素含量的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題光合色素含量的測(cè)定時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握分光光度計(jì)法測(cè)光合色素含量的原理和方法，學(xué)會(huì)使用722分光光度計(jì)。 教學(xué)重點(diǎn)光合色素含量的原理和方法、使用722分光光度計(jì)。難 點(diǎn)光合色素含量的原理和方法教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、 目的意義光合

30、色素是葉綠體的重要組分，其功能是吸收、傳遞與轉(zhuǎn)換光能。因此，光合色素含量已成為植物生理（尤其是植物光合生理生態(tài)）研究中的一項(xiàng)重要指標(biāo),可通過測(cè)定色素含量尤其是葉綠素含量來考察植物光合生產(chǎn)的潛在能力。本實(shí)驗(yàn)要求掌握用分光光度計(jì)測(cè)定光合色素含量的方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)比耳定律：在某一特定波長(zhǎng)下，一束單色光通過有色溶液時(shí)，因溶液的吸收而使光強(qiáng)下降；溶液的濃度C與光密度OD成正比。由于各種色素吸收光譜不同，可測(cè)出各特定于最大吸收波長(zhǎng)下的光密度值，再根據(jù)色素分子在該波長(zhǎng)下的消光系數(shù)，建立公式，計(jì)算濃度。Arnon（1949）用80%丙酮提取葉綠素，選定葉綠素a的吸收峰為663nm，葉綠素b的吸收峰為6

31、45nm1020課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 三、 實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑材料 植物的菠菜葉片約0.2g儀器 722分光光度計(jì)；容量瓶；具塞刻度試管；研缽；離心機(jī)；天平；打孔器；剪刀；移液管等。試劑 80丙酮 四、操作步驟：1講離心機(jī)的使用2色素提取 將葉片洗凈并吸干外附水分，用打孔器在主脈兩側(cè)打取葉片，準(zhǔn)確稱重0.2g，剪碎放入研缽中，（80丙酮），研磨至殘?jiān)儼?，倒?0ml 離心管中，3000轉(zhuǎn)離心5分鐘，定容于50ml容量瓶中。 3講722分光光度計(jì)的使用4比色測(cè)定 將色素提取液倒入光徑為1cm的比色杯中，分別于662、644和440nm下比色，記錄OD值，代入Wet

32、sttein公式， Cb（mg·L-1）=21.43 OD644-4.65 OD662 Ct（mg·L-1）= Ca + Cb=5.13 OD662+20.44 OD644 Cc（mg·L-1）=4.70 OD440-0.27（Ca+Cb）計(jì)算出色素提取液的濃度，然后再根據(jù)下式計(jì)算含量：Ca（mg·L-1）=9.78 OD662-0.99 OD644 色素含量（mg·g-1）=五、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日51540303030作業(yè)及 參考文獻(xiàn)測(cè)定葉綠素含量按面積取樣和按重量取樣各有何優(yōu)缺點(diǎn)？李合生主編.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù).北京：高等教育出版社

33、，2000。課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 9 20062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)九 細(xì)胞差別透性的測(cè)定授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02授課日期課 題電導(dǎo)儀法時(shí) 數(shù)3教學(xué)目的及要求掌握電導(dǎo)儀法測(cè)細(xì)胞差別透性的原理和方法，要求掌握電導(dǎo)儀的使用方法。 教學(xué)重點(diǎn)細(xì)胞差別透性的原理和方法，電導(dǎo)儀的使用方法。難 點(diǎn)電導(dǎo)儀的使用方法教學(xué)方法及教具課堂講授、實(shí)驗(yàn)示范、輔導(dǎo)相結(jié)合課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配一、目的意義了解各種、各不同程度的逆境對(duì)細(xì)胞的傷害程度，是植物生

34、理工作的重要研究?jī)?nèi)容，而掌握測(cè)定細(xì)胞差別透性的方法，不僅為上述研究所需要，在生產(chǎn)上也是了解不同植物、不同品種抗逆性強(qiáng)弱的手段。本實(shí)驗(yàn)的目的是掌握電導(dǎo)率儀法測(cè)定植物細(xì)胞差別透性的原理及方法。二、實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)植物組織受到逆境傷害時(shí)，由于膜的功能受損或結(jié)構(gòu)破壞，而使其透性增大，引起細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)發(fā)生不同程度的外滲。用無離子水浸泡經(jīng)不同處理的植物組織，浸泡液的電導(dǎo)將因電解質(zhì)的外滲而加大，傷害愈重，電導(dǎo)度的增加也愈大。電解質(zhì)溶液的導(dǎo)電能力叫做電導(dǎo)，縮寫符號(hào)為G。而電導(dǎo)是電阻的倒數(shù)，即G = 1R。電導(dǎo)的單位是西門子，用S表示。由于電阻的單位是，作為其倒數(shù)的電導(dǎo)，就用-1來表示，讀作姆歐。在數(shù)量關(guān)系上，1S

35、 = 1-1。電導(dǎo)率是長(zhǎng)1m，截面積為1m2的一段導(dǎo)體或溶液的電導(dǎo)，單位為S/m，因單位太大， mS/cm或S/cm，讀做毫西或微西每厘米。1040課堂設(shè)計(jì)（教學(xué)內(nèi)容、過程、方法、圖表等）時(shí)間分配 三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑材料：油菜 儀器：電導(dǎo)儀、打孔器、真空泵、真空干燥器、冰箱、恒溫水浴、電爐、剪刀、具塞刻度試管、移液管、小燒杯、玻璃棒等。 試劑：無離子水或蒸餾水。四、操作步驟：電導(dǎo)儀的使用1. 用具清洗： 2. 材料準(zhǔn)備： 3. 材料處理：取4支試管編號(hào)。用打孔器打取葉片每管放入10個(gè)小圓片，然后，將號(hào)管放入0以下的冰箱，號(hào)管放入4550的恒溫箱或水浴中，號(hào)管置室溫下做為對(duì)照，各處理60m

36、in。 4. 測(cè)本底值：上述處理完畢，將號(hào)管馬上加入10mL無離子水，搖晃后立即測(cè)其電導(dǎo)率值并記錄，作為本底值。 5. 抽氣：將、號(hào)試管取出，各加入無離子水10mL，置真空干燥器中抽氣10min。 6. 平衡：抽氣后的各處理于室溫下放置2030min，其間不時(shí)搖動(dòng)，促使電解質(zhì)外滲。若用于指導(dǎo)生產(chǎn)的有實(shí)際意義的測(cè)定，平衡應(yīng)起碼在1h以上。 7. 測(cè)初值：將平衡后各處理分別測(cè)其電導(dǎo)率值并記錄，作為初值。 8. 測(cè)終值：將測(cè)定初值的各處理用塑料薄膜封口，置沸水浴中煮沸10min，用自來水冷卻至室溫，分別測(cè)其電導(dǎo)值并記錄，做為終值。五、登記數(shù)據(jù)、整理實(shí)驗(yàn)用具、值日10306030作業(yè)及 參考文獻(xiàn)1 細(xì)胞差別透性測(cè)定和硝酸還原酶活性測(cè)定時(shí),為什么要對(duì)材料進(jìn)行抽真空處理?2 在用電導(dǎo)法測(cè)定細(xì)胞差別透性時(shí),樣品初值低于本底值的可能原因有哪些? 逆境處理初值低于對(duì)照值的可能原因有哪些?鄒琦主編. 植物生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.課后小結(jié)教研室主任（簽字）：河北科技師范學(xué)院教案 編號(hào) 1020062007 學(xué)年度 第 2 學(xué)期系（部） 生命科學(xué)系 教研室 生理生化 任課教師 楊 晴 課程名稱 植物生理實(shí)驗(yàn)授課章節(jié) ：實(shí)驗(yàn)十 硝酸還原酶活性的測(cè)定 授課班級(jí)生物科學(xué)0501、02