種子生活力的測定

1、種子生活力的測定、氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的種子胚部在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC溶液滲入種胚的活細胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（ NADH或NADPH） 還原時，可產(chǎn)生紅色的三苯基甲（TTF），胚便染成紅色。當(dāng)種胚生活力下降時，呼吸作用明顯減弱，脫氫酶的活性亦大大下降，胚的顏色變化不明顯， 故可由染色的程度推知種子的生活力強弱。TTC還原反應(yīng)如下：TTC （無色）TTF （紅色）【儀器與用具】培養(yǎng)皿2套；鑷子1把；單面刀片1片；墊板（切種子用）1塊；燒杯1個；棕色試劑瓶；解剖針1把；搪瓷盤1個；pH試紙?！驹噭縏TC溶液的配制

2、：取1g TTC溶于1 L蒸餾水或冷開水中，配制成 0.1 %的TTC溶液。 藥液p H應(yīng)在6.57.5，以pH試紙試之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加 水）?！痉椒ā?. 將玉米、小麥等作物的新種子、陳種子或死種子，用溫水（30 C）浸泡26h，使種子充分吸脹。2. 隨機取種子2份，每份50粒，沿種胚中央準確切開，取每粒種子的一半備用。3. 把切好的種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC溶液，以浸沒種子為度。4. 放入3035 C的恒溫箱內(nèi)保溫30min.也可在20 C左右的室溫下放置 4060min.5. 保溫后，傾出藥液，用自來水沖洗 23次，立即觀察種胚著色情況，判斷種子有無生活力

3、，把判斷結(jié)果記入表 32-1內(nèi)。表32-1染色法測定種子生活力記載表有生活力種無生活力有生活力種子方法種子名稱供試粒數(shù)子粒數(shù)種子粒數(shù)占供式粒數(shù)的%【注意事項】1. TTC溶液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如需貯藏則應(yīng)貯于棕色瓶中，放在陰涼黑暗處，如溶液變紅則不可再用。2. 染色溫度一般以2535 C為宜。3. 判斷有生活力的種子應(yīng)具備：胚發(fā)育良好、完整、整個胚染成鮮紅色；子葉有小部分 壞死，其部位不是胚中軸和子葉連接處；胚根尖雖有小部分壞死，但其它部位完好。4. 判斷無生活力的種子應(yīng)具備：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子葉不染色或喪失機能的組織超過1/2 ;胚染成很淡的紫紅色或淡灰紅色；子葉

4、與胚中軸的連接處或在胚根上有壞死的部分；胚根受傷以及發(fā)育不良的未成熟的種子。5. 不同作物種子生活力的測定，所需試劑濃度、浸泡時間、染色時間不同?，F(xiàn)將主要作物種子生活力測定所需條件列入表32-2。表32-2 TTC法測定主要作物種子生活力要點作 物種子準備TTC濃度（）在35 °C下染色時間（h）水 稻去殼縱切0.123高粱、玉米及麥類作物縱切0.10.5 1棉花、養(yǎng)麥、蓖麻剝?nèi)シN皮1.023花生甜菜大麻向日葵剝?nèi)シN皮0.134大豆 菜豆 亞麻二葉草無須準備1.034、紅墨水（酸性大紅G）染色法【原理】有生活力的種子其胚細胞的原生質(zhì)具有半透性，有選擇吸收外界物質(zhì)能力， 某些染料如紅墨

5、水中的酸性大紅G不能進入細胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失活力的種子其胚部細胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收的能力，染料進入細胞內(nèi)使胚部染色，所以可根據(jù)種子胚部是否染色來判 斷種子的生活力。【儀器與用具】 與TTC法相同?！驹噭考t墨水溶液的配制：取市售紅墨水稀釋20倍（1份紅墨水加19份自來水）作為染色劑。【方法】1. 先將待測種子用水浸泡34h，待充分吸脹后取出一部分種子，在沸水中煮沸3，5min，作為死種子。2. 取浸好的新種子、陳種子和死種子各50粒，如為小麥和玉米，則用單面刀片沿胚部中 線縱切成兩半，其中一半用于測定。3. 將備好的種子分別放在培養(yǎng)皿內(nèi)，加入紅墨水溶液，以浸沒種子為度。4. 染色1020min后傾出溶液，用自來水反復(fù)沖洗種子，直到所染顏色不再洗出為止。5. 對比觀察沖洗后的新種子、陳種子和死種子胚部著色情況。凡胚部不著色或略帶淺紅色者，即具有生