第十四章免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)

1、免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)免疫細(xì)胞的種類免疫細(xì)胞的種類l淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：T細(xì)胞、細(xì)胞、B細(xì)胞、細(xì)胞、 NK細(xì)胞等細(xì)胞等l單核巨噬細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞l樹突狀細(xì)胞樹突狀細(xì)胞l粒細(xì)胞粒細(xì)胞分離免疫細(xì)胞的樣本來(lái)源分離免疫細(xì)胞的樣本來(lái)源l外周血外周血l脾臟脾臟l淋巴結(jié)淋巴結(jié)l胸腺胸腺l骨髓骨髓分離免疫細(xì)胞的目的分離免疫細(xì)胞的目的l檢測(cè)免疫細(xì)胞的數(shù)量和功能，觀察機(jī)體免疫狀態(tài)檢測(cè)免疫細(xì)胞的數(shù)量和功能，觀察機(jī)體免疫狀態(tài)l免疫細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)研究免疫細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)研究l免疫細(xì)胞的培養(yǎng)和建株免疫細(xì)胞的培養(yǎng)和建株分離免疫細(xì)胞的一般原理分離免疫細(xì)胞的一般原理l物理學(xué)和生物學(xué)特征物理學(xué)和生物學(xué)特征l密

2、度大小密度大小l表面標(biāo)志表面標(biāo)志l其它活性：吞噬、黏附等其它活性：吞噬、黏附等本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容1. 免疫細(xì)胞的分離與純化免疫細(xì)胞的分離與純化 第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離與純化免疫細(xì)胞的分離與純化l白細(xì)胞的分離白細(xì)胞的分離 l外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 l淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離與純化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離與純化l淋巴細(xì)胞亞群的分離淋巴細(xì)胞亞群的分離 l細(xì)胞活力的檢測(cè)細(xì)胞活力的檢測(cè)一、白細(xì)胞的分離一、白細(xì)胞的分離 細(xì)胞密度不同，沉降速度不一樣。細(xì)胞密度不同，沉降速度不一樣。 粒細(xì)胞粒細(xì)胞1.092, 紅細(xì)胞紅細(xì)胞1.093, 沉降速度不一樣。沉降速度不一樣。l自然沉

3、降法自然沉降法(血漿、白細(xì)胞、紅細(xì)胞血漿、白細(xì)胞、紅細(xì)胞)l聚合物加速沉降法：明膠、右旋糖酐、甲基纖維聚合物加速沉降法：明膠、右旋糖酐、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等。素、聚乙烯吡咯烷酮等。 (會(huì)增加白細(xì)胞的黏性會(huì)增加白細(xì)胞的黏性)二、外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離二、外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血細(xì)胞的密度外周血細(xì)胞的密度 血小板：血小板：1.030-1.035 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞：淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞：1.075-1.090 粒細(xì)胞：粒細(xì)胞：1.092 紅細(xì)胞：紅細(xì)胞：1.093 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC): Mon

4、ocyte、Lymphocyte聚蔗糖（聚蔗糖（Ficoll）泛影葡胺分層液法）泛影葡胺分層液法（一）原理和方法1. 單次密度梯度分離法單次密度梯度分離法 單次密度梯度單次密度梯度 連續(xù)密度梯度連續(xù)密度梯度2. 試劑：試劑：FicollHypaqueFicoll：聚蔗糖，聚蔗糖，MW：40 000，高密度，高密度，低滲透壓、無(wú)毒性，低滲透壓、無(wú)毒性，6Ficoll密度為密度為1.020Hypaque：泛影葡糖胺，泛影葡糖胺，34 hypaque的密的密度為度為1.200，用于調(diào)整分離液的密度。，用于調(diào)整分離液的密度。分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞用分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞用1.0770.001的密的密度

5、分離液。度分離液。3. 3. 離心分離：離心分離：將細(xì)將細(xì)胞疊加在密度合適的胞疊加在密度合適的分層液分層液(1.075-1.09)(1.075-1.09) 上層，經(jīng)離心后細(xì)胞上層，經(jīng)離心后細(xì)胞可分為不同的區(qū)帶。可分為不同的區(qū)帶。4. 收集細(xì)胞收集細(xì)胞5. 洗滌、計(jì)數(shù)洗滌、計(jì)數(shù)（二）方法評(píng)價(jià)（二）方法評(píng)價(jià)l是分離PBMC最常用的方法l操作簡(jiǎn)單，不需特殊儀器設(shè)備l分離純度高，可達(dá)95l細(xì)胞得率高，可達(dá)80三、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離三、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離（一）紅細(xì)胞的去除：低滲（一）紅細(xì)胞的去除：低滲0.830.83NHNH4 4ClCl處理處理（二）血小板的去除：離心洗滌；二）血小板的去除

6、：離心洗滌；FCSFCS（三）單核細(xì)胞的去除（三）單核細(xì)胞的去除 黏附去除法黏附去除法、羰基鐵粉吞噬法羰基鐵粉吞噬法（四）（四）Percoll離心法純化離心法純化淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞單核細(xì)胞的去除單核細(xì)胞的去除l黏附去除法：黏附去除法：根據(jù)單核細(xì)胞具有黏附作用而根據(jù)單核細(xì)胞具有黏附作用而去除（培養(yǎng)；凝膠柱）去除（培養(yǎng)；凝膠柱）l羰基鐵粉法：羰基鐵粉法：?jiǎn)魏思?xì)胞具有吞噬羰基鐵粉的單核細(xì)胞具有吞噬羰基鐵粉的能力（能力（Ficoll離心；磁鐵）離心；磁鐵）v粘附貼壁法粘附貼壁法l單核細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)單核細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)l玻璃、塑料平皿玻璃、塑料平皿/ /培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)瓶、3737、1h1hl取

7、未貼壁細(xì)胞取未貼壁細(xì)胞-淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（T T、B B）l刮下貼壁細(xì)胞刮下貼壁細(xì)胞-純單核細(xì)胞純單核細(xì)胞l缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：B B細(xì)胞也有較弱貼壁，使細(xì)胞也有較弱貼壁，使B B細(xì)胞收率細(xì)胞收率v過(guò)柱吸附法過(guò)柱吸附法l層析過(guò)柱，單核細(xì)胞滯留于層析柱中層析過(guò)柱，單核細(xì)胞滯留于層析柱中l(wèi)洗脫洗脫-淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞l層析柱：玻璃纖維或葡聚糖凝膠層析柱：玻璃纖維或葡聚糖凝膠l粘附能力：粘附能力：?jiǎn)魏思?xì)胞單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞Percoll分層液法分層液法lPercoll分層液：經(jīng)聚乙烯分層液：經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮處理過(guò)的硅膠顆吡咯烷酮處理過(guò)的硅膠顆?；鞈乙?，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、粒混懸液，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、無(wú)刺激。無(wú)刺激。

8、lPercoll原液加原液加PBS稀釋，稀釋，高速離心（高速離心（21000g）連續(xù)）連續(xù)密度梯度。密度梯度。l將將PBMC加在分離加在分離液上低速離心后可液上低速離心后可分離分離PBMC中的單中的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群的分離淋巴細(xì)胞亞群的分離 E E花環(huán)分離法花環(huán)分離法尼龍棉柱分離法尼龍棉柱分離法補(bǔ)體細(xì)胞毒法補(bǔ)體細(xì)胞毒法親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法細(xì)胞分選術(shù)細(xì)胞分選術(shù)E花環(huán)分離法花環(huán)分離法T細(xì)胞細(xì)胞（CD2/LFA2/E受體）受體）綿羊紅細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞SRBCE花環(huán)花環(huán)比重增加比重增加Ficoll-Hypaque 分離液分離分離液分離低

9、滲低滲 尼龍棉柱分離法尼龍棉柱分離法尼龍棉裝入尼龍棉裝入5ml5ml注射器中注射器中加入淋巴細(xì)胞懸液加入淋巴細(xì)胞懸液37、 5 CO2、12hRPMI 1640RPMI 1640完全培養(yǎng)基灌洗完全培養(yǎng)基灌洗洗脫液中為洗脫液中為T T細(xì)胞細(xì)胞原理原理 B B細(xì)胞可粘細(xì)胞可粘 附尼龍毛；附尼龍毛； T T細(xì)胞不具細(xì)胞不具 有粘附活性。有粘附活性。方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：實(shí)驗(yàn)室常用分離方法之一實(shí)驗(yàn)室常用分離方法之一l簡(jiǎn)便、易行簡(jiǎn)便、易行l(wèi)獲得細(xì)胞純度較高獲得細(xì)胞純度較高T T細(xì)胞細(xì)胞9090B B細(xì)胞細(xì)胞8080尼龍毛柱法尼龍毛柱法E E花環(huán)法，花環(huán)法，T T細(xì)胞可達(dá)細(xì)胞可達(dá)9999以上以上 （三）補(bǔ)體

10、細(xì)胞毒法（三）補(bǔ)體細(xì)胞毒法l原理：免疫細(xì)胞表面的某種原理：免疫細(xì)胞表面的某種Ag與相應(yīng)與相應(yīng)Ab結(jié)合，加入結(jié)合，加入補(bǔ)體，借助補(bǔ)體，借助補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，破壞作用，破壞Ag陽(yáng)性的陽(yáng)性的細(xì)胞，收集細(xì)胞，收集Ag陰性的細(xì)胞。陰性的細(xì)胞。l如：在如：在LC懸液中加入抗人懸液中加入抗人Ig抗體去除抗體去除B細(xì)胞，得到細(xì)胞，得到T細(xì)胞。細(xì)胞。l如：在如：在T細(xì)胞懸液中加入抗細(xì)胞懸液中加入抗CD4抗體去除抗體去除CD4+ T細(xì)細(xì)胞，得到胞，得到CD8+T細(xì)胞。細(xì)胞。親和板分離法親和板分離法（五）免疫磁珠法（五）免疫磁珠法 原理：原理：l將抗體交聯(lián)于磁珠表面形成將抗體交聯(lián)于磁珠表面形成免

11、疫磁珠免疫磁珠 （Immunomagnetic bead，IMB）l加入細(xì)胞懸液，加入細(xì)胞懸液，IMB上的上的Ab與細(xì)胞表面的與細(xì)胞表面的Ag反應(yīng)，反應(yīng)，形成抗體形成抗體/抗原的復(fù)合物抗原的復(fù)合物。l外加磁場(chǎng)，分選出結(jié)合有免疫細(xì)胞的外加磁場(chǎng)，分選出結(jié)合有免疫細(xì)胞的IMB 。分法：分法：l直接法直接法l間接法間接法免疫磁珠法細(xì)胞分選過(guò)程免疫磁珠法細(xì)胞分選過(guò)程免免疫疫磁磁珠珠細(xì)細(xì)胞胞分分選選裝裝置置特點(diǎn)特點(diǎn):簡(jiǎn)便簡(jiǎn)便, 快速快速, 費(fèi)用低費(fèi)用低, 無(wú)需特殊設(shè)備無(wú)需特殊設(shè)備全自動(dòng)細(xì)胞分選儀全自動(dòng)細(xì)胞分選儀評(píng)價(jià)l高純度（高純度（9599）l高回收率（高回收率（9095）l高活性（高活性（99100）l

12、效果可與流式細(xì)胞儀媲美，效果可與流式細(xì)胞儀媲美，l但更經(jīng)濟(jì)、省時(shí)、簡(jiǎn)便、快速但更經(jīng)濟(jì)、省時(shí)、簡(jiǎn)便、快速（六）流式細(xì)胞儀分選技術(shù)（六）流式細(xì)胞儀分選技術(shù) 經(jīng)典方法：經(jīng)典方法：l離心離心l粘附法粘附法l補(bǔ)體細(xì)胞毒法補(bǔ)體細(xì)胞毒法l淘洗法淘洗法l免疫磁珠法免疫磁珠法 經(jīng)典分離方法的局限性經(jīng)典分離方法的局限性l 純度純度l 稀有細(xì)胞稀有細(xì)胞 ？l 高速高速l 高純度高純度l 高精度高精度l流式細(xì)胞儀（流式細(xì)胞儀（FCM）具有）具有高速、高速、 高純度、高精度高純度、高精度優(yōu)勢(shì)。優(yōu)勢(shì)。l激活細(xì)胞分類儀：用來(lái)分析、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀。激活細(xì)胞分類儀：用來(lái)分析、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀。lFluorescenc

13、e activated cell sorter （FACS）細(xì)胞分選細(xì)胞分選四、吞噬細(xì)胞的分離四、吞噬細(xì)胞的分離吞噬細(xì)胞種類吞噬細(xì)胞種類l大吞噬細(xì)胞：大吞噬細(xì)胞：?jiǎn)魏藛魏思?xì)胞、巨噬細(xì)胞細(xì)胞、巨噬細(xì)胞l小吞噬細(xì)胞：小吞噬細(xì)胞：中性中性粒細(xì)胞粒細(xì)胞l巨噬細(xì)胞：巨噬細(xì)胞：斑蝥敷貼法、斑蝥敷貼法、腹腔滲出分離法、腹腔滲出分離法、l中性粒細(xì)胞：右旋糖酐分中性粒細(xì)胞：右旋糖酐分離法、離法、FicollHypaque分層液分離法分層液分離法吞噬細(xì)胞分離法吞噬細(xì)胞分離法斑蟊敷貼法分離人巨噬細(xì)胞斑蟊敷貼法分離人巨噬細(xì)胞腹腔滲出法分離腹腔巨噬細(xì)胞腹腔滲出法分離腹腔巨噬細(xì)胞3 34 days4 days 3ml肝素

14、抗凝全血肝素抗凝全血1/4體積體積6右旋糖酐右旋糖酐生理鹽水，室溫靜置生理鹽水，室溫靜置3040min，取上層取上層白細(xì)胞，白細(xì)胞，0.8NH4Cl溶解紅細(xì)胞，離心，溶解紅細(xì)胞，離心，取細(xì)胞沉淀用取細(xì)胞沉淀用FicollHypaque分離液分離液分分離中性粒細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞。離中性粒細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞。右旋糖酐法分離中性粒細(xì)胞右旋糖酐法分離中性粒細(xì)胞外周血中性粒細(xì)胞分離外周血中性粒細(xì)胞分離(Ficoll-Hypaque)五、細(xì)胞活力檢測(cè)五、細(xì)胞活力檢測(cè)l細(xì)胞活力：指細(xì)胞存活的數(shù)量，一般用百分表細(xì)胞活力：指細(xì)胞存活的數(shù)量，一般用百分表示。示。l通?；盍?yīng)通?；盍?yīng)95%l方法：苔盼藍(lán)染色法方法：苔

15、盼藍(lán)染色法 活細(xì)胞：不著色活細(xì)胞：不著色 死細(xì)胞：著色死細(xì)胞：著色l白細(xì)胞的分離白細(xì)胞的分離 l外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 l淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的分離l淋巴細(xì)胞亞群分離淋巴細(xì)胞亞群分離 l吞噬細(xì)胞的分離吞噬細(xì)胞的分離小結(jié)：小結(jié)：免疫細(xì)胞的分離與純化免疫細(xì)胞的分離與純化第二節(jié) 淋巴細(xì)胞的數(shù)量檢測(cè)微量細(xì)胞毒試驗(yàn)微量細(xì)胞毒試驗(yàn)花環(huán)技術(shù)花環(huán)技術(shù)一、一、T細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)3. 微量細(xì)胞毒試驗(yàn)微量細(xì)胞毒試驗(yàn) 針對(duì)淋巴細(xì)胞針對(duì)淋巴細(xì)胞CD分子分子Ab與其相應(yīng)的與其相應(yīng)的CD分子結(jié)合，分子結(jié)合，借助補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用，可造成表達(dá)特定表面借助補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作

16、用，可造成表達(dá)特定表面Ag的細(xì)胞損傷，破壞膜的完整性，應(yīng)用伊紅染料滲入細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞損傷，破壞膜的完整性，應(yīng)用伊紅染料滲入細(xì)胞內(nèi)，使之著染紅色，而無(wú)相應(yīng)，使之著染紅色，而無(wú)相應(yīng)CD分子的細(xì)胞則不受損傷，因分子的細(xì)胞則不受損傷，因而不著色。計(jì)數(shù)著色細(xì)胞數(shù)而不著色。計(jì)數(shù)著色細(xì)胞數(shù),計(jì)算相應(yīng)細(xì)胞的計(jì)算相應(yīng)細(xì)胞的%。微量細(xì)胞毒試驗(yàn)微量細(xì)胞毒試驗(yàn)淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗抗CD分子單抗分子單抗補(bǔ)體補(bǔ)體伊紅染色伊紅染色細(xì)胞著色細(xì)胞著色l總花環(huán)形成率（總花環(huán)形成率（Et）： 4過(guò)夜，過(guò)夜，60%80l活性花環(huán)形成率（活性花環(huán)形成率（Ea）： 室溫低速短時(shí)離心，室溫低速短時(shí)離心，2040lE受體受體: CD2，表達(dá)于，

17、表達(dá)于T細(xì)細(xì) 胞、胸腺細(xì)胞、胞、胸腺細(xì)胞、NK細(xì)胞細(xì)胞T celllSPA-IgG（anti-CD）-CD分子分子-T細(xì)胞亞群細(xì)胞亞群SRBC-anti-CD-T細(xì)胞（細(xì)胞（CD分子）分子）(三三) 可溶性抗原肽可溶性抗原肽-MHC四聚體復(fù)合物法四聚體復(fù)合物法l是一項(xiàng)近年發(fā)展起是一項(xiàng)近年發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)來(lái)的新技術(shù)l與與FCM聯(lián)合聯(lián)合, 定量定量檢測(cè)抗原特異性檢測(cè)抗原特異性T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞1. mIg的檢測(cè)的檢測(cè): 酶免疫法、熒光免疫法酶免疫法、熒光免疫法2. CD抗原檢測(cè)抗原檢測(cè)l 酶免疫組織化學(xué)法酶免疫組織化學(xué)法l 間接熒光免疫法間接熒光免疫法l 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)3. 受體檢測(cè)（受體檢

18、測(cè)（FcR、CR）l EA花環(huán)花環(huán)l EAC花環(huán)花環(huán)l 小鼠紅細(xì)胞花環(huán)小鼠紅細(xì)胞花環(huán)二、二、B B細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)EA花環(huán)花環(huán)形成形成試驗(yàn)試驗(yàn)Fc受體受體B cellB cellB cellB cellEAC花環(huán)形成試驗(yàn)花環(huán)形成試驗(yàn)補(bǔ)體受體補(bǔ)體受體l小鼠紅細(xì)胞受體：小鼠紅細(xì)胞受體： 慢性慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞白血病 方法簡(jiǎn)單，鑒定類型方法簡(jiǎn)單，鑒定類型第三節(jié)第三節(jié) 淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)nT細(xì)胞功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)nB細(xì)胞功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)nNK細(xì)胞活性測(cè)定細(xì)胞活性測(cè)定一、一、T T細(xì)胞功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)n Produce cytokinesn Cytotoxic acti

19、on n Mediate DTHT T細(xì)胞功能檢測(cè)試驗(yàn)細(xì)胞功能檢測(cè)試驗(yàn)nT細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn)n CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)nT細(xì)胞分泌功能檢測(cè)細(xì)胞分泌功能檢測(cè)n檢測(cè)檢測(cè)T細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗(yàn)細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗(yàn)T T細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn)形態(tài)學(xué)法形態(tài)學(xué)法3H-TdR摻入法摻入法MTT比色法比色法CFSE標(biāo)記染色法標(biāo)記染色法形態(tài)學(xué)形態(tài)學(xué)法法 PBMCPBMCPHA/PHA/ConAConA5 5COCO2 2 、 3737培養(yǎng)培養(yǎng)7272h h細(xì)胞細(xì)胞涂片涂片染色染色顯微鏡顯微鏡檢查檢查未轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（）轉(zhuǎn)化率（）轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞

20、數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的淋巴細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)的淋巴細(xì)胞總數(shù)X100Sitmulated by mitogen or antigen48h3H-TdR Count CPM3H-TdR摻入法摻入法 CFSE的前體（的前體（CFDSE）可進(jìn)入細(xì)胞，）可進(jìn)入細(xì)胞，降解后形成降解后形成CFSE，在一定波長(zhǎng)的光激發(fā)下可，在一定波長(zhǎng)的光激發(fā)下可發(fā)出熒光。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，發(fā)出熒光。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，CFSE平均分配到平均分配到子細(xì)胞中，使熒光量減半，再采用流式細(xì)胞子細(xì)胞中，使熒光量減半，再采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞增殖活性。儀分析細(xì)胞增殖活性。CFSE標(biāo)記染色法標(biāo)記染色法T cell proliferation analy

21、zed by CFSE labelingT細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制l 通過(guò)顆粒酶和穿孔素殺傷靶細(xì)胞通過(guò)顆粒酶和穿孔素殺傷靶細(xì)胞l 通過(guò)通過(guò)FasFasL介導(dǎo)細(xì)胞凋亡介導(dǎo)細(xì)胞凋亡CTL介導(dǎo)細(xì)胞毒作用的檢測(cè)方法介導(dǎo)細(xì)胞毒作用的檢測(cè)方法l 形態(tài)學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查法l51Cr釋放法釋放法l 細(xì)胞凋亡檢測(cè)法細(xì)胞凋亡檢測(cè)法 （1）形態(tài)學(xué)檢測(cè)法）形態(tài)學(xué)檢測(cè)法 （2）DNA Ladder （3）ELISA （4）Flow cytomeryCytotoxicity Assays (51Cr release) B細(xì)胞增殖試驗(yàn)細(xì)胞增殖試驗(yàn) 溶血空斑試驗(yàn)溶血空斑試

22、驗(yàn) ELISPOT檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞 抗體的檢測(cè)抗體的檢測(cè)B細(xì)胞功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)Direct assay for IgM-secreting plasma cells (primary response)Indirect assay for IgG-secreting plasma cells (secondary response)ELISPOT檢測(cè)抗體形成細(xì)胞檢測(cè)抗體形成細(xì)胞第四節(jié)第四節(jié) 吞噬細(xì)胞功能測(cè)定吞噬細(xì)胞功能測(cè)定中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞趨化功能檢測(cè)趨化功能檢測(cè)吞噬和殺菌功能測(cè)定吞噬和殺菌功能測(cè)定中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)中性粒細(xì)胞趨化功能檢測(cè)中性粒細(xì)胞趨化功能檢測(cè)瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法中性粒細(xì)胞趨化功能檢測(cè)中性粒細(xì)胞趨