艾滋病初篩中心實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)(共32頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上艾滋病篩查實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP） 編號：LZFBYHIV實驗室名稱：萊州市婦幼保健院艾滋病篩查實驗室 實驗室編碼：NO 355實施日期： 2014年3月20日前言：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2004的要求，由萊州市艾滋病篩查實驗室全體人員參與編寫。主要起草人：姜子明 王永彬，審核人：綦洪敏。根據(jù)全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2004的要求，實驗室編寫了相關(guān)的SOP文件，以適應(yīng)HIV抗體檢測的相關(guān)需要。為全社會的艾滋病檢測工作提供科學(xué)的、準(zhǔn)確的檢測服務(wù)。一些相關(guān)的制度及規(guī)范，可以為實驗提供準(zhǔn)確的結(jié)果并為實驗人員及環(huán)境提供良好的保護作用。本標(biāo)準(zhǔn)操作程

2、序（SOP）覆蓋了實驗室全部工作內(nèi)容，主要包含以下內(nèi)容：一、 樣品的采集、運輸、接收、登記、保存、處理（編號：LZFBYHIV-01）二、 檢測方法和步驟（編號：LZFBYHIV-02）三、 儀器的使用、維護、校準(zhǔn)（編號：LZFBYHIV-03）四、 實驗中的質(zhì)量控制（編號：LZFBYHIV-04）五、 結(jié)果解釋與報告（編號：LZFBYHIV-05）六、 保密程序（編號：LZFBYHIV-06）七、 檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存（編號：LZFBYHIV-07）八、 追蹤與處理（編號：LZFBYHIV-08）九、 實驗室的清理與消毒（編號：LZFBYHIV-09）十、 實驗室的安全防護（編號：LZFBY

3、HIV-10）本標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）至編寫完成并審核通過之日起開始實施，每年由實驗室主管負責(zé)組織崗位人員進行修訂。所有崗位人員要在所從事工作的SOP文件上簽名并認(rèn)真閱讀掌握相關(guān)內(nèi)容。 審核人（簽字）：_ 審核日期 年 月 日 目錄一、 樣品的采集、運輸、接收、登記、保存、處理41 樣品接收、登記、運輸及處理辦法42 樣品采集5二、 檢測方法和驟1 檢測程序2艾滋病抗體初篩檢測常用的方法83萬泰試劑檢測方法和步驟9三、 儀器的使用、維護、校準(zhǔn)101儀器使用制度102 儀器設(shè)備的管理、使用、維修、報廢制度113儀器的使用、維護及校準(zhǔn)方法與記錄表樣124 儀器檔案14四、 實驗中的質(zhì)量控制151

4、質(zhì)控血清的制備和保存 152 質(zhì)控圖的建立與應(yīng)用 16五、 結(jié)果解釋與報告 191 HIV抗體篩查報告 192 HIV抗體陽性送檢單 193自愿咨詢檢測報告單19六、 保密程序20七、 檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存211 原始記錄212 結(jié)果登記表樣213 數(shù)據(jù)記錄的保存21八、 追蹤與處理22九、 實驗室的清理與消毒231 HIV實驗室消毒方法232 HIV實驗室消毒規(guī)范233 HIV實驗室廢棄物處理規(guī)范244 HIV實驗室廢棄物處理登記表樣25十、 實驗室的安全防護 261 實驗室安全制度 262 實驗室分區(qū) 273 實驗人員安全防護 274 標(biāo)本的安全防護 29十一、樣品編碼的操作程序30SOP

5、文件一、樣品的接收、登記、處理編號：LZFBYHIV-01編寫姜子明 王永彬編寫日期2014-03-10審核綦洪敏修訂日期2014-03-20目的掌握樣品接收、運送及處理的正確方法應(yīng)用范圍樣品接收、運送及處理1. 樣品接收、運送及處理辦法1.1 樣品接收1.1.1由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護衣的實驗人員在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)接收。裝標(biāo)本的包裹或容器須消毒。1.1.2 核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損或溢漏。若發(fā)現(xiàn)有破損或溢漏的應(yīng)立即將尚存的標(biāo)本移入新管中，對破損或溢漏的樣品管進行消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)。1.1.3檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。如果污

6、染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人。1.1.4打開標(biāo)本容器時要小心，以防內(nèi)容物潑濺。樣品處理時若內(nèi)容物有可能濺出，則應(yīng)在生物安全柜中戴手套進行。同時應(yīng)戴口罩、防護眼鏡，以防皮膚或粘膜污染。1.1.5接收樣品時應(yīng)填寫樣品接收單。樣品接收登記表樣（見附件1）1.2 樣品運送1.2.1實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。1.2.2應(yīng)采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)  第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰

7、碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。  第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標(biāo)簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。1.2.3血清和血漿樣品應(yīng)在2-8條件下由專人運送。1.2.4運送感染性材料必須有記錄。1.2.5如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血-20以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。1.2.6特殊情況下如需對個別樣品進行復(fù)測，可以用特快專遞形式投寄，但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好，避免使用玻

8、璃容器，以保證不會破碎和溢漏。1.3 處理:血清、血漿標(biāo)本在檢測前或運送前需離心(3000轉(zhuǎn)/min 15min)、滅活（56 30min）。保存期限已過的標(biāo)本，需經(jīng)過焚燒處理并有處理記錄。1.3.1 保存 1.3.1.1用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20以下，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可存放于2-8。1.3.2 廢棄處理標(biāo)本一般保存1年以上，過期后進行處理。采用焚燒法，有處理記錄。2. 樣品的采集艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用的血液樣品的采集和處理方法如下：.1.1 血清樣品采集和處理.1.1.1 用一次性注射器（或真空采

9、血管）抽取足量靜脈血，室溫下自然放置12h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。.1.1.2 如用濾紙片采樣，則手指或耳垂局部嚴(yán)格按常規(guī)進行消毒，在刺破皮膚后，迅速把濾紙片沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后要待血樣干燥后再包裝送檢。.1.2 抗凝血樣品采集和處理.1.2.1 用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細胞備用。.1.2.2 應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+/CD8+T淋巴細胞測定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用K3

10、EDTA或枸櫞酸鈉。.1.2.3 用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在48h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在2448h內(nèi)分離血漿和血細胞。.1.3 采集樣品注意事項.1.3.1 采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作（試劑盒說明書有特殊要求除外）。.1.3.1 采集樣品時應(yīng)注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液；直接接觸HIV感染者/艾滋?。ˋIDS）病人血液/體液的操作,應(yīng)戴雙層手套。SOP文件二、檢測方法和步驟編號：LZFBYHIV-02編寫姜子明 王永彬編寫日期2014-03-10審核綦洪敏修訂日期2014-03-20目的熟練掌握HIV檢測方法、步驟應(yīng)用范圍HIV抗體

11、檢測1.檢測程序樣品 化學(xué)發(fā)光 ELISA 陽性 陰性 PA復(fù)檢或兩種方法復(fù)檢兩種均陰性兩種均陽性一陰一陽送確認(rèn)實驗室出篩查報告提供陰性咨詢2.艾滋病抗體初篩檢測常用的方法HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗。篩查試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、由臨檢中心批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。篩查方法：（一） 常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）：目前國內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑?；瘜W(xué)發(fā)光法，使用與機器配套意大利索靈試劑。我實驗室使用第三代ELISA試劑，目前主要使用萬泰試劑（國家下?lián)埽＃ǘ┛焖贆z測（RT）及其它檢測：1、明膠顆粒凝集試驗（PA）；

12、2、斑點EIA或稱斑點ELISA（dotEIA）；3、斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗；4、艾滋病唾液檢測卡；5、其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測、尿液檢測等。 我實驗室主要有PA試劑。3. 萬泰試劑檢測方法和步驟 方法：酶聯(lián)免疫（ELISA）步驟: 1.樣品、試劑、酶標(biāo)板條室溫平衡30 分鐘。2.配制洗滌液，取濃縮洗滌液50ml，加去離子水1000ml（稀釋）備用。3.取板條，放在板架上，撕去板條上的封條。4.在確定的板孔中加入100µl的標(biāo)本或陰陽性對照，震蕩混勻。設(shè)1個空白對照，3個陰性對照，1個HIV-陽性對照1個HIV-陽性對照，并填寫加樣順序表。5.在微板上蓋上貼膜

13、（洗板前撕去貼膜），37孵育60±2分鐘。 6.用洗板機洗板，每孔5次（程序已編好）。最后拍干。7.在每孔中加入100µl酶標(biāo)試劑，空白孔除外 ,37孵育30±2分鐘。8.用洗板機洗板，每孔5次（程序已編好）。最后拍干。9.每孔加入顯色劑A、B各50µl，輕輕振蕩混勻 。10.封板膜封板后37閉光顯色30±1分鐘。11.每孔加入50µl終止液，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)，10分鐘內(nèi)比色12.在450nm波長讀取每孔的吸光度，并打印結(jié)果。分析：符合以下條件的實驗成立：陰性對照平均值0.10 陽性對照平均值0.80結(jié)果分析：結(jié)果臨界值=陰性對

14、照平均OD值+0.12SOP文件共3頁三崗位人員簽字編寫劉琪琛儀器的使用、維護、校準(zhǔn)編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-03修訂日期2007-1-5目的對儀器的正確管理適用范圍HIV抗體檢測的所有儀器設(shè)備1. 儀器使用制度 儀器設(shè)備是實驗室檢測工作的物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)條件，是國有資產(chǎn)的組成部分，是重要的衛(wèi)生資源。儀器貼有紅、黃、綠三色標(biāo)識，有唯一編號。(1)、用儀器前必須熟讀使用說明書或?qū)嶒炛笇?dǎo)，熟練掌握儀器性能和使用方法，并在儀器負責(zé)人或教師的同意和指導(dǎo)下，才能開啟儀器。(2)、儀器使用過程中必須嚴(yán)格遵守儀器的具體操作程序，不得擅自做與實驗無關(guān)的內(nèi)容。操作前要熟知使用注意事

15、項。使用后，操作人應(yīng)認(rèn)真檢查儀器狀態(tài)，擦凈儀器，斷電后方可離去，如有損壞要及時上報，檢修。(3)、對儀器要經(jīng)常性的保養(yǎng)，定期檢查，認(rèn)真填寫實驗記錄及儀器使用記錄。(4)、實驗儀器不準(zhǔn)隨便亂動，否則造成儀器設(shè)備損壞者，要追究其責(zé)任，認(rèn)真處理。1.1安圖2010型酶標(biāo)儀操作程序1.1.1檢測讀數(shù)前接通電源，打開電腦、打印機、酶標(biāo)儀。1.1.2打開酶標(biāo)儀工作站，輸入密碼，選定檢測項目（若需重新設(shè)定檢測條件，要由儀器管理員設(shè)定）。1.1.3放入待測酶標(biāo)板，開始檢測（酶標(biāo)板放置要正確）。1.1.4保存、打印檢測數(shù)據(jù)。1.1.5檢測完畢后，關(guān)機，切掉電源。用75%的乙醇對儀器表面擦拭消毒。1.2安圖201

16、0型洗板機操作程序1.2.1洗板前接通電源。1.2.2開機，選擇清洗程序及所需通道，用50mL洗液灌洗管路。1.2.3灌洗完畢后，選擇洗板程序（提前由管理員設(shè)置完成）洗板。1.2.4整個實驗洗板完畢后，選擇清洗程序選蒸餾水清洗，用50mL蒸餾水清洗管路。1.2.5清洗完后，關(guān)機。切掉電源。用75%的乙醇對儀器表面擦拭消毒。1.3水浴鍋操作程序1.3.1 開機準(zhǔn)備1.3.2 使用前檢查水浴鍋中是否有水，水浴鍋加水應(yīng)高于隔板，鍋內(nèi)放入被處理樣品不至于水溢出鍋體。1.3.3 接通電源，打開水浴鍋體開關(guān)，把控溫設(shè)定數(shù)碼調(diào)至所需要的溫度上（37）。1.3.4使用1.3.5用溫度計測定鍋內(nèi)溫度（與電子顯示

17、比較），當(dāng)溫度上升到設(shè)定的溫度值時開始計時，進行恒溫水浴加熱。1.3.6使用完畢，應(yīng)及時關(guān)閉鍋體開關(guān)，斷開電源。1.3.7注意及維護：1.3.7.1必須安裝地線。1.3.7.2禁止無水或水低于鍋內(nèi)隔板時加熱。1.3.7.3長期不使用最好把鍋內(nèi)水放掉，擦凈。1.3.7.4水浴鍋內(nèi)不得有雜物，保持鍋體內(nèi)外潔凈。1.3.7.5每周兩次更換鍋內(nèi)水，以保持水的潔凈。2.儀器設(shè)備的管理、使用、維修、報廢制度2.1計劃添置必要的儀器設(shè)備，按規(guī)定手續(xù)驗收、登記，并經(jīng)計量部門檢定發(fā)證后才能使用，并建立儀器臺帳。2.2使用大型儀器設(shè)備的檢定人員必須熟悉使用儀器的使用保養(yǎng)方法，并持有操作合格證； 2.3使用儀器時先

18、檢查儀器是否完好正常，按操作規(guī)程使用后進行登記，并注意做好儀器的清潔、保養(yǎng)工作； 2.4每臺精密儀器必須按規(guī)定定期檢查，檢驗合格后才能繼續(xù)使用； 2.5儀器不得“帶病”工作，發(fā)現(xiàn)故障應(yīng)及時報告以便組織維修； 2.6精密儀器建專人保管使用制度，外來人員未經(jīng)批準(zhǔn)和考核不得單獨操作使用； 2.7儀器確已損壞，無法修復(fù)時，邀請有關(guān)專家報廢鑒定，填寫儀器報廢單，經(jīng)主任批準(zhǔn)后，按資產(chǎn)管理權(quán)限上報。2.8.儀器管理人員職責(zé)2.8.1 儀器管理人員應(yīng)熟悉儀器、設(shè)備的使用方法及特性，做好儀器設(shè)備的管理。 2.8.2愛護儀器設(shè)備，正確使用，做好經(jīng)常性的維護保養(yǎng)工作。 2.8.3定期對儀器進行檢測，發(fā)現(xiàn)故

19、障及時安排維修，提高設(shè)備完好率。 2.8.4嚴(yán)格遵守各項規(guī)章制度和工作流程，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作儀器。 2.8.5努力學(xué)習(xí)業(yè)務(wù)知識，提高技術(shù)水平。 2.8.6對新來實驗室的人員進行如何正確使用儀器的指導(dǎo)。 2.8.7保持實驗室的整齊清潔、防火、防盜，保證儀器設(shè)備正常運轉(zhuǎn)。 2.8.8保持實驗室的清潔衛(wèi)生，實驗室內(nèi)不得任意堆放雜物，廢物要及時清除，臨時有用的物品要堆放整齊。3. 儀器的使用、維護及校準(zhǔn)方法與記錄表樣(附件2)。詳見記錄。3.1 ELISA 洗板機與酶標(biāo)儀維護、校準(zhǔn)每天：每次操作要按要求設(shè)立對照。核對酶標(biāo)儀濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護

20、光學(xué)零件，不沾灰塵。 每月：洗滌時檢查各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提。每年：檢查、清洗濾光片，如果濾光片出現(xiàn)破裂或霉點則要更換，根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的所用波長光密度的精密度進行校驗， 測定20次，計算精密度。精密度應(yīng)該控制在廠家說明書中所規(guī)定的范圍 ( 建議請廠方代表校驗 )。校驗結(jié)果要有記錄，保留測定原始結(jié)果。 根據(jù)實際使用情況更換主要設(shè)備（如洗板機、全自動免疫分析系統(tǒng)）內(nèi)的所有液體裝置和管子(要求廠方代表維修 )3.2 移液器 ( 包括單頭和多頭移液器 ) 維護、校準(zhǔn)移液器是實驗室中重要的基本器具，一年至少應(yīng)該

21、標(biāo)定或校準(zhǔn)一次，若發(fā)現(xiàn)移液器有異常情況，應(yīng)該立即進行標(biāo)定。移液器標(biāo)定方法包括吸取有色溶液進行光譜分析、吸取蒸餾水稱量校準(zhǔn)、吸取放射性同位素計數(shù)校準(zhǔn)，以及使用配套校準(zhǔn)盒等等。特別要注意使用多頭移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)和準(zhǔn)確的加樣。移液器的精密度可根據(jù)生產(chǎn)移液器廠家說明書中所規(guī)定的范圍進行校準(zhǔn)。推薦在檢測過程中，每個加樣工序使用專用的移液器。 用蒸餾水稱量標(biāo)定移液器方法(參考芬蘭Labsystems移液器標(biāo)定方案) 在一室溫為22 的小型工作室(無風(fēng))中，在萬分之一級別天平上放置一個小三角燒瓶，用待標(biāo)定的移液器吸取蒸餾水( 隔夜存放 )加入小三角燒瓶內(nèi)底部，每次稱重后計量，去皮重后

22、再加蒸餾水，連續(xù)加蒸餾水10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標(biāo)定的移液器不同規(guī)格而不同，見下表。移液器標(biāo)定合格后，在移液器上貼上合格標(biāo)簽，標(biāo)明日期。在移液器標(biāo)定記錄中填寫移液器規(guī)格、編碼、10次標(biāo)定稱量、標(biāo)定日期和標(biāo)定人簽名。移液器10次標(biāo)定稱量在所要求的重量范圍內(nèi)為合格移液器；不合格移液器要根據(jù)移液器生產(chǎn)廠家所推薦的方法進行校準(zhǔn)。 稱重法校準(zhǔn)移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量要求重量范圍0.510l2l1.75 2.25 mg540l10l9.8 10.2 mg40200l70l69.4 70.6 mg2001000l300l298.0 302.0 mg15ml2000l1990.0 2010.0 mg21

23、0ml3500l3485.0 3515.0 mg4. 儀器檔案 儀器檔案包括 前期資料（儀器設(shè)備購置申請表、技術(shù)調(diào)研論證報告、招投標(biāo)文件、訂貨合同、驗收記錄、裝箱單、儀器使用說明書、操作手冊等）；使用資料（儀器操作作業(yè)指導(dǎo)書、歷年的使用記錄、歷年的檢定證書、歷年維護維修、故障、改裝記錄、期間核查記錄等）.SOP文件共4頁四崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗中的質(zhì)量控制編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-04修訂日期2007-1-5目的保證實驗正確性適用范圍HIV抗體檢測質(zhì)量控制1. 質(zhì)控血清的制備和保存1.1在每次實驗中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。 &

24、#160;  內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實驗室設(shè)置的一套對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)置一個弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2-3倍為宜。1.2外部對照質(zhì)控血清的制備 HIV抗體陽性和陰性血清，56 30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制（可加入不

25、影響檢測結(jié)果的防腐劑）用0.2m濾膜過濾除菌。1.3外部對照質(zhì)控血清的保存 按一周實驗用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20凍存于非自動除霜冰箱中。外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放2-8，供一周內(nèi)使用。1.4外部對照質(zhì)控血清的使用 每一次實驗必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。1.5外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求 質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv20%），并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐劑。2. 質(zhì)控圖的建立與應(yīng)用 最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jen

26、nings質(zhì)控圖，使用累計和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。2.1建立質(zhì)控圖參數(shù)2.1.1外部對照質(zhì)控物的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控物測定結(jié)果，以建立一個臨時性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。2.1.2算術(shù)平均值 ( )： 代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計算出平均值。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)差(s)：是描述樣品與

27、均數(shù)之間離散程度的一個指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。2.1.4變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。2.1.5控制限：由實驗室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個標(biāo)準(zhǔn)差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個標(biāo)準(zhǔn)差。2.2繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計算出的）“控制限”進行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并按時間順序點入本實驗室每次試驗質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪

28、制步驟：2.2.1在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)(x )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2.2.2將均值(x )和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次(天)試驗作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。2.2.3從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進入質(zhì)控狀態(tài)。2.3質(zhì)控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。2.3.1告警（12S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出

29、 +2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。2.3.2失控（13S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出 +3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。2.3.3位移：連續(xù)幾次（3?5次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。2.3.4趨勢：連續(xù)幾次（5?7次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。    質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差

30、，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率。考察試驗系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。2.4質(zhì)控圖的分析及失控處理    實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值

31、和標(biāo)準(zhǔn)差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時進行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。2.4.1繪制和分析質(zhì)控圖的要點2.4.2要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個數(shù)據(jù)，求均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s), 超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2.4.3由專人負責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。2.4.4建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新

32、批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。 2.4.5發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報告單，上交質(zhì)量負責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。2.4.6使用新批次的外部對照質(zhì)控物時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20，表示外部對照處于穩(wěn)定狀態(tài)。SOP文件共1頁五崗位人員簽字編寫劉琪琛結(jié)果解釋與報告編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-05修訂日期2007-1-5目的正確合理的方式給予結(jié)果適用范圍HIV抗體檢測初篩檢測結(jié)果為陰性者，出篩查報告。檢測結(jié)果為陽性者，需用同種試劑及另一種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)檢。若兩種試劑均為陽性或一陰一陽，則填寫陽性送檢單，送省級確

33、證實驗室確證；若兩種試劑均為陰性則報告陰性結(jié)果，出篩查報告?？?HIV陽性：極大可能為HIV感染，也可能屬于非特異反應(yīng)抗-HIV弱陽性：存在真陽性和假陽性兩種可能抗-HIV陰性：極大可能無HIV感染，不排除陽性的可能（存在感染因素下檢測時機不合適）通常的抗-HIV檢測結(jié)果的處理結(jié)果 試劑1 試劑2 處理意見A 再次采樣，做確證實驗B ± ±或 再次采樣，做確證實驗C ± 報告抗-HIV陰性D 不必復(fù)檢 報告抗-HIV陰性 1. HIV抗體篩查報告（附件3）2. HIV抗體陽性送檢單（附件4）3.自愿咨詢檢測報告單（附件5）SOP文件共1頁六崗位人員簽字編寫劉琪琛保

34、密程序編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-06修訂日期2007-1-5目的對受檢者以承諾有保密措施適用范圍HIV抗體檢測艾滋病抗體檢測人員及相關(guān)人員要時刻警記對實驗結(jié)果進行保密。實驗室人員對檢測情況及結(jié)果有保密的義務(wù)，未經(jīng)許可不得外傳，以免對被檢者及社會造成不必要的影響。若發(fā)生泄密事件造成不良后果者，根據(jù)情況嚴(yán)重程度追究其責(zé)任。實驗室一切記錄及檔案均由專人保管，不得外借，要對其加鎖加密。若由于失職造成泄密者，追究其責(zé)任。實驗室負責(zé)人要時刻提醒實驗室人員注意言行并宣貫保密制度，使實驗人員提高警惕。檢測-知情同意的原則結(jié)果- * 初篩陽性或可疑陽性的，初實驗人員外，不可傳告其

35、他人員 * 確證陽性的，以嚴(yán)格保密的原則報衛(wèi)生行政部門、用適當(dāng)方式通知本人 經(jīng)本人同意的情況下可告知其配偶 * 確證可疑陽性的，只通過咨詢告知本人或經(jīng)本人同意告知指定的家屬SOP文件共1頁七崗位人員簽字編寫劉琪琛檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-07修訂日期2007-1-5目的溯源性適用范圍HIV抗體檢測1. 檢測數(shù)據(jù)的原始記錄 原始記錄要求格式的規(guī)范化、記錄的原始性和完整性，數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)處理的正確性及溯源性。、使用統(tǒng)一規(guī)格的原始記錄本（紙）和報告用紙； 、原始記錄要由實驗人員親自填寫，使用鋼筆，字跡要清楚，使用名詞、術(shù)語要簡明、真實。數(shù)據(jù)要更改時，應(yīng)

36、將錯寫數(shù)據(jù)劃掉并在其上方改寫正確數(shù)據(jù)并簽字或蓋章； 、工作完畢，必須及時進行數(shù)據(jù)處理，計算結(jié)果，發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)有疑，要立即檢查原因，不能刪除或篡改與預(yù)期結(jié)果不符的數(shù)據(jù)； 、研究任務(wù)完成后，原始記錄應(yīng)整理清楚后歸檔，并嚴(yán)格做好保密工作； 、實驗人員對實驗情況及結(jié)果有保密的義務(wù)，未經(jīng)許可不得外傳（附件6、7、8）詳見各實驗原始記錄。2. 結(jié)果登記表樣（附件9）。詳見登記表記錄。3. 數(shù)據(jù)記錄的保存 原始記錄包括實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、膜反應(yīng)條帶或其照片、檢測記錄表、標(biāo)本登記記錄、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等重要記錄都應(yīng)該妥善存檔保存15年以上。推薦同時使用計算機保存各種文件和記錄。內(nèi)含病人

37、姓名的所有工作記錄一定要保密，參見規(guī)范。SOP文件共1頁八崗位人員簽字編寫劉琪琛追蹤與處理編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-08修訂日期2007-1-5目的對窗口期內(nèi)受檢者追蹤服務(wù)適用范圍VCT及其他人群HIV抗體檢測窗口期：廣義的講，從病原體侵入機體到用現(xiàn)行的實驗室手段可以證明受到感染的期限稱為窗口期。狹義的講，HIV感染后至抗體檢出前的一段時間稱為窗口期。從一個人感染上HIV到相應(yīng)抗體產(chǎn)生需13個月，平均約45天，這段時期稱為“窗口期”。針對這類人群的檢測需要作好咨詢工作，了解其高危行為及行為接觸時間，判斷其窗口期并對其采取評估，進行追蹤檢測。VCT作為艾滋病預(yù)防、

38、治療、關(guān)懷和預(yù)防母嬰傳播等工作的切入點和樞紐，報務(wù)內(nèi)容包括檢測前咨詢、HIV抗體檢測、檢測后咨詢、支持性咨詢以及相關(guān)治療、關(guān)懷等轉(zhuǎn)介服務(wù)。SOP文件共2頁九崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗室的清理與消毒編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHIV-09修訂日期2007-1-5目的人員、環(huán)境、標(biāo)本的保護適用范圍HIV抗體檢測1.HIV常用的消毒方法1.1物理消毒方法高壓蒸汽消毒，121，保持1520min; 干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140，保持23h。1.2HIV常用的化學(xué)消毒方法HIV最常用的化學(xué)消毒劑是含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊

39、二醛，保持1030 min。廢棄物缸：5000mg/L 次氯酸鈉。生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。污染的臺面和器具：2000mg/L 次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。2. HIV實驗室消毒規(guī)范 根據(jù)實驗室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）的要求,制定HIV實驗室消毒規(guī)范.實驗結(jié)束后，實驗人員要對實驗室進行消毒處理。 工作臺面消毒：用2000mg/L 次氯酸鈉或稀釋后的84消毒液或其它含氯消毒液擦拭。 地面、墻面消毒：用2000mg/L 次氯酸鈉或稀釋后的84消毒液或其它含氯消毒液

40、擦拭。 儀器設(shè)備表面消毒：用75%的乙醇擦拭消毒。 二級生物安全柜消毒：用福爾馬林熏蒸法消毒或75%的乙醇擦拭消毒。 廢棄物消毒：用高壓蒸汽滅菌器消毒。 然后焚燒。實驗室環(huán)境消毒：紫外線消毒。室內(nèi)消毒及事故處理n 實驗結(jié)束后,要對工作臺面消毒,如用消毒液清洗后要干燥20分鐘以上；操作時有標(biāo)本、檢測試劑外濺時應(yīng)及時消毒， 平時要保持環(huán)境整潔n 遇到意外事故，應(yīng)立即處理并分別以口頭和書面報告上級部門如工作人員皮膚被刺傷，可以用流動水局部清洗或用刺激性較輕的含氯創(chuàng)傷消毒劑浸泡皮膚創(chuàng)口；樣品或檢測試劑濺入眼內(nèi)立即用生理鹽水沖洗，濺入嘴內(nèi)，先吐出殘留的液體后，用水反復(fù)漱口n 遇有高危的意外事故發(fā)生，除進

41、行局部處理外，同時應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對其隨訪、 HIV檢測休息并暫離開原崗位3個月,按醫(yī)囑服用抗HIV藥物進行預(yù)防.3. 實驗室廢棄物處理規(guī)范廢棄物處置應(yīng)符合實驗室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）。從艾滋病實驗室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，并在高壓消毒后再進行處理（焚燒）或廢棄。廢棄物品消毒處理n 血液標(biāo)本置于合適容器內(nèi),加蓋蓋緊后運送,切勿污染盛器外部.如果盛器被污染,要用消毒液消毒.也可將血樣置于有蓋的塑料管內(nèi),外面套上塑料袋,封口,連同送檢單一并

42、運送,有血液外溢時,立即用消毒液消毒.n 各種試劑和化學(xué)品均應(yīng)貼有標(biāo)簽,放置于合適的位置.任何測試用的樣品和試劑不宜置于桌面或架子的邊沿,以防滑落打破,污染環(huán)境.一旦污染,先在污染區(qū)外周圍倒入消毒液,逐漸向中心消毒處理.n 實驗室所有垃圾,包括用過的一次性手套和工作衣,置于專門污物袋內(nèi),經(jīng)高壓消毒滅菌后由專人統(tǒng)一安全處理,污染的非一次性工作衣應(yīng)先消毒后再洗滌.n 所有用過的實驗用品,尤其是血樣管和血液標(biāo)本先在實驗室內(nèi)消毒,再移出清洗,待消毒后再用.n 所有尖銳物品應(yīng)置于不宜刺破的容器內(nèi),消毒后用合適的方式處理.n 常用的消毒劑和消毒方法與病毒性肝炎消毒法相同.3.1實驗室必須按照國家公布的環(huán)境

43、保護法規(guī)，處理好“三廢”（廢水、廢氣、廢渣），不得隨意亂倒、亂放、亂排； 3.2檢驗分析中廢液，只含一般酸、堿，要稀釋到符合標(biāo)準(zhǔn)后排放，含有劇毒藥品的集中倒入廢液缸內(nèi)，經(jīng)化學(xué)處理后深埋或派放； 3.3 用于生物樣品檢測的固態(tài)廢物需經(jīng)高壓蒸汽滅菌器消毒。 然后焚燒。液態(tài)廢物倒入廢液缸內(nèi)加入適量的消毒液進行消毒后再處理。3.4不遵守制度造成污染，要批評教育，造成人身危害的要追究責(zé)任事故至刑事責(zé)任。3.5廢棄物處理要有登記。詳見記錄。4. 實驗室廢棄物處理登記表樣（附件10）。詳見登記記錄。SOP文件共2頁十崗位人員簽字編寫劉琪琛實驗室的安全防護編寫日期2007-1-4修訂史建中編號：LZFBYHI

44、V-10修訂日期2007-1-5目的人員、環(huán)境、標(biāo)本的保護及安全作業(yè)適用范圍HIV抗體檢測1. 實驗室安全制度1.1 實驗室由專人負責(zé)實驗室設(shè)備及人身的安全。1.2 加強四防（防火、防盜、防水、防事故）。1.3 來實驗室工作的人員，必須有實驗室工作人員在場或經(jīng)過上機操作培訓(xùn)與考核。1.4 實驗前要全面檢查安全，實驗要有安全措施。若儀器設(shè)備在運行中，實驗人員不得離開現(xiàn)場。1.5 易燃、易爆物品必須存放在安全處，嚴(yán)禁帶電作業(yè)。1.6 如遇火警，除應(yīng)立即采取必要的消防措施滅火外，應(yīng)馬上報警（火警電話為119），并及時向上級報告?；鹁獬笠⒁獗Ｗo現(xiàn)場。1.7 如有盜竊和事故發(fā)生，立即采取措施，及時處理，