血小板源性生長因子受體α在胃腸道間質(zhì)瘤表達的意義

1、血小板源性生長因子受體-在胃腸道間質(zhì)瘤表達的意義 作者：陳林鶯， 林華， 陳余鵬， 張聲 【摘要】 目的 探討血小板源性生長因子受體（PDGFR-）在胃腸道間質(zhì)瘤中表達的意義。 方法 運用EnVision免疫組織化學染色檢測CD117和PDGFR-蛋白在94例胃腸道間質(zhì)瘤中的表達。 結(jié)果 PDGFR-的表達與胃腸道間質(zhì)瘤發(fā)生的部位和組織學類型明顯相關(guān)。26例呈中度以上的陽性染色，其中發(fā)生于胃24例，腸道1例，胃腸道外1例（P0.01)。上皮細胞型和混合細胞型胃腸道間質(zhì)瘤多呈中度以上彌漫性細胞膜或核旁點狀陽性，梭形細胞型表達較弱，多呈局灶性（P0.01)。PDGFR-的表達與CD117的表達有關(guān)

2、，24例CD117陰性或弱陽性病例中，13例（54.2%）PDGFR-呈中度以上陽性；70例CD117中度以上陽性病例中，57例（81.4%）PDGFR-呈陰性或弱陽性（P0.05）。 結(jié)論 PDGFR-的表達與胃腸道間質(zhì)瘤的發(fā)生部位、組織學類型和C-kit基因的表達有關(guān)，可能也是本病的重要發(fā)病機制之一。 【關(guān)鍵詞】 受體，血小板源性生長因子； 原癌基因蛋白質(zhì)c-kit； 胃腸道間質(zhì)腫瘤1 / 20 ABSTRACT: Objective To explore the significance of platelet-derived growth factor receptor-(PDGFR-

3、) expression in gastrointestinal stromal tumors（GIST）. Methods The expression of PDGFR- and CD117 was detected by immunohistochemistry in 94 cases of GIST. Results The expression of PDGFR- was relation to the location and histopathology of GIST. Of 26 cases with the moderate and strong positive, 24

4、cases were located in the stomach， 1 case in the small bowel， and the other in the extragastrointestinal(P<0.01). The expression of PDGFR- in epithelioid cell type or epithelioid-spindle mixed cell type was exhibited moderate and strong positive staining which show membrance or a perinuclear

5、dot-like pattern. Whereas the expression in the spindle cell type was weak or negative(P<0.01). The expression of PDGFR- correlated to the expression of CD117. In 24 cases with the weak or negative expression of CD117, 13 cases show the strong and moderate staining of PDGFR-. However in 70 ca

6、ses with the expression strong or moderate of CD117, 57 (81.4%) exhibited the negative and weak expression of PDGFR-(P<0.05). Conclusion With regard to GIST, the expression of PDGFR- is associated with the location, histopathology and the expression of CD117. PDGFR- may play a role in the pat

7、hogenesis of GIST. KEY WORDS: receptor,platelet-derived growthfactor alpha; proto-neogene protein c-kit; gastrointestinal stromal tumors 胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）是消化道最常見的間葉源性腫瘤，免疫表型常表達KIT蛋白（CD117）、遺傳學上存在頻發(fā)性C-KIT基因突變。最近研究發(fā)現(xiàn)，少部分胃腸道間質(zhì)瘤存在血小板源性生長因子受體（PDGFR-）基因突變，認為也是本病的重要發(fā)病機制之一，特別是該基因的

8、突變可能導致酪胺酸激酶抑制劑治療上的抵抗1-2。本研究應(yīng)用免疫組織化學檢測其在GIST中的表達，分析其與臨床病理學特征的關(guān)系。1 材料與方法1.1 材料收集1997-2006年胃腸道間質(zhì)瘤切除標本的存檔蠟塊94例，男性47例，女性47例，年齡中位數(shù)57歲（2286歲）。患者術(shù)前均未經(jīng)放療和化療。復習所有切片，均符合胃腸道間質(zhì)瘤的診斷標準3。1.2 方法標本均經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)4 m切片，分別行H-E染色和免疫組織化學CD117和PDGFR-染色。采用EnVision免疫組織化學染色試劑盒（美國DAKO公司），操作嚴格按照說明書進行。CD117（多克?。┵徸悦绹鳧AKO公司，稀釋

9、濃度為1400；PDGFR-（多克?。绹鳶ANTA CRUZ 公司），稀釋度為1250。用已知的陽性片作陽性對照，同時用PBS代替第一抗體作陰性對照。1.3 診斷標準所有病例形態(tài)學均符合GIST診斷要點3。77例因CD117陽性而診斷；17例CD117陰性病例中，10例因CD34彌漫陽性而診斷，7例排除了胃腸道神經(jīng)鞘瘤、平滑肌瘤、炎性肌纖母細胞瘤、纖維瘤病和平滑肌源性腫瘤而納入本研究。1.4 免疫組織化學染色結(jié)果判斷標準兩位病理醫(yī)師獨立觀察每張切片10個具有代表性的高倍視野。采用半定量評估方法劃分染色強度4：>75%的腫瘤細胞呈強陽性/中度陽性著色者為；10%75%的腫瘤細胞

10、呈強陽性/中度陽性著色或>75%的腫瘤細胞呈弱陽性著色者為；陽性的腫瘤細胞數(shù)<10%者為+；無著色者為-。1.5 GIST分型和危險性評估判斷參照文獻5的分型、分級標準，分為梭型細胞型、上皮樣細胞型和混和細胞型。分級標準：腫瘤直徑<2 cm和核分裂相<5/50 HPF為極低度侵襲危險性；腫瘤直徑為25 cm和核分裂像5/50 HPF為低度侵襲危險性；腫瘤直徑<5 cm和核分裂相為610/50 HPF或腫瘤直徑為610 cm和核分裂相<5/50 HPF為中度侵襲危險性；腫瘤直徑>5 cm和核分裂相&

11、amp;gt;10/50 HPF或腫瘤直徑>10 cm（不管核分裂相數(shù)目多少）或核分裂相>10/50 HPF（不管腫瘤直徑多少）均視為高度侵襲危險性。1.6 統(tǒng)計學處理應(yīng)用中國醫(yī)學百科全書-醫(yī)學統(tǒng)計學PEMS 3.1統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，半定量資料使用2檢驗。2 結(jié) 果2.1 臨床病理學特征腫瘤部位：胃部49例，腸道40例，胃腸道外5例。腫瘤平均直徑6.43 cm（0.520 cm）。危險性：極低度侵襲危險性8例，低度侵襲危險性27例，中度侵襲危險性24例，高度侵襲危險性35例。組織學類型：梭形細胞型73例，上皮細胞型4例，混合細胞型17例（表1）。表1 PDGF

12、R-與胃腸道間質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系（略）2.2 免疫組織化學染色PDGFR-陽性染色主要位于腫瘤細胞的細胞膜和核旁點狀陽性，異質(zhì)性表達（圖1A）；其中強陽性16例，中度陽性10例，中度以上陽性率為27.7%（26/94例）。26例中度以上陽性病例中，發(fā)生于胃24例（92.3%），腸道1例（3.85%），胃腸道外1例 (3.85%)，比較有統(tǒng)計學意義（P0.01)。上皮細胞型和混合細胞型者均呈彌漫性細胞膜或核旁點狀陽性染色，強度多在中度以上（85.7%）（圖1B）；梭形細胞型的陽性染色較弱，多呈局灶性（圖1C），中度以上陽性率為12.3%（9/73例），兩者比較有統(tǒng)計學意義（P0.05)。梭形

13、細胞型中陽性者具有明顯柵欄狀排列的區(qū)域PDGFR-染色呈強陽性（圖1D）。2.3 PDGFR-染色與CD117的關(guān)系CD117陽性染色主要位于腫瘤細胞膜和核旁點狀陽性，異質(zhì)性表達（圖2）；其中強陽性53例，中度陽性17例，中度以上陽性率為74.5%（70/94例）。24例CD117陰性或弱陽性病例中，PDGFR-同為陰性或弱陽性病例11例（45.8%），PDGFR-中度以上陽性13例（54.2%）；70例CD117中度以上陽性病例中，PDGFR-陰性或弱陽性57例（81.40%），PDGFR-中度以上陽性13例（18.6%），比較有統(tǒng)計學意義（P0.05）。3 討 論 GIST是胃腸道最常見的

14、間葉源性腫瘤。如今，人們對GIST的診斷已經(jīng)從病理組織學、超微結(jié)構(gòu)發(fā)展到免疫表型特征6。最近的遺傳學研究將GIST分為3個亞型: KIT基因突變型、KIT激酶相關(guān)性基因PDGFR突變型以及KIT和PDGFR基因野生型7。PDGFR基因定位于人類4q12，全長65 kb，其編碼的PDGFR為一種單鏈跨膜糖蛋白，由1 089個氨基酸組成，與C-KIT基因同屬于型酪氨酸激酶家族。PDGFR-與配體結(jié)合形成受體配體復合物并活化PDGFR-，活化的PDGFR-可以激活磷酸酰肌醇、cAMP及多種蛋白質(zhì)的磷酸化途徑及其他改變。再通過信號轉(zhuǎn)導通路將有絲分裂等信號傳遞入細胞核，誘導基因表達，促進DNA合成，引起

15、細胞分裂和增殖8。 C-KIT基因第11號外顯子突變是GIST最常見的事件，而 PDGFR第18號和第12號外顯子突變是PDGFR-突變型的常見部位。C-KIT基因和PDGFR-基因突變是兩個獨立的遺傳學事件8。國內(nèi)學者也有類似的研究結(jié)果，GIST中特別是C-KIT陰性的存在PDGFR-基因突變，突變的位點和類型存在多樣性9-10。Heinrich 等在C-kit基因突變型的GIST中也檢測到PDGFR-蛋白的表達。Pauls等發(fā)現(xiàn)PDGFR-蛋白不僅在PDGFR-基因突變型的GIST中表達，而且在C-KIT基因突變型和野生型中也見有表達，但表達的強度明顯減弱11。本研究發(fā)現(xiàn)，94例GIST中

16、有37例PDGFR-蛋白呈弱陽性以上表達，在CD117陰性或弱陽性的病例中，13例PDGFR-呈中度以上陽性染色（54.2%）；在CD117中度以上陽性染色的病例中，57例PDGFR-為陰性和弱陽性染色（81.4%），差別具有顯著性，結(jié)果與多數(shù)學者相似，PDGFR-基因與C-KIT基因相似，可能也是本病的重要發(fā)病機制之一8。本研究結(jié)果與多數(shù)學者的研究相似，PDGFR-蛋白的表達與GIST發(fā)生的性別和腫瘤侵襲危險性無關(guān)，但是似乎與患者的年齡有關(guān)，目前這種現(xiàn)象還難以解釋。 PDGFR-蛋白的表達與GIST發(fā)生的部位有關(guān)，26/94例中度以上陽性染色的病例中, 發(fā)生于胃24例（92.3%），腸道1例

17、（3.85%），胃腸道外1例 (3.85%)，差別有統(tǒng)計學意義（P0.05）。Wardelmann等應(yīng)用SSCP和序列分析檢測46例C-KIT野生型GIST的PDGFR-基因的突變情況，顯示20例存在PDGFR-基因外顯子18或16號突變的病例均發(fā)生于胃6。Hirota等觀察8例C-KIT野生型GISTs, 發(fā)現(xiàn)5例PDGFR-基因突變的GISTs發(fā)生于胃，提示不同發(fā)病部位的GISTs可能存在不同的基因遺傳學改變1,4。 PDGFR-突變與GIST的組織學類型密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)PDGFR-的陽性表達與GIST組織學類型明顯相關(guān)，上皮細胞型和混合細胞型的PDGFR-陽性表達率明顯高于梭形細胞型

18、，兩者比較有統(tǒng)計學意義（P0.050）。PDGFR-強表達的GIST大多為混合細胞型和上皮細胞型，而CD117強表達的多為梭形細胞型，結(jié)果與多數(shù)學者相似 4,11-12 。雖然PDGFR-與C-KIT的基因突變模式相似，但是產(chǎn)生的結(jié)果并不完全相同，上皮樣細胞形態(tài)的產(chǎn)生可能是由于活化的PDGFR-基因誘導細胞微絲的重新分布, 影響細胞的邊緣波動（ruffing），改變細胞的運動方向而產(chǎn)生13。而部分梭形細胞型也存在PDGFR基因的表達可能是由于存在其它的信號傳導通路所致4。本研究還觀察到，在梭形細胞型的GIST中局部有明顯柵欄狀排列的區(qū)域PDGFR-表現(xiàn)出明顯的胞質(zhì)胞膜陽性，這個現(xiàn)象還很難解釋。

19、PDGFR-在大鼠和小鼠的神經(jīng)元細胞、雪旺細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞中均有表達，提示這種現(xiàn)象是否與GIST具有神經(jīng)分化有關(guān)14-15。【參考文獻】 1Hirota S,Ohashi A,Nishida T,et al. Gain-of-function mutation of platelet-derived growth factor receptor gene in gastrointestinal stromal tumorsJ. Gastroenterology, 2003,125(3):660-667.2Heinrich M C,Corless C L,Demetri G D,et al.

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