分離土壤中分解尿酸的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、分離土壤中分解尿素的細(xì)菌和計(jì)數(shù)制作：鄒霖1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簭耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌，計(jì)數(shù)2實(shí)驗(yàn)原理：A.培養(yǎng)基中加入唯一氮源-尿素，能分解尿素的細(xì)菌自 身能夠合成脲酶，能夠分解利用尿素中的氮元素， 從而能夠生存繁殖； 不能分解尿素的細(xì)菌的繁殖受到抑制， 從而達(dá)到分離出土壤中能分解 尿素的細(xì)菌的作用。B.使用酚紅鑒定尿素是否被分解.CO（NH2）2分解 產(chǎn)生NH3使溶液顯堿性如果尿素被分解，則酚紅會(huì)顯紅色， C.分解 原理.CO（NH2）2+H2O二脲酶=CO2+NH3D稀釋涂布平板法.將菌液進(jìn)行一 系列的梯度稀釋， 然后將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到瓊脂固體培 養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀

2、釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微 生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。E.計(jì)數(shù)菌落，一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌可以繁殖為一個(gè)肉眼可見(jiàn)的菌落 （計(jì)數(shù)結(jié)果 低于實(shí)際細(xì)菌數(shù)）3提出問(wèn)題：尿素分解后NH3的產(chǎn)生是否會(huì)影響實(shí)驗(yàn)4做出假設(shè)：尿素分解后NH3的產(chǎn)生會(huì)影響實(shí)驗(yàn)。5.實(shí)驗(yàn)材料用具：超凈工作臺(tái)、取樣鏟、 試管、錐形瓶、恒溫培養(yǎng)箱、 培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈、酒精、無(wú)菌水、地面以下 3-8CM 處的土壤、培養(yǎng)基A （磷酸二氫化鉀 磷酸氫化二鈉七水合硫酸鎂 葡萄糖10g 尿素1g瓊脂15g）培養(yǎng)基B （牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基） 涂布器、干熱滅菌箱、燒杯、膠頭滴管6.實(shí)驗(yàn)步驟：1.對(duì)實(shí)驗(yàn)用

3、具消毒滅菌； 按配方稱取上述物質(zhì)， 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到 1000ml2. 配置好培養(yǎng)基后， 將培養(yǎng)基倒置都放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d,取出后觀察是否產(chǎn)生了菌落，若無(wú)，則繼續(xù)下一步實(shí)驗(yàn)。若 有，重做 (>_<)3. 系列稀釋：將分別盛有 9ml 水的 5 只試管和 90ml 水的1個(gè)錐形瓶滅菌，并按1010的順序編號(hào) 錐形瓶編號(hào)10。將10g符合條件的土壤放入錐形瓶中，震蕩錐形瓶，用移液管吸取 1ml 菌液， 注入標(biāo)有 10 的試管中，用手輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使 菌液與水充分混勻。以此類推，直到完成最后一只試管的稀釋。 （注 意：移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌， 操作時(shí)，

4、試管口和移液管應(yīng)在離火焰 12cm處）4. 涂布平板：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中，分別取10. 10 . 10中的少量菌液，分別各滴加到3個(gè)培養(yǎng)基A（總計(jì)9個(gè)） 的表面，注明培養(yǎng)基種類，培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋程度， 取少量無(wú)菌水滴加到 1 個(gè)培養(yǎng)基中作為空白對(duì)照組， 取少量菌液滴加 到培養(yǎng)基B中（判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用），將沾有少量 酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10S用涂布器將菌液均勻的涂布在每個(gè)培養(yǎng)基表面 （每次涂布前都必須用酒精燈灼 燒）涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。5. 將培養(yǎng)基倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 1-2d6. 相同稀釋程度的 3 個(gè)培養(yǎng)基統(tǒng)計(jì)其菌落數(shù) （30-300） 取平均值7實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1空白對(duì)照組無(wú)菌落2培養(yǎng)