國(guó)家自然科學(xué)基金2模板

1、項(xiàng)目類投送學(xué)科代碼科 學(xué) 部 編別1號(hào)CC03031102國(guó)家自然科學(xué)基金申請(qǐng)書項(xiàng)目名稱：口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選及其核酸疫苗的研究申請(qǐng)者：所在單位：郵政編碼：通訊地址：電話：傳真：申請(qǐng)日期：國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)填報(bào)說(shuō)明一、填寫申請(qǐng)書前，請(qǐng)先查閱國(guó)家自然科學(xué)基金有關(guān)項(xiàng)目申請(qǐng)辦法及規(guī)定。申請(qǐng)書各項(xiàng)內(nèi)容，要實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫。表達(dá)要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，字跡要清晰易辨。外來(lái)語(yǔ)要同時(shí)用原文和中文表達(dá)。第一次出現(xiàn)的縮寫詞，須注出全稱。二、申請(qǐng)書為十六開(kāi)本，復(fù)印時(shí)用 B5 復(fù)印紙，于左側(cè)裝訂成冊(cè)。第三頁(yè)起各欄空格不夠時(shí)，請(qǐng)自行加頁(yè)。一式六份（至少一份為原件），由所在單位審查簽署意見(jiàn)后，按申報(bào)學(xué)科投送

2、國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)對(duì)口科學(xué)部。地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目，申請(qǐng)書另報(bào)送?。ㄗ灾螀^(qū)）科委一份原件。三、封面上右上角“科學(xué)部編號(hào)”由對(duì)口科學(xué)部填寫，項(xiàng)目類別和申報(bào)學(xué)科代碼 1 由申請(qǐng)者填寫。四、申請(qǐng)者和項(xiàng)目組中具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的主要成員申請(qǐng)（含參加）的項(xiàng)目數(shù)，連同在研的國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目數(shù) ( 不含重點(diǎn)項(xiàng)目、重大項(xiàng)目 ) ，不得超過(guò)兩項(xiàng)。五、同一申請(qǐng)者研究?jī)?nèi)容相近的項(xiàng)目，只允許報(bào)送一個(gè)科學(xué)部。六、 申請(qǐng)者可因同類項(xiàng)目競(jìng)爭(zhēng)等原因 , 提出不宜評(píng)議本項(xiàng)目的專家名單（姓名與單位， 3 人以內(nèi)） , 附另頁(yè)于申請(qǐng)書原件中，供科學(xué)部選擇同行評(píng)議人時(shí)參考?？茖W(xué)部將對(duì)此信息保密。七、 國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)通信

3、地址: 北京海淀區(qū)花園北路 35 號(hào)東門郵政編碼： 100083精品文檔一、簡(jiǎn)表中名口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選及其核酸疫苗的研究文英研稱Screenand nucleic acid immunization of lung highly metastatic related antigen gene文究 類別A.自由申請(qǐng) B.高技術(shù)探索 C.青年 D.地區(qū)高技術(shù)探索E重大F.重點(diǎn)H.專項(xiàng)C項(xiàng)目主題號(hào)項(xiàng) 申報(bào)名稱 1口腔頜面外科學(xué)名稱 2A. 基礎(chǔ)研究目 學(xué)科代碼 1C03031102代碼 2B. 應(yīng)用基礎(chǔ) B申請(qǐng)金額所用實(shí)驗(yàn)室姓 中文名 拼音申 專業(yè)名稱技術(shù)代碼請(qǐng) 職務(wù)所 名稱者 在性

4、質(zhì)單位所在地總?cè)藬?shù)6主姓 名簽 字項(xiàng)要何榮根成陳萬(wàn)濤鄧永強(qiáng)目員林李嵩周曉健組 不含申1歡迎下載。精品文檔采用生物芯片技術(shù), 對(duì)人腺樣囊性癌的肺低轉(zhuǎn)摘移細(xì)胞系及其高轉(zhuǎn)移克隆株進(jìn)行大規(guī)模的基因表達(dá)定量對(duì)比分析, 篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗研原基因, 設(shè)計(jì)構(gòu)建同源的核酸疫苗, 建立動(dòng)物模型, 運(yùn)用分子外科轉(zhuǎn)基因技術(shù)將核酸疫苗導(dǎo)究?jī)?nèi)要入動(dòng)物模型中, 分析其抗腫瘤免疫效果, 進(jìn)一容步闡明惡性腫瘤的肺轉(zhuǎn)移機(jī)理, 尋找新的有效和靶位點(diǎn), 為防治癌轉(zhuǎn)移提供新方法。意義主題詞1. 主題詞數(shù)量不多于3 個(gè)； 2. 主題詞之間空一格（英文用/ 分隔）中文腫 瘤轉(zhuǎn) 移基 因英文tumor / metastasis / g

5、ene簡(jiǎn)表填寫要求一、簡(jiǎn)表內(nèi)容將輸入計(jì)算機(jī)，必須逐項(xiàng)認(rèn)真填寫，采用國(guó)家公布的標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)化漢字。簡(jiǎn)表中所有代碼以最新發(fā)布的國(guó)家自然科學(xué)基金申請(qǐng)項(xiàng)目分類目錄及代碼為準(zhǔn)填寫。高技術(shù)探索課題主題號(hào)按高技術(shù)新概念新構(gòu)思課題項(xiàng)目指南中主題號(hào)填寫，申請(qǐng)其重點(diǎn)項(xiàng)目時(shí)項(xiàng)目類別也填寫B(tài)，并在申請(qǐng)書封面右上角加注“高技術(shù)探索課題重點(diǎn)項(xiàng)目”。二、凡選擇性欄目, 將相應(yīng)提示符A、 B 等之一填入該欄的右下角。三、部分欄目填寫要求：項(xiàng)目名稱應(yīng)確切反映研究?jī)?nèi)容和范圍, 最多不能超過(guò)25 個(gè)漢字 ( 包括標(biāo)點(diǎn)符號(hào)) ?；A(chǔ)研究指以認(rèn)識(shí)自然現(xiàn)象、探索自然規(guī)律為目的的, 不直接考慮應(yīng)用目標(biāo)的研究活動(dòng)。應(yīng)用基礎(chǔ)研究指有廣泛應(yīng)用前景，但

6、以獲取新原理、新技術(shù)、新方法為主要目的的研究。報(bào)審學(xué)科申請(qǐng)項(xiàng)目所屬的最基礎(chǔ)學(xué)科。如涉及多學(xué)科可填寫兩個(gè), 先填為主學(xué)科。申請(qǐng)金額以萬(wàn)元為單位, 用阿拉伯?dāng)?shù)字表示, 注意小數(shù)點(diǎn)。起止年月起始時(shí)間從申請(qǐng)的次年的1 月算起。完成時(shí)間為完成年度的12 月。所用的實(shí)驗(yàn)室系指研究項(xiàng)目將利用的實(shí)驗(yàn)室, 僅填寫國(guó)家計(jì)委批準(zhǔn)的國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室或部門批準(zhǔn)的開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室。所在單位名稱及代碼按單位公章填寫全稱。例如“中國(guó)科學(xué)院西安光學(xué)精密機(jī)械研究所”不得填寫“中科院西安光機(jī)所”或“西安光機(jī)所 ”。全稱中的數(shù)字 , 一律寫中文， 例如：航空航天工業(yè)部七O 一研究所。首次申請(qǐng)國(guó)家自然科學(xué)基金的單位, 尚未編入單位代碼 , 其

7、代碼暫不填。參加單位數(shù)指研究項(xiàng)目組成員所在單位數(shù), 包括主持單位和合作單位, 以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。項(xiàng)目組主要成員指在項(xiàng)目組內(nèi)對(duì)學(xué)術(shù)思想、技術(shù)路線的制定與理論分析及對(duì)項(xiàng)目的完成起主要作用的人員。本欄雙線右側(cè)內(nèi)容不輸入計(jì)算機(jī)。研究?jī)?nèi)容和意義摘要與主題詞均錄入軟盤。2歡迎下載。精品文檔二、立論依據(jù)( 包括項(xiàng)目的研究意義、國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析, 并附主要的參考文獻(xiàn)及出處)對(duì)基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國(guó)際科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；對(duì)應(yīng)用基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合科學(xué)前沿，圍繞國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的重要科技問(wèn)題，論述其應(yīng)用前景。項(xiàng)目的科學(xué)意義惡性腫瘤肺轉(zhuǎn)移的防治是臨床上進(jìn)一步提高患者生存率和治愈率的關(guān)鍵所在，具備肺轉(zhuǎn)

8、移潛能的癌細(xì)胞亞群是腫瘤組織與宿主組織之間長(zhǎng)期相互作用、相互選擇的結(jié)果,在此過(guò)程中, 這些癌細(xì)胞亞群產(chǎn)生了不同于其它亞群的特點(diǎn), 包括轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及由其所決定的細(xì)胞和群體水平的特點(diǎn), 其中，肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因是一個(gè)相當(dāng)重要的方面1 ，因而，篩選和鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因，有助于深入理解和闡明肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制。在此基礎(chǔ)上， 設(shè)計(jì)和構(gòu)建有效的核酸疫苗，發(fā)展緊密結(jié)合臨床實(shí)際的轉(zhuǎn)染方法，激活機(jī)體的特異性主動(dòng)免疫， 必將對(duì)殺傷肺高轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞亞群，進(jìn)而控制肺轉(zhuǎn)移有十分重要的意義。國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析迄今為止 , 與口腔癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因只局限在P53 C-erB-2 nm23等少數(shù)幾個(gè)基因上 2 , 其根

9、本原因在于以往的研究方法受到分子生物學(xué)技術(shù)的極大限制, 只能研究單個(gè)或少數(shù)幾個(gè)基因。 1996年 , 在人類基因組計(jì)劃的研究中，StevenFodor 等 3充分結(jié)合并靈活運(yùn)用了計(jì)算機(jī)、DNA合成、探針雜交、照相平板印刷、激光共聚焦掃描等技術(shù),創(chuàng)造了完整的 DNA生物芯片 , 可同時(shí)定量檢測(cè)成千上萬(wàn)個(gè)基因的表達(dá)譜, 結(jié)合生物信息學(xué)可從整體上分析疾病。1998 年， Gress 等 4采用含 20,736個(gè)基因片段的 DNA芯片 , 檢查了胰腺癌細(xì)胞株、 胰腺癌組織與對(duì)照胰腺組織的基因表達(dá)譜, 發(fā)現(xiàn)胰腺癌存在129個(gè)新基因序列和 97個(gè) EST, 從而找出了形成胰腺癌惡性表型的相關(guān)基因?，F(xiàn)階段，

10、國(guó)內(nèi)已建立 DNA生物芯片技術(shù)和人腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC-2及其肺高轉(zhuǎn)移克5隆株 ACC-M ，我們采用含 14， 000個(gè)基因片段的 DNA生物芯片首次對(duì)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的 ACC-2和 ACC-M進(jìn)行了大規(guī)模的基因表達(dá)定量對(duì)比分析，結(jié)果表明， 低轉(zhuǎn)移性的 ACC 2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的 ACC M細(xì)胞株比較， 有顯著差異的基因36個(gè)，有差異的基因 213個(gè)。這些基因涉及跨膜蛋白、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過(guò)程等諸方面。其中的肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因可通過(guò)生物信息學(xué)分析、反義核酸、 血小板凝集試驗(yàn)和裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型來(lái)篩選和鑒定。對(duì)腫瘤抗原加工遞呈過(guò)程和機(jī)體免疫反應(yīng)的深入研究表明,

11、影響腫瘤免疫治療效果不理想的重要原因在于腫瘤相關(guān)抗原是正常細(xì)胞中有或曾經(jīng)有表達(dá)的蛋白質(zhì), 只是在腫瘤細(xì)胞中有不適當(dāng)?shù)谋磉_(dá), 因而引起了機(jī)體的免疫耐受, 為了克服免疫耐受,1998年Disis 等6 采用同源的人HER-2/neu 蛋白免疫小鼠 , 誘導(dǎo)了比使用小鼠自身neu 蛋白大得多的機(jī)體免疫。 同時(shí)發(fā)現(xiàn)不使用完整的腫瘤抗原, 而只使用腫瘤抗原多肽片段, 能更有效地誘發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。 但以上研究均采用的是肽疫苗，近年來(lái)發(fā)展的核酸疫苗因安全、熱穩(wěn)定和能引發(fā)持久的細(xì)胞和體液免疫等特點(diǎn), 從而比肽疫苗更具發(fā)展?jié)摿?。3歡迎下載。精品文檔核酸疫苗集中了減毒疫苗和亞單位疫苗的優(yōu)點(diǎn), 既可以不斷表達(dá)抗原

12、蛋白, 又可以克隆所需基因片段, 以激發(fā)理想的免疫反應(yīng), 國(guó)內(nèi)外對(duì)以T細(xì)胞識(shí)別的腫瘤抗原為中心的抗腫瘤核酸疫苗免疫治療進(jìn)行了大量的研究8.9 , 表明能誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng),殺傷癌細(xì)胞。但目前關(guān)于肺轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原核酸疫苗的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究在篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)構(gòu)建同源的核酸疫苗，建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型，采用已建立的緊密結(jié)合臨床實(shí)際的分子外科轉(zhuǎn)基因方法，研究其抗腫瘤效果， 將對(duì)深入理解肺轉(zhuǎn)移的機(jī)制和臨床外科治療模式的發(fā)展產(chǎn)生積極影響10 。參考文獻(xiàn)1.Resser-JR; Carbone-DP.Immunotherapy of head and neck cancer.

13、 Curr-Opin-Oncol. 1998 May; 10(3): 226-322 Clayman-GL;Frank-DK;etalAdenovirus-mediatedwild-type p53 gene transferas a surgicaladjuvantinadvanced head and neck cancers. Clin-Cancer-Res.1999 Jul; 5(7):268-2713.Strachan.T,Abitbol.M,etal.Anew dimension forthe human genome project :towards comprehensive

14、maps. Nature Genetic.1997,16;126-1314.Gress T M, Muller-PillaschF, etal. A pancreaticcancer-specificexpressionprofile .Oncogene,1998,13:1819-18305. 關(guān)曉峰 , 邱蔚六等 . 肺高轉(zhuǎn)移性腺樣囊性癌細(xì)胞株的篩選. 中華口腔醫(yī)學(xué)雜志 , 1996;2:74-77.F.Mshiotaetbal.HumanHER-2/neuproteinimmunizationcircumventstolerancetoratneu:avaccinestrategyfors

15、elftumorantigens .Immunology . 1998,93:192-199.7.Seder,RobertA.;Gurunathan,Sanjay.DNA Vaccines:Designer Vaccines forthe 21stCentury TheNew England Journalof Medicine.1999;341(4):277-2798.Ciernik IF,Berzofsky JA et al .Induction of cytotoxic T lymphocytes andantitumor immunity with DNA vaccines expre

16、ssing single T cell epitops. JImmunol 1996,156:2369-23759.Gary L .Clayman, Adel K.EI-naggar et al In vivo molecular therapy with p53adenovirusformicroscopicresidualheadandnecksquamouscarcinoma.Cancer Research ,1995;55:1-6.10.Jack A.Roth .Molecular surgery for cancer. Arch Surg.1992;127:1298-1302.4歡迎

17、下載。精品文檔三、研究方案1. 研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題研究目標(biāo) :已建立人腺樣囊性癌細(xì)胞系 ACC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株 ACC-M,采用 DNA生物芯片技術(shù)對(duì)這兩個(gè)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的癌細(xì)胞系的基因表達(dá)譜進(jìn)行定量對(duì)比掃描，運(yùn)用生物信息學(xué)、 反義核酸技術(shù)、 分子雜交來(lái)篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因，同時(shí)建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型，設(shè)計(jì)構(gòu)建與口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因序列同源的核酸疫苗，采用已建立的緊密結(jié)合臨床實(shí)際的分子外科轉(zhuǎn)基因方法，深入研究其抗腫瘤免疫效果。研究?jī)?nèi)容1. 運(yùn)用 DNA生物芯片技術(shù) （含 14，000個(gè)基因） 對(duì)腺樣囊性癌細(xì)胞系 ACC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株

18、ACC-M進(jìn)行大規(guī)模的基因表達(dá)譜定量對(duì)比分析。2. 結(jié)合生物信息學(xué)的聚類分析和同源分析、反義核酸技術(shù)、血小板凝集試驗(yàn)、裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型來(lái)篩選鑒定肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因, 通過(guò) RT-PCR和分子雜交進(jìn)一步在臨床手術(shù)標(biāo)本和其它口腔癌細(xì)胞系中確證.3. 選用含巨細(xì)胞病毒（ CMV）啟動(dòng)子和 -Gal 基因的真核表達(dá)載體 , 設(shè)計(jì)構(gòu)建與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗。4. 建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型， 應(yīng)用分子外科轉(zhuǎn)基因方法， 通過(guò)荷瘤動(dòng)物模型的 COX生存分析、 T細(xì)胞亞群功能測(cè)定、抗 -Gal 抗體測(cè)定來(lái)研究其體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)的強(qiáng)度。擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：1 對(duì) DNA芯片所獲得的大量基因信息進(jìn)行有效

19、的分析篩選和鑒定。2. 核酸疫苗的設(shè)計(jì)。3. 抗腫瘤效應(yīng)的分析。5歡迎下載。精品文檔2. 擬采用的研究方法、技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方案及可行性分析實(shí)驗(yàn)方案和研究方法1. 分別培養(yǎng)人腺樣囊性癌細(xì)胞系 ACC-2及其肺高轉(zhuǎn)移克隆株 ACC-M，抽提總 RNA，分離 mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA并用 P33 標(biāo)記 .2. 制備 cDNA陣列膜片 , 包含約 14,000 個(gè)基因 , 每個(gè)基因的序列已測(cè)出 , 分別與標(biāo)記的cDNA片段雜交 , 采用專用軟件和生物信息學(xué)分析基因表達(dá)量的差異。3. 運(yùn)用生物信息學(xué)的聚類分析、同源分析和各種基因庫(kù)信息對(duì)有差異的基因進(jìn)行初步篩選 , 采用反義核酸技術(shù) , 結(jié)合細(xì)胞學(xué)試

20、驗(yàn)、血小板凝集試驗(yàn)和腺樣囊性癌裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型 , 鑒定初步篩選的靶基因在細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的作用，通過(guò)RT-PCR和分子雜交進(jìn)一步在臨床手術(shù)標(biāo)本和其它口腔癌細(xì)胞系中確證。4.通過(guò)國(guó)際互聯(lián)網(wǎng)查詢美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH) 的生物信息科技中心 (NCBI), 可獲得與靶基因不同同源度的序列, 據(jù)此選用含巨細(xì)胞病毒（ CMV）啟動(dòng)子和 -Gal 基因的真核表達(dá)載體 , 設(shè)計(jì)構(gòu)建與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗。同時(shí), 查找含相同序列的鼠癌細(xì)胞系, 并從中科院上海細(xì)胞所細(xì)胞庫(kù)中獲取相應(yīng)的鼠癌細(xì)胞系 , 在小鼠（非裸鼠）上種植癌細(xì)胞建立癌細(xì)胞鼠模型。5.利用已建立的分子外科縫線和注射轉(zhuǎn)基因的

21、方法, 將核酸疫苗轉(zhuǎn)入癌細(xì)胞鼠模型中 , 通過(guò)荷瘤鼠模型的 COX生存分析、 T淋巴細(xì)胞亞群分析、抗 -Gal 抗體測(cè)定來(lái)研究其體內(nèi)抗腫瘤的效應(yīng) , 從中找出最有效的抗腫瘤作用因子.可行性分析1.本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期從事腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移機(jī)理及其防治的研究 , 積累了豐富的理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) , 并取得了公認(rèn)的成就 .2. 已進(jìn)行的預(yù)初試驗(yàn)表明 , 肺低轉(zhuǎn)移性的 ACC 2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的 ACC M細(xì)胞株比較，已發(fā)現(xiàn)有顯著差異的基因 36個(gè)，有差異的基因 213個(gè)。3. 申請(qǐng)者本人在攻讀研究生期間致力于腫瘤的分子外科和核酸疫苗的研究，該研究首次將含報(bào)告基因的質(zhì)粒導(dǎo)入兔舌肌和胸鎖乳突肌，建立了分子外

22、科轉(zhuǎn)基因技術(shù)。并已熟練掌握分子克隆和基因重組技術(shù).4. 實(shí)驗(yàn)所需的基因分析軟件、真核表達(dá)載體質(zhì)粒、免疫分析試劑等已具備3.本項(xiàng)目的創(chuàng)新之處1. 首次采用 DNA芯片對(duì)遺傳背景相同而生物學(xué)行為不同的口腔癌細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模的基因定量對(duì)比分析。2. 篩選和鑒定新的肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因.3. 本研究設(shè)計(jì)構(gòu)建了與肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因同源的核酸疫苗, 深入研究了其抗腫瘤免疫作用 .6歡迎下載。精品文檔技術(shù)路線 ：低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系A(chǔ)CC-2和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC-M抽提總 RNA，分離 mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,P33 標(biāo)記 .DNA芯片技術(shù)（含14，000 個(gè)基因）的基因表達(dá)譜定量對(duì)比掃描分析生物信息學(xué)反義

23、核酸技術(shù)、血小板凝集試驗(yàn)RT-PCR和分子雜交聚類和同源分析腺樣囊性癌裸小鼠移植瘤肺轉(zhuǎn)移模型鑒定進(jìn)一步確證肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因設(shè)計(jì)構(gòu)建同源核酸疫苗建立癌細(xì)胞鼠模型將核酸疫苗轉(zhuǎn)入癌細(xì)胞鼠模型中COX生存分析、 T 淋巴細(xì)胞亞群分析、抗-Gal 抗體測(cè)定來(lái)研究其體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)7歡迎下載。精品文檔4. 年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展1. DNA芯片技術(shù)對(duì)低轉(zhuǎn)移性的 ACC 2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株 ACC M細(xì)胞株的基因的大規(guī)模掃描分析 .2. 肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因篩選。肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的分析和鑒定。1. 構(gòu)建核酸疫苗。1. 建立癌細(xì)胞動(dòng)物模型。2. 測(cè)定分析抗腫瘤效應(yīng)。5. 預(yù)期研究成果5. 預(yù)1期

24、.研獲究得成人果腺樣囊性癌細(xì)胞系 ACC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株 ACC-M二者完整的基因表1. 獲得人腺樣囊性癌細(xì)胞系 ACC-2及其肺高轉(zhuǎn)移性克隆株 ACC-M二者完整的基因表達(dá)差異譜。2. 口腔癌肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定。3. 核酸疫苗抗腫瘤方法的應(yīng)用。4. 在國(guó)內(nèi)、外專業(yè)刊物上發(fā)表論文5-6 篇 , 參加國(guó)際、國(guó)內(nèi)會(huì)議交流2-3 次。8歡迎下載。精品文檔四、研究基礎(chǔ)1. 與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績(jī)12. 預(yù)初實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肺低轉(zhuǎn)移性的 ACC 2細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性的 ACC M細(xì)胞株比較，有顯著差異的基因 36個(gè)，有差異的基因 213個(gè)。這些基因涉及細(xì)胞信

25、號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過(guò)程、跨膜蛋白等諸方面，為進(jìn)一步進(jìn)行肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定及核酸疫苗的設(shè)計(jì)提供了寶貴的數(shù)據(jù)。3. 申請(qǐng)者本人在攻讀研究生期間致力于腫瘤的分子外科和核酸疫苗的研究，該研究首次將含報(bào)告基因的質(zhì)粒導(dǎo)入兔舌肌和胸鎖乳突肌中，建立了分子外科轉(zhuǎn)基因技術(shù)。并已熟練了掌握分子克隆和基因重組技術(shù).2. 已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑（包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃和落實(shí)情況）1.口腔腫瘤生物實(shí)驗(yàn)室具備細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的各項(xiàng)有關(guān)設(shè)備, 包括達(dá)到GFP標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室、 進(jìn)口培養(yǎng)箱、 無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)操作臺(tái)、 低溫超高速離心機(jī)、 -80 低溫冰箱、 PCR擴(kuò)增

26、儀、核酸蛋白分析儀等。2. 擁有 DNA 芯片分析的全套設(shè)備 , 包括 96 孔板和 384 孔板、 PCR儀自動(dòng)點(diǎn)膜儀、信號(hào)掃描儀、雜交爐等。3. 建有達(dá) SPF標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。9歡迎下載。精品文檔主要預(yù)初實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.DNA 芯片對(duì)肺低轉(zhuǎn)移性的ACC 2 細(xì)胞系和肺高轉(zhuǎn)移性克隆株ACC M 細(xì)胞的14,000 個(gè)基因的定量對(duì)比掃描分析結(jié)果表明, 有顯著差異的基因36 個(gè)，有差異的基因 213 個(gè)。下面列出的是部分顯著差異基因的基因序列號(hào)及其相關(guān)信息。2. 這些基因涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞代謝過(guò)程、跨膜蛋白等諸方面，為肺高轉(zhuǎn)移相關(guān)抗原基因的篩選和核酸疫苗的設(shè)計(jì)提供了可靠的數(shù)據(jù)和堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。H

27、s.201967cds=(26,997) /gb=U05861 /gi=487134 /ug=Hs.201967 /len=1222Hs.79748cds=(111,1700) /gb=AB018010 /gi=5926733 /ug=Hs.79748 /len=1879Hs.183698cds=(29,508) /gb=Z49148 /gi=793842 /ug=Hs.183698 /len=630Hs.111515gb=AA484881 /gi=2213948 /ug=Hs.111515 /len=436Hs.78183cds=(51,1022) /gb=D17793 /gi=457407

28、 /ug=Hs.78183 /len=1204Hs.255772clone_end=5' /gb=AA186737 /gi=1774854 /ug=Hs.255772 /len=511Hs.58593cds=(119,868) /gb=X16901 /gi=35864 /ug=Hs.58593 /len=1408Hs.75069cds=(0,1451) /gb=U23143 /gi=746435 /ug=Hs.75069 /len=1452Hs.150741clone_end=3' /gb=AW072071 /gi=6027069 /ug=Hs.150741 /len=467H

29、s.109798cds=(41,421) /gb=AJ249732 /gi=5921472 /ug=Hs.109798 /len=711Hs.14779clone_end=3' /gb=N64822 /gi=1212651 /ug=Hs.14779 /len=636Hs.132390cds=(0,977) /gb=U09848 /gi=495567 /ug=Hs.132390 /len=3505Hs.43800clone_end=5' /gb=W20128 /gi=1295998 /ug=Hs.43800 /len=526Hs.241829clone_end=3' /g

30、b=AI254779 /gi=3862304 /ug=Hs.241829 /len=359Hs.71819clone_end=3' /gb=AI005336 /gi=3214846 /ug=Hs.71819 /len=685Hs.189083clone_end=3' /gb=AA582554 /gi=2359914 /ug=Hs.189083 /len=461Hs.123057cds=(11,385) /gb=X84003 /gi=791052 /ug=Hs.123057 /len=413Hs.177687cds=(7,978) /gb=S68287 /gi=544761 /u

31、g=Hs.177687 /len=1167Hs.50966cds=(118,4620) /gb=D90282 /gi=219552 /ug=Hs.50966 /len=5215Hs.76686cds=(320,925) /gb=Y00483 /gi=31918 /ug=Hs.76686 /len=1136Hs.18136cds=(143,3403) /gb=U40490 /gi=1110519 /ug=Hs.18136 /len=423210歡迎下載。精品文檔3. 申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員的學(xué)歷和研究工作簡(jiǎn)歷，近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的主要論著目錄 * 和獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況及在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù);

32、青年科學(xué)基金申請(qǐng)者還應(yīng)注明學(xué)位論文名稱及導(dǎo)師姓名與工作單位* 論文：作者·題目·刊名·年份·卷（期）·頁(yè)碼11歡迎下載。精品文檔專著：作者·書名·出版者·年份12歡迎下載。精品文檔13歡迎下載。精品文檔14歡迎下載。精品文檔五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算支出科目1.合計(jì)2. 科研業(yè)務(wù)費(fèi)3. 實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)4.儀器設(shè)備費(fèi)5.協(xié)作費(fèi)金額（萬(wàn)元）16.000.2.000.0.500.500.400.400.2012.004.004.001.001.001.001.001.001.000.50計(jì)算根據(jù)及理由辦公用品學(xué)術(shù)交流及會(huì)議費(fèi)用科研成果鑒定

33、資料檢索、復(fù)印和論文打印、幻燈等論文發(fā)表、版面、審稿費(fèi)分子生物學(xué)試劑生化分析試劑免疫分析試劑普通試劑基因庫(kù)查詢及軟件分析費(fèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物儀器設(shè)備添置費(fèi)科研協(xié)作6. 管理費(fèi)0.50科研管理、水電費(fèi)注：預(yù)算支出科目按下列順序填寫：1. 科研業(yè)務(wù)費(fèi)2.實(shí)驗(yàn)材料費(fèi)3.儀器設(shè)備費(fèi)4.實(shí)驗(yàn)室改裝費(fèi)15歡迎下載。精品文檔16歡迎下載。精品文檔六、申請(qǐng)者正在承擔(dān)的其它研究項(xiàng)目( 包括攀登計(jì)劃、 863 計(jì)劃、攻關(guān)任務(wù)和各部委、省市任務(wù)等項(xiàng)目的名稱及編號(hào)、任務(wù)來(lái)源、起止年月、負(fù)責(zé)或參加等情況 )七、申請(qǐng)者承擔(dān) （負(fù)責(zé)或參加）國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目的情況批準(zhǔn)號(hào)項(xiàng)目名稱起止年月負(fù)責(zé)或參加進(jìn)展或完成情況17歡迎下載。精品

34、文檔對(duì)申請(qǐng)者負(fù)責(zé)的前一個(gè)已結(jié)題科學(xué)基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目名稱及批準(zhǔn)號(hào)）完成情況、后續(xù)研究進(jìn)展及與本申請(qǐng)項(xiàng)目的關(guān)系加以詳細(xì)說(shuō)明。另附該已結(jié)題項(xiàng)目 研究工作總結(jié)摘要（ 300 字）及已發(fā)表主要相關(guān)論文首頁(yè)復(fù)印件（限三篇）。八、申請(qǐng)者承諾我保證上述填報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得資助，我與本項(xiàng)目組成員將嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，按計(jì)劃認(rèn)真開(kāi)展研究工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。申請(qǐng)者（簽章）18歡迎下載。精品文檔九、推薦意見(jiàn)( 不具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的申請(qǐng)者 , 須有兩名具有高級(jí)專業(yè)技術(shù)職務(wù)的同行專家推薦。推薦時(shí) , 請(qǐng)認(rèn)真負(fù)責(zé)地介紹申請(qǐng)者及其項(xiàng)目組成員的業(yè)務(wù)基礎(chǔ)、研究能力、科研態(tài)度及研究條件等。項(xiàng)目組成員不能做推薦者)采用國(guó)際先進(jìn)的 DNA生物芯片技術(shù) , 立足國(guó)內(nèi)的遺傳資源 , 黃丹博士后對(duì)人腺樣囊性癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 ACC-2 與其肺高轉(zhuǎn)移克隆株 ACC-M進(jìn)行了