《藥品生物檢定技術(shù)》教案

1、藥品生物檢定技術(shù)教案第1次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第一章 供試品溶液的配制第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1明確藥品生物檢定的概念和任務(wù)。2掌握供試品（固體）溶液的配制。3熟悉實(shí)踐操作。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】1藥品生物檢定技術(shù)的概念和任務(wù)。2供試品（固體）溶液的配制。3實(shí)踐操作。【難點(diǎn)】供試品溶液的配制教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)【教學(xué)內(nèi)容】藥品生物檢定技術(shù)課程簡介(20分)本課程主要講授供試品溶液的配制、雙碟的制備、無菌檢查、藥品的微生物總數(shù)檢查、控制菌及螨類檢查、抗生素效價(jià)的微生物檢定法、毒力及異常毒性檢查熱原及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、胰島素的生物檢

2、定、幾種藥品的生物活性檢定、升降壓物質(zhì)檢查的原理、方法和注意事項(xiàng)。 教學(xué)目的及要求要求學(xué)生掌握常用方法的原理以及操作技能。具備獨(dú)立完成藥品檢驗(yàn)的實(shí)際工作能力，能在檢驗(yàn)過程中根據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，嚴(yán)格按照藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行操作，全面控制藥品質(zhì)量。學(xué)習(xí)方法與要求（1）在充分理解的基礎(chǔ)上，掌握好課程中講述的有關(guān)基本概念與基本原理，并能融會(huì)貫通，加以應(yīng)用。（2）熟練掌握有關(guān)實(shí)驗(yàn)的基本操作與方法，學(xué)會(huì)對實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行分析、總結(jié)、報(bào)告。（3）實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格按中國藥典要求或標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行操作，認(rèn)真細(xì)致地進(jìn)行觀察，避免與減少實(shí)驗(yàn)誤差。（4）培養(yǎng)高度的責(zé)任感和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，學(xué)習(xí)、工作時(shí)做到細(xì)心、認(rèn)真、

3、專心、耐心。（5）注意學(xué)科之間的聯(lián)系，密切聯(lián)系過去所學(xué)的微生物學(xué)、藥理學(xué)知識，微生物學(xué)密切相關(guān)。（6）掌握好生物檢定統(tǒng)計(jì)有關(guān)的運(yùn)算，并能運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)的知識分析、處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，誤差原因，進(jìn)行報(bào)告。教材及參考資料教材：理論教學(xué)采用高職教育的全國統(tǒng)編教材藥品生物檢定技術(shù)2007年版，李榆梅主編，化工出版社出版；實(shí)踐教學(xué)采用自編教材。參考資料：中國藥典 2010年版二部中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社有關(guān)規(guī)定1課程性質(zhì)：專業(yè)必修課?？傉n時(shí)為68，其中理論58課時(shí)，實(shí)踐10課時(shí)，實(shí)驗(yàn)單列。2考核方式：閉卷考試。3成績評定：理論考核：平時(shí)作業(yè)

4、、課堂討論及小測驗(yàn)40%，期末考試60%。實(shí)踐考核：實(shí)踐操作40%，實(shí)踐結(jié)果與報(bào)告50%，實(shí)踐紀(jì)律與預(yù)習(xí)10%。4準(zhǔn)備物品：作業(yè)本、計(jì)算器各一。第一章 供試品溶液的配制第一節(jié) 必備知識(55分)一、概況及任務(wù)（一）藥品生物檢定概念及特點(diǎn)1概念2.生物檢定的特點(diǎn)：3有效性測定方法對比檢定概念 標(biāo)準(zhǔn)品概念、分類、要求及保存（二）生物檢定適用范圍（三）生物檢定任務(wù)1.藥品生物檢定的主要任務(wù)2藥品生物檢定的其他用途二、生物檢定技術(shù)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系 三、供試品（固體）溶液的配制（一）稱量的操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng)1稱量操作要點(diǎn)2稱量操作注意事項(xiàng)3稱量值計(jì)算（二）稀釋的操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng)1稀釋的操作要點(diǎn)2稀釋操

5、作注意事項(xiàng)第二節(jié) 實(shí)踐操作(10分)一、操作目的（1）熟悉供試品的稱量操作。（2）熟悉供試品的稀釋操作。二、操作內(nèi)容配制 4uml及 1uml的青霉素鉀溶液。 三、設(shè)備、儀器及器皿:見書P4 四、供試品及試劑五、配制前準(zhǔn)備六、操作步驟本節(jié)小結(jié)：（5分鐘）1藥品生物檢定技術(shù)的概念和任務(wù)。2供試品（固體）溶液的配制。作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析加入課程簡介使學(xué)生對課程有了整體了解，如實(shí)踐操作配以教學(xué)錄像效果會(huì)更好。藥品生物檢定技術(shù)教案第2次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第二章

6、雙碟的制備第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1掌握培養(yǎng)基的制備方法。2掌握雙碟的制備方法。3熟悉實(shí)踐操作。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】1培養(yǎng)基的制備方法。2雙碟的制備方法。【難點(diǎn)】雙碟的制備方法。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】第一節(jié) 必備知識一、培養(yǎng)基的制備(20分)1.制備方法：（1）配方（2）制法2.注意事項(xiàng)： （1）選擇適當(dāng)?shù)脑牧?。由于胨、肉膏、酵母膏等原材料的性質(zhì)對抑菌圈的清晰度及試驗(yàn)結(jié)果的精確度影響很大，因此，要通過預(yù)先試驗(yàn)，挑選適當(dāng)品牌的材料使用。（2）不同品牌瓊脂的用量不同，要通過預(yù)備試驗(yàn)定出具體數(shù)值。（3）培養(yǎng)

7、基中的葡萄糖或其他糖類要在其他成分都配制好，瓊脂熔化后加入 （4）制成的培養(yǎng)基凝固后應(yīng)透明，不得有沉淀。如產(chǎn)生沉淀，配制好后，趁熱過濾后調(diào)PH，再分裝消毒。（5）調(diào)PH宜為一次性，避免反復(fù)加酸、堿影響培養(yǎng)基質(zhì)量。（6）制備好的培養(yǎng)基，使用期限為1個(gè)月，并貯存在冰箱中。分裝培養(yǎng)基的容器應(yīng)預(yù)先高壓蒸汽滅菌30min。二、雙碟的制備方法(50分)在抗生素效價(jià)測定中，裝有培養(yǎng)基和試驗(yàn)菌的玻璃培養(yǎng)皿稱為雙碟。雙碟中的培養(yǎng)基一般分底層（不含菌）和菌層。1底層平板培養(yǎng)基的制備（倒底層）（1）用水平儀調(diào)整效價(jià)測定操作臺(tái)面水平。（2）將培養(yǎng)皿置烤箱中160消毒2h后取出，移入無菌操作室內(nèi)效價(jià)測定操作臺(tái)面上，單個(gè)

8、擺開。（3）用100 水?。ㄎ⒉t）使培養(yǎng)基熔化后，在室溫冷卻至70 左右，并仔細(xì)檢查瓊脂培養(yǎng)基是否熔化均勻，有無凝塊。（4）用大口的滅菌刻度吸管，迅速吸取20ml培養(yǎng)基，注入各個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)，均勻攤布，待其凝固后，蓋上干燥的陶瓦圓蓋，放置于3537培養(yǎng)箱中保溫。2菌層平板培養(yǎng)基的制備（倒菌層）（1）從冰箱中取出菌液，回溫至室溫。（2） 100水浴加熱熔化培養(yǎng)基，冷卻到一定溫度（水浴溫度，細(xì)菌為4850 ，芽胞可至60）后，加入一定量菌液預(yù)測試驗(yàn)而定（2.2）法高劑量半徑18 22mm； （3.3）法中心濃度半徑15 18mm立即充分旋轉(zhuǎn)搖勻，不得搖出氣泡。（3）立即用滅菌的大口刻度吸管吸取含菌培

9、養(yǎng)基5ml注入，均勻攤布在底層培養(yǎng)基上，蓋上干燥陶瓦圓蓋，（放置2030分鐘），待凝固。3注意事項(xiàng)（1）玻璃雙碟一定要干燥，不能有冷凝水。（2）刻度吸管要用砂輪割尖嘴，變成大口后用，否則易發(fā)生堵塞。（3）冬季室溫較低，倒好底層的雙碟，待凝固后，可先放入37恒溫箱內(nèi)溫?zé)?，這樣倒菌層時(shí)，培養(yǎng)基易于攤布水平。（4）搖勻菌層培養(yǎng)基時(shí)，一定注意不能搖出氣泡。（5）無論是倒底層還是倒菌層動(dòng)作快，尤其是倒菌層時(shí)要更加快。 第二節(jié) 實(shí)踐操作(10分)一、操作目的：學(xué)習(xí)雙碟的制備。 二、設(shè)備、儀器、器皿及試劑：1設(shè)備、儀器無菌室、恒溫培養(yǎng)箱（室）、恒溫水浴箱、烤箱、冰箱、高壓蒸汽滅菌鍋、水平儀。2器皿生物檢定用

10、培養(yǎng)皿、大口刻度吸管（20ml、10ml）、1ml小口刻度吸管、小錐形瓶（內(nèi)裝玻璃珠）、試管、錐形瓶。玻璃器皿均于160干熱滅菌2h 。3試劑生物檢定培養(yǎng)基號、金黃色葡萄球菌菌液。金黃色葡萄球菌菌液裝于裝有玻璃珠的小錐形瓶內(nèi)，培養(yǎng)基于115高壓蒸汽滅菌。 三、制備前的準(zhǔn)備（1）無菌室開啟紫外燈至少30min。（2）用水平儀校正測定操作平臺(tái)水平。（3）將已滅菌的生物檢定用培養(yǎng)皿及吸管移至無菌室內(nèi)。（4）將培養(yǎng)皿單個(gè)擺開。（5）從冰箱中拿出菌液，回溫至室溫，旋轉(zhuǎn)搖15min。（6）將培養(yǎng)基（生測培養(yǎng)基）放在100 水浴中熔化。（或微波爐內(nèi)）（7）從熔化好的培養(yǎng)基中倒出100ml于另一消毒過的小錐形

11、瓶內(nèi)，于48保溫。 四、操作步驟1倒底層2倒菌層 五、注意事項(xiàng)本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）雙碟的制備步驟、注意事項(xiàng)作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第3次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第三章 無菌檢查第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1掌握藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查的內(nèi)容。2熟悉藥品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。3熟悉無菌檢查的范圍。4掌握無菌檢查法。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】1無菌檢查法及SOP?！倦y點(diǎn)】SOP。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)

12、、圖片【教學(xué)內(nèi)容】第一節(jié) 必備知識（55分鐘）一、藥品衛(wèi)生學(xué)檢查藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查包括： 無菌檢查 染菌量（細(xì)菌、霉菌、酵母菌總數(shù)）的檢查 控制菌（大腸桿菌、沙門桿菌、綠膿桿菌、破傷風(fēng)桿菌、金黃色葡萄球菌）檢查 螨類檢查 二、藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)無菌檢查：無菌微生物限度檢查：不同劑型要求不同控制菌：不得檢出螨類檢查：不得檢出三、需要進(jìn)行無菌檢查的范圍各種注射劑眼用及外傷用制劑植入劑可吸收的止血?jiǎng)┩饪朴梅罅?、器材第二?jié) 實(shí)踐操作（25分鐘）一、無菌檢查法概念：無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下

13、未發(fā)現(xiàn)微生物污染。二、常用的無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。薄膜過濾法適合于有抗菌作用或大容量的供試品。直接接種法適合于非抗菌作用的供試品。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。進(jìn)行供試品無菌檢查時(shí)，所采用的檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）1藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查包括2需要進(jìn)行無菌檢查的范圍3無菌檢查法概念4常用的無菌檢查法作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第4次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第三章 無菌檢查第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的

14、和要求1掌握藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查的內(nèi)容。2熟悉藥品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。3熟悉無菌檢查的范圍。4掌握無菌檢查法。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】1無菌檢查法及SOP。【難點(diǎn)】SOP。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、圖片【教學(xué)內(nèi)容】三、無菌檢查法具體方法（80分鐘）2010版藥典無菌檢查法方法驗(yàn)證及操作要點(diǎn)：見中國藥典（2010年版二部）附錄 P89931 前言1.1 定義 1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件要求2. 培養(yǎng)基2.1 培養(yǎng)基的滅菌 配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。2.2 培養(yǎng)基的保存制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225、避光環(huán)境。若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉

15、容器中一般可在一年內(nèi)使用。2.3 培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)。改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)。2.4 培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。2.4.1無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支(瓶)，培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。2.4.2 靈敏度檢查金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、 枯草芽孢桿菌、生孢梭菌接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（12ml、9支其中1支空白）中3035培養(yǎng)3天，逐日觀察。白色念珠菌、黑曲霉接種至改良馬丁培養(yǎng)基（9ml、 5支其中1支空白）中2328培養(yǎng)5天，逐日觀察。結(jié)果判斷：空白對照管應(yīng)無菌生長，

16、加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。3. 稀釋液、沖洗液及其制備方法4. 方法驗(yàn)證試驗(yàn)?zāi)康模?)證明所采用的方法適合于該藥品的無菌檢查2)確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)。3)確保在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，該供試品的無菌檢查法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。4.1 菌種4.1.1菌種的復(fù)活4.1.2 菌液制備(一般當(dāng)日使用)4.1.3菌液的稀釋4.1.4菌液的菌數(shù)確認(rèn)4.3 薄膜過濾法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)將規(guī)定量的供試品按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入試驗(yàn)菌（小于100cf

17、u），過濾。取出濾膜接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取一濾桶，不過濾供試品，其它操作同上，作為陽性對照。將含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定溫度培養(yǎng)35天。各試驗(yàn)菌及相應(yīng)的培養(yǎng)基逐一進(jìn)行驗(yàn)證4.4 直接接種法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，分別接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的改良馬丁培養(yǎng)基4管，分別接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入規(guī)定量的供試品，另1管作為陽性對照，按規(guī)定的溫度培養(yǎng)35天。4.5 結(jié)果判斷（驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)）與對照管比較，如含供試品各容器中的

18、試驗(yàn)菌均生長良好，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查法和檢驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用?？刹捎茫?1)增加沖洗量2)增加培養(yǎng)基的用量3)使用中和劑4)更換濾膜品種消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）1培養(yǎng)基的保存2培養(yǎng)溫度3培養(yǎng)基的適用性檢查4薄膜過濾法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)5直接接種法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后

19、自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第5次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第三章 無菌檢查第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1掌握藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查的內(nèi)容。2熟悉藥品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。3熟悉無菌檢查的范圍。4掌握無菌檢查法。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】1無菌檢查法及SOP?！倦y點(diǎn)】SOP。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、圖片【教學(xué)內(nèi)容】5. 供試品的無菌檢查5.1 無菌檢查法（5分） 包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。進(jìn)行供試品無菌檢查時(shí)，所采用的檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。 5.2 檢驗(yàn)數(shù)量與檢驗(yàn)量（10分）檢驗(yàn)數(shù)量：指一次試驗(yàn)所用T最小包裝的數(shù)量

20、。 抗生素類藥與非抗生素類藥品的最少檢驗(yàn)量是相同的。表1、表2、表3中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽性對照試驗(yàn)的供試品用量，也不包括驗(yàn)證試驗(yàn)用量。若采用薄膜過濾法，應(yīng)增加12的最小檢驗(yàn)數(shù)量作陽性對照用。只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品1支(或瓶)作陽性對照用。檢驗(yàn)量：指一次試驗(yàn)所用T的總量（g或ml) 。每份培養(yǎng)基接種供試品的量按表2、表3規(guī)定。表3上市抽驗(yàn)樣品（固體制劑）的最少檢驗(yàn)量 5.3 陽性對照和陰性對照（5分）陽性對照（） 根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌（小于100cfu），4872h應(yīng)生長良好。無抑菌作用及抗革蘭氏陽性菌的T-金黃色葡萄球菌抗革

21、蘭氏陰性菌的T-大腸埃希菌抗厭氧的T-生孢梭菌抗真菌的T-白色念珠菌陰性對照（） 相應(yīng)溶劑和稀釋液同法操作不得有菌生長5.4 供試品處理及接種培養(yǎng)基（35分）5.4.1 薄膜過濾法 薄膜過濾法應(yīng)優(yōu)先采用封閉式薄膜過濾器，也可使用一般薄膜過濾器。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，且總沖洗量不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。水溶液供試品可溶于水的固體制劑供試品 -內(nèi)酰胺類抗生素供試品非水溶性制劑供試品可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品 無菌氣（噴）霧劑

22、供試品 具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供試品 混懸液等非澄清水溶液供試品 -內(nèi)酰胺類或磺胺類供試品 敷料供試品 滅菌醫(yī)用器具供試品 5.5 培養(yǎng)及觀察（10分）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基于3035；改良馬丁培養(yǎng)基的于2328。均培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。5.6 結(jié)果判斷（10分）培養(yǎng)期結(jié)

23、束后，陽性對照管顯渾濁但經(jīng)確證有菌生長，陰性對照管澄清，才可根據(jù)結(jié)果判斷。 符合規(guī)定 供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定。不符合規(guī)定 供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。 試驗(yàn)結(jié)果無效（即生長的微生物非供試品所含）當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件 (1) 無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；(2) 回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；(3) 陰性對照管有菌生長；(4) 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。四、報(bào)告書寫（10分）本節(jié)小結(jié)：（5分鐘）1陽性

24、對照和陰性對照2供試品處理及接種培養(yǎng)基3培養(yǎng)及觀察4結(jié)果判斷作 業(yè)1藥品的衛(wèi)生學(xué)檢查包括幾方面？2無菌檢查法概念？3常用的無菌檢查法及適用范圍?4p28.3主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第6次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第四章 藥品的微生物限度檢查法第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1熟悉微生物總數(shù)檢查的概述。2掌握微生物總數(shù)檢查的注意要點(diǎn)。3熟悉藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。4掌握微生物的總數(shù)檢查。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】微生物總數(shù)檢查的注意要點(diǎn)。微生物

25、的總數(shù)檢查及SOP。【難點(diǎn)】微生物的總數(shù)檢查及SOP。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】第一節(jié) 必備知識（20分）微生物限度檢查法定義：微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括：細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)及控制菌檢查。實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件要求：在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。培養(yǎng)溫度： 常用的微生物限度檢查法：平皿法、薄膜過濾法。第二節(jié) 實(shí)踐操作（05版藥典微生物限度檢查法）一、檢驗(yàn)量（10分）檢驗(yàn)量：即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g

26、、ml或cm2）。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；化學(xué)膜劑為100cm2；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。要求檢查沙門菌的供試品，其檢驗(yàn)量應(yīng)增加10g或 10ml。二、供試液的制備（50分）1液體供試品取供試品10ml，加pH7.0無菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。2固體、半固體或粘稠性供試品 取供試品 10g，加 PH7.0無菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為 l:10的供試液。必要時(shí)加適量的無菌聚

27、山梨酯80，并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。 3需用特殊供試液制備方法的供試品（1）非水溶性供試品方法1 取供試品5g（或5ml），加至含溶化的（溫度不超過45）5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團(tuán)后，慢慢加入45的PH7.0無菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1:20的供試液。 方法2 取供試品10g，加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯（制法見附錄H無菌檢查法中供試品的無菌檢查項(xiàng)下）和無菌玻璃珠的適宜容器中，必要時(shí)可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45的PH7.0無菌氯化鈉一

28、蛋白胨緩沖液100ml，振搖510分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1:10的供試液。（2）膜劑供試品取供試品100cm2，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液100ml（必要時(shí)可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為 1:10的供試液。（3）腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品 取供試品10g，加PH6.8無菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液（用于結(jié)腸溶制劑）至100ml，置45水浴中，振搖，使溶解，作為 1:10的供試品。（4）氣霧劑、噴霧劑供試品 取規(guī)定量供試品，置冰凍室冷凍約1小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使

29、拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的PH7.0無菌氯化鈉一蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無菌聚山梨酯80）中，混勻，取相當(dāng)于10g或10ml的供試品，再稀釋成1:10的供試液。（5）具抑菌活性的供試品當(dāng)供試品有抑菌活性時(shí)，應(yīng)消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。常用的方法如下：培養(yǎng)基稀釋法 取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀釋級的供試液2ml，每1ml供試液可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每1ml供試液所注的平皿中生長的菌數(shù)之和即為1ml的菌落數(shù)，計(jì)算

30、每1ml供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù)；控制菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。離心沉淀集菌法 取一定量的供試液，3000轉(zhuǎn)分離心20分鐘（供試液如有沉淀，先以500轉(zhuǎn)分離心5分鐘，取全部上清液再離心），棄去上清液，取底部集菌液約2ml，加稀釋液補(bǔ)至原量。薄膜過濾法 見細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的“薄膜過濾法”。中和法 凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養(yǎng)基中。本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）1微生物限度檢查法定義2檢查項(xiàng)目包括3常用的微生物限度檢查法4檢驗(yàn)量5供試液的制備作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 20

31、10年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第7次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第四章 藥品的微生物限度檢查法第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1熟悉微生物總數(shù)檢查的概述。2掌握微生物總數(shù)檢查的注意要點(diǎn)。3熟悉藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。4掌握微生物的總數(shù)檢查。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】微生物總數(shù)檢查的注意要點(diǎn)。微生物的總數(shù)檢查及SOP?！倦y點(diǎn)】微生物的總數(shù)檢查及SOP。教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】三、細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)（一）計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（15分鐘）驗(yàn)證

32、的目的：確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定。就是要對每個(gè)樣品使用適宜的檢驗(yàn)方法，順利的檢出樣品中污染的各種類型的菌。 驗(yàn)證用菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草桿菌。菌株選擇的原則：代表性,普遍性,低或非致病性,標(biāo)準(zhǔn)菌株(或該藥品中常見的污染菌)。菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。菌液制備：50100cfu/ml。1、計(jì)數(shù)驗(yàn)證用菌種2、菌液的制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2448小時(shí)。接

33、種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)57天。上述培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50100cfu(菌落形成單位)的菌懸液。3、驗(yàn)證方法（30分鐘） 所有驗(yàn)證方法的操作均應(yīng)在陽性接種間。 驗(yàn)證方法包括：細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)法的驗(yàn)證、控制菌檢查方法的驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌株每次試驗(yàn)的回收率。（1）試驗(yàn)組 平皿法計(jì)數(shù)時(shí)：取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級供試液1ml和50100CFU試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。薄膜過濾法計(jì)數(shù)時(shí)：取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗

34、，在最后一次的沖洗液中加入50100 CFU試驗(yàn)菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。（2）菌液組 測定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。（3）供試品對照組 取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。（4）稀釋劑對照組 若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時(shí)，應(yīng)增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí)，可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗(yàn)菌，使最終菌濃度為每lml供試液含50100CFU，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測定其菌數(shù)。4、結(jié)果判斷（10分鐘）在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對照組的菌回收率應(yīng)均不低于70%。試驗(yàn)組的菌回收率應(yīng)均不低于70%。照

35、該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測定供試品細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)。若任一次試驗(yàn)組的菌回收率低于70%，應(yīng)采取培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法 或聯(lián)合使用這些方法消除抑菌成分，并重新驗(yàn)證。（二）供試品檢查法 計(jì)數(shù)方法包括平皿法和薄膜過濾法 檢查時(shí)，按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測定。1平皿法（5分鐘）常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法都是平皿法。供試液通過離心沉淀以后也可用平皿法檢查。采用平皿法進(jìn)行菌數(shù)測定時(shí)，應(yīng)取適宜的連續(xù)23個(gè)稀釋級的供試液。陰性對照試驗(yàn)取試驗(yàn)用的稀釋液1ml置無菌平皿中，注入培養(yǎng)基，凝固，倒置培養(yǎng)。每種計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個(gè)平板（共4個(gè)平板），均不得

36、有菌生長。培養(yǎng)與計(jì)數(shù)在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果。 含蜂蜜、王漿的液體制劑：用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵母菌數(shù)，合并計(jì)數(shù)。平皿法菌數(shù)報(bào)告規(guī)則2薄膜過濾法（20分鐘）濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45m，直徑一般為50mm。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。 陰性對照試驗(yàn)：取試驗(yàn)用的稀釋液1ml照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得

37、有菌生長。培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過100個(gè)。 薄膜過濾法菌數(shù)報(bào)告規(guī)則（三）結(jié)果判斷（10分鐘）供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，應(yīng)從同一批樣品中隨機(jī)抽樣，獨(dú)立復(fù)試兩次，以3次結(jié)果的平均值報(bào)告菌數(shù)。眼用制劑檢出霉菌和酵母菌數(shù)時(shí)，須以兩次復(fù)試結(jié)果均不得長菌，方可判供試品的霉菌和酵母菌數(shù)符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定。 （四）報(bào)告書寫（5分鐘）本節(jié)小結(jié)：（5分鐘）1供試品檢查法2結(jié)果判斷作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課

38、后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第8次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第五章 控制菌及螨類檢查第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1.掌握大腸埃希菌的檢查。2.熟悉控制菌檢查的意義。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】大腸埃希菌的檢查及過程?！倦y點(diǎn)】1控制菌檢查的方法教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】一、控制菌檢查藥典收載的控制菌：大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌。（一）控制菌檢查方法的驗(yàn)證（20分鐘）1、控制菌試驗(yàn)菌株：2、菌液制備用0.9%無菌氯化鈉溶液制每1ml含菌數(shù)為10100cfu的菌懸液。3、驗(yàn)證方法(1）試驗(yàn)組（

39、2）陰性菌對照組設(shè)立陰性菌對照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專屬性。方法同試驗(yàn)組。（3）驗(yàn)證結(jié)果判斷陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查。若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。（二）供試品檢查法（60分鐘）供試品的控制菌檢查應(yīng)按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行，增菌培養(yǎng)基的實(shí)際用量同控制菌檢查方法的驗(yàn)證。 1、陽性對照試驗(yàn)2、陰性對照試驗(yàn) 3、控制菌檢查基本程序：供試液制備增菌培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基（分離）培養(yǎng)挑取疑似菌落（純培養(yǎng)）生化試驗(yàn)報(bào)告

40、結(jié)果 控制菌檢查：大腸埃希菌檢驗(yàn)程序供試液制備BL增菌培養(yǎng)取供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g，1ml，10cm2)，直接或處理后接種至適量的(不少于100ml）的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24小時(shí)，必要時(shí)可延長至48小時(shí)。檢查大腸埃希菌取上述培養(yǎng)物0.2ml，接種至含5ml MUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)，于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外線下觀察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽性;呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。大腸埃希菌結(jié)果判斷

41、結(jié)果報(bào)告當(dāng)陰性對照試驗(yàn)呈陰性，陽性對照試驗(yàn)MUG呈陽性。供試品MUG陽性、靛基質(zhì)陽性，報(bào)告1g或1ml供試品檢出大腸埃希菌; MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，報(bào)告1g或1ml供試品未檢出大腸埃希菌。MUG陽性、靛基質(zhì)陰性。IMViC試驗(yàn)為一十一一、革蘭陰性桿菌，報(bào)告1g或lml供試品檢出大腸埃希菌；MUG陰性、靛基質(zhì)陽性、 IMViC試驗(yàn)為十十一一、革蘭陰性桿菌，報(bào)告1g或1ml供試品檢出大腸埃希菌。不符合報(bào)告1g或1ml供試品未檢出大腸埃希菌。大腸菌群的檢查只對中成藥制劑：含原藥材粉未、豆豉、神曲的中藥口服制劑必需檢。大腸菌群的檢查程序：供試品供試液膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)酸產(chǎn)氣EMB或MACL（分離）

42、培養(yǎng)乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 產(chǎn)酸產(chǎn)氣報(bào)告結(jié)果。本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）大腸埃希菌：檢驗(yàn)程序結(jié)果報(bào)告作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第9次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第五章 控制菌及螨類檢查第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1.掌握沙門菌和、銅綠假單胞菌的檢查。2.熟悉控制菌檢查的意義。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】大腸埃希菌的檢查及過程?！倦y點(diǎn)】1控制菌檢查的方法教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】一、控制菌

43、檢查藥典收載的控制菌：沙門菌、銅綠假單胞菌。（一）控制菌檢查方法的驗(yàn)證（20分鐘）1、控制菌試驗(yàn)菌株：2、菌液制備用0.9%無菌氯化鈉溶液制每1ml含菌數(shù)為10100cfu的菌懸液。3、驗(yàn)證方法(1）試驗(yàn)組（2）陰性菌對照組設(shè)立陰性菌對照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專屬性。方法同試驗(yàn)組。（3）驗(yàn)證結(jié)果判斷陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查。若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。（二）供試品檢查法（60分鐘）供試品的控制

44、菌檢查應(yīng)按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行，增菌培養(yǎng)基的實(shí)際用量同控制菌檢查方法的驗(yàn)證。 1、陽性對照試驗(yàn)2、陰性對照試驗(yàn) 3、控制菌檢查 (1)沙門菌檢驗(yàn)程序：供試品供試液營養(yǎng)肉湯 (37，18-24h)四硫磺酸鹽增菌液 (37，18-24h )分離培養(yǎng)，DHL瓊脂(或SS瓊脂平板)或EMB瓊脂平板(或麥康凱瓊脂平板) (37，24h-48h )初步確定試驗(yàn)，TSI瓊脂斜面(37，18-24h )生化反應(yīng)（氰化鉀試驗(yàn) 賴氨酸脫羧試驗(yàn) 靛基質(zhì)試驗(yàn) 尿素酶試驗(yàn)等）血清學(xué)試驗(yàn)革蘭染色鏡檢報(bào)告。（2）銅綠假單胞菌檢驗(yàn)程序：供試液的制備增菌培養(yǎng)(膽鹽乳糖培養(yǎng)基BL中)分離培養(yǎng)(溴代十六烷基三甲銨培養(yǎng)基)純培養(yǎng)(營養(yǎng)瓊

45、脂斜面)染色鏡檢(G-無芽胞桿菌)生化試驗(yàn)(氧化酶試驗(yàn)、綠膿菌素試驗(yàn)、硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)、42生長試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn))報(bào)告結(jié)果。結(jié)果報(bào)告革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)十，綠膿菌素試驗(yàn)十，報(bào)告1g或1ml供試品檢出銅綠假單胞菌。革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)十，綠膿菌素試驗(yàn)為一，硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)十，42生長試驗(yàn)十，明膠液化試驗(yàn)十，報(bào)告1g或1ml供試品檢出銅綠假單胞菌。與不符報(bào)告1g或1ml供試品未檢出銅綠假單胞菌。本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）1沙門菌：檢驗(yàn)程序結(jié)果報(bào)告2銅綠假單胞菌：檢驗(yàn)程序結(jié)果報(bào)告作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 200

46、2年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第10次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第五章 控制菌及螨類檢查第一節(jié) 必備知識第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1.掌握金黃色葡萄球菌、梭菌的檢查。2.熟悉控制菌檢查的意義。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】大腸埃希菌的檢查及過程?！倦y點(diǎn)】1控制菌檢查的方法教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、錄像【教學(xué)內(nèi)容】一、控制菌檢查藥典收載的控制菌：金黃色葡萄球菌、梭菌。（一）控制菌檢查方法的驗(yàn)證（20分鐘）1、控制菌試驗(yàn)菌株：2、菌液制備用0.9%無菌氯化鈉溶液制每1ml含菌數(shù)為10100cfu的菌懸液。3、驗(yàn)證方法(1）

47、試驗(yàn)組（2）陰性菌對照組設(shè)立陰性菌對照組是為了驗(yàn)證該控制菌檢查方法的專屬性。方法同試驗(yàn)組。（3）驗(yàn)證結(jié)果判斷陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。若試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查。若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。（二）供試品檢查法（60分鐘）供試品的控制菌檢查應(yīng)按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行，增菌培養(yǎng)基的實(shí)際用量同控制菌檢查方法的驗(yàn)證。 1、陽性對照試驗(yàn)2、陰性對照試驗(yàn) 3、控制菌檢查基本程序：供試液制備增菌培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基（分離）培養(yǎng)挑取疑似菌落（純培養(yǎng)）生化

48、試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果 控制菌檢查：（1）金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序：供試品供試液10ml亞碲酸鈉肉湯或營養(yǎng)肉湯100ml增菌培養(yǎng)卵黃高鹽瓊脂平板或甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基分離培養(yǎng)（含有高鹽作用是抑制革蘭氏陰性短桿菌生長，但不影響金黃色葡萄球菌正常生長）普通肉湯瓊脂斜面純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。（2）梭菌的檢查1. 樣品的前處理2. 增菌培養(yǎng)3. 分離4. 染色、過氧化氫酶試驗(yàn) 本節(jié)小結(jié)：（10分鐘）1金黃色葡萄球菌：檢驗(yàn)程序結(jié)果報(bào)告2梭菌：檢驗(yàn)程序結(jié)果報(bào)告作 業(yè)主要參考資 料1中國藥典 2010年版二部2中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范 2010年版 3生物藥物分析 2002年版 白秀峰主編 中國醫(yī)藥

49、科技出版社課后自我總結(jié)分析藥品生物檢定技術(shù)教案第11次課 學(xué)時(shí)章 節(jié)第五章 控制菌及螨類檢查第二節(jié) 實(shí)踐操作教學(xué)目的和要求1.掌握螨類的檢查。教 學(xué)重 點(diǎn)難 點(diǎn)【重點(diǎn)】螨類的檢查及SOP?！倦y點(diǎn)】1控制菌檢查的方法2螨類檢查的方法教 學(xué)過 程【教學(xué)方法】講授法、提問法、練習(xí)法【輔助手段】多媒體教學(xué)、圖片【教學(xué)內(nèi)容】二、螨類檢查（5分鐘）螨的體形微小，多在lnm以下。一般呈卵形或橢圓形，無頭、胸、腹界限。幼螨足三對，若螨足四對，成螨足多數(shù)為四對。足通常由六節(jié)組成?？谄飨蚯岸送怀?，螯肢常呈螯鉗狀，有齒，由23節(jié)組成。須肢節(jié)數(shù)因種類而異，由12節(jié)到5節(jié)組成。有些種類在軀體前端或兩側(cè)有12對眼。軀體兩

50、側(cè)對稱，表面被有堅(jiān)硬的幾丁質(zhì)的板。體表有剛毛，它的形狀、數(shù)目及彼此間長短比例和排列位置因種類而異?；铗酁槁詭О咨Я恋哪覡钚◇w。螨類與蜘蛛、昆蟲（如書虱）相比，其外形比較近似，因此，必須注意它們之間的主要區(qū)別。（一）活螨的檢查方法（20分鐘）一般分為直檢法、漂浮法和分離法三種。 1、直檢法：使用器具、方法2、漂浮法：使用器具、方法3、分離法：使用器具、方法小結(jié)：在上述三種方法中，第l、2法簡單易行，而且效果好，檢出率高，比較常用。而第3種方法，較費(fèi)時(shí)，效率低，一般較少采用。（二）各種劑型藥品的活螨檢查（30分鐘）供試品取樣量，一般供試品每批抽檢兩瓶。以單劑量、一日劑量包裝的樣品，每批抽取兩盒（每盒檢查34個(gè)最小包裝單位）；貴重或微量包裝的供試品，取樣量可酌減。必要時(shí)，可再次抽樣，或選取有疑問的樣品進(jìn)行檢查。大蜜丸小蜜丸、水丸有蟲粉現(xiàn)象的丸、片散劑、沖劑和膠囊