獸藥中非法添加硝基咪唑類藥物檢查方法2020

1、獸藥中非法添加硝基咪唑類藥物檢查方法1 適用范圍1.1本方法適用于鹽酸多西環(huán)素可溶性粉和硫酸新霉素可溶性粉中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢查。1.2用于其他獸藥制劑中非法添加羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、 奧硝唑或異丙硝唑檢查時(shí)，需進(jìn)行空白試驗(yàn)和檢測(cè)限測(cè)定。2 檢查方法照高效液相色譜法（中國(guó)獸藥典一部附錄0512）測(cè)定。色 譜 條 件 與 系 統(tǒng) 適 用 性 試 驗(yàn)采 用 十 八 烷 基 硅 烷 鍵 合 硅 膠 為 填 充 劑 （ AgilentEclipsePlus C18 4.6mm ×250mm，5m色譜柱或其他等效的色譜柱）；以甲醇為流動(dòng)相

2、A，以水為流動(dòng)相B，流速為每分鐘0.8ml ，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫；柱溫25；二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，采集波長(zhǎng)范圍為200nm 400nm，分辨率為 1.2nm，記錄 320nm 波長(zhǎng)處的色譜圖。供試品溶液中羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、 地美硝唑、 奧硝唑和異丙硝唑色譜峰與相鄰色譜峰分離度應(yīng)符合要求。時(shí)間B(%)(min)A(%)020805208012406020406020.1100025100025.12080302080測(cè)定法取供試品1.0g ，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml，超聲處理10 分鐘， 冷卻至室溫，濾過；取續(xù)濾液 5.0ml ，置 50ml 量瓶中，用 30%甲醇溶液稀釋至刻度

3、，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別取羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑和異丙硝唑?qū)φ掌犯骷s25mg置 50ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度；取適量，用30%甲醇溶液定量稀釋制成每1ml 中各含約50g 的溶液，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液和供試品各20l ，分別注入液相色譜儀， 同時(shí)記錄色譜圖和光譜圖。必要時(shí)，可調(diào)整供試品溶液或?qū)φ掌啡芤旱臐舛?，使兩者峰面積接近。通過與對(duì)照品溶液色譜圖保留時(shí)間、光譜圖的對(duì)比， 確定供試品中是否含有羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。3 結(jié)果判定3.1供試品溶液色譜圖中如出現(xiàn)與相應(yīng)對(duì)照品溶液色譜圖中保留時(shí)間一致的色譜峰（差異不大于

4、77; 5%），且為單一物質(zhì)峰；在規(guī)定的采集波長(zhǎng)范圍內(nèi)，兩者紫外光譜圖匹配，且最大吸收波長(zhǎng)一致（差異不大于±2 nm），判定為檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。3.2供試品溶液色譜圖中峰保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品峰相同，但峰面積小于檢測(cè)限峰面積，判定為未檢出羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑。4 檢測(cè)限本方法羅硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑、奧硝唑或異丙硝唑的檢測(cè)限為1mg/g。附圖硝基咪唑非法添加物檢查AFCDelay 2020-03-02 15-31-57202003020000002.D)mAU40043006522001310001020min

5、圖 1 對(duì)照品溶液色譜圖1.羅硝*DAD1,唑5.4582(39.甲.9mAU,硝唑-) 參3考.值替=0硝.005唑&10.5114.地為ONLINEEDITED美硝唑-0185.D奧硝唑 6.異丙硝唑mAU403020803<852<100220240260280300320340360380nm圖 2 羅硝唑光譜圖*DAD1, 5.945 (36.0 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.DmAU84013<302046102<0220240260280300320340360380nm圖 3

6、甲硝唑光譜圖*DAD1, 6.565 (31.5 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.DmAU35613<3025201510462<50220240260280300320340360380nm圖 4 替硝唑光譜圖mAU50403020100mAU2520151050mADAD1, 7.585 (47.1 mAU, - )參考值 =0.005 & 10.511為 ONLINEEDITED-018.D023<462<220240260280300320340360380nm圖 5 地美硝唑光譜圖*DAD1, 10.978 (21.9 mAU, - )參考值 =10.511 & 11.445為 ONLINEEDITED-018.D813<262<220240260280300320340360380nm圖 6 奧硝唑光譜圖*DAD1, 14.171 (12.9 mA