熒光定量PCR的原理及臨床應用學生講課

1、會計學1熒光定量熒光定量PCR的原理及臨床應用學生講的原理及臨床應用學生講課課功夫功夫耳：認真聽老師的說明和講解耳：認真聽老師的說明和講解看：仔細看老師的操作看：仔細看老師的操作問：有疑問要多提問，多討論問：有疑問要多提問，多討論心：要用心去思考心：要用心去思考日月：要每天每月堅持做到日月：要每天每月堅持做到5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT55CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5加熱加熱5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGA

2、CGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT降溫降溫5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGAGGTGACGGAGAG GGA

3、CTCGACACT恒溫恒溫前前15個循環(huán)熒光信號的均值，可個循環(huán)熒光信號的均值，可手動調節(jié)選擇手動調節(jié)選擇默認是第默認是第315個循環(huán)的熒光信號的標個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的準偏差的10倍，也可手動調節(jié)倍，也可手動調節(jié)擴增過程中，產(chǎn)物的熒光信號達到設定的閾值擴增過程中，產(chǎn)物的熒光信號達到設定的閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)數(shù)時所經(jīng)過的擴增循環(huán)數(shù)ThresholdBaselineCt value熒光強度熒光強度Rn擴增循環(huán)數(shù)擴增循環(huán)數(shù)對數(shù)增長期對數(shù)增長期左圖為左圖為5個數(shù)量級的標準品擴增后得到的熒光曲線，個數(shù)量級的標準品擴增后得到的熒光曲線，右圖以右圖以Ct值為縱坐標，值為縱坐標，lgXs為橫坐標，可

4、計算得出標準曲線為橫坐標，可計算得出標準曲線FQ10nmFFluorophore,熒光基團熒光基團QQuencher，淬滅基團淬滅基團FQ10nm（12 /3會引起雙鏈之間會引起雙鏈之間氫鍵解離而變性氫鍵解離而變性 功夫功夫5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT降溫降溫5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTCGGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGA33GGTGACGGAGAG GGACTCGACACT5CCACTGCCTCTC CCTGAGCTGTGAGGTGACGGAGAG GGACTCGACACT恒溫恒溫氣溶氣溶膠污膠污染物染物50 2min， 95 滅活加入加入UNG酶酶4放放置或用置或用于于PCR振蕩混勻振蕩混勻510