環(huán)境污染物的一般毒性及其評價方法

1、.1第五章 環(huán)境污染物的一般毒性及其評價生態(tài)毒理學(xué)生態(tài)毒理學(xué) (Ecotoxicology)(Ecotoxicology). .2 2一般毒性和特殊毒性一般毒性和特殊毒性一般毒性一般毒性特殊毒性特殊毒性急性毒性急性毒性亞慢性毒性和慢性毒性亞慢性毒性和慢性毒性蓄積毒性蓄積毒性局部毒性局部毒性致癌性致癌性致突變作用致突變作用生殖和發(fā)育毒性生殖和發(fā)育毒性. .3 35.1 毒性評價的實驗基礎(chǔ)毒性評價的實驗基礎(chǔ) 流行病學(xué)資料和臨床觀察，可以獲得環(huán)境污染物對人類健康的危害。 毒理學(xué)實驗為闡明毒性特點、毒作用機制、劑量毒性特點、毒作用機制、劑量-反反應(yīng)關(guān)系，預(yù)測對人類健康的潛在危害一般規(guī)律應(yīng)關(guān)系，預(yù)測對人

2、類健康的潛在危害一般規(guī)律，為制訂衛(wèi)生標準提供科學(xué)依據(jù)。一般毒性實驗 急性毒性實驗急性毒性實驗 亞慢性和慢性毒性實驗亞慢性和慢性毒性實驗 蓄積實驗蓄積實驗 . .4 4毒理學(xué)試驗?zāi)康亩纠韺W(xué)試驗?zāi)康?. 闡明受試物毒性表現(xiàn)和性質(zhì)2. 闡明毒性作用的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))3. 確定毒作用的靶器官4. 闡明毒性機制5. 確定損害的可逆性 5.1 毒性評價的實驗基礎(chǔ)毒性評價的實驗基礎(chǔ). .5 5一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇1.實驗動物實驗動物(laboratory animal) 經(jīng)人工培育，對其攜帶微生物實行控制，遺傳背景明確，來源清楚，可用于科學(xué)研究的動物。Wistar 大鼠大鼠豚鼠豚鼠5.

3、1 毒性評價的實驗基礎(chǔ)毒性評價的實驗基礎(chǔ). .6 62.選擇實驗動物的基本原則選擇實驗動物的基本原則1.毒性反應(yīng)及代謝特點與人類相近2.自然壽命適宜3.易于飼養(yǎng)和實驗操作4.經(jīng)濟并易于獲得5.對受試物敏感一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .7 73.毒理學(xué)實驗常用動物主要品系毒理學(xué)實驗常用動物主要品系(strain）(1) 近交系動物近交系動物 采用連續(xù)20代以上兄妹間交配或親子交配而培育的純品系動物。 津白、津白165，BALB/C，C3HC57B/6J小鼠等。BALB/cA津白一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .8 8(2) 突變系動物突變系動物 動物在生長繁殖過程中，

4、通過自然突變自然突變或人工人工定向突變定向突變的辦法，使其某個基因發(fā)生突變，某個基因發(fā)生突變，并喪失喪失了原有的正常功能了原有的正常功能。 這種突變的基因可以世代相傳世代相傳并保持遺傳基因保持遺傳基因特性特性的品系動物。無胸腺裸鼠一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .9 9 兩個不同近交系兩個不同近交系之間有目的進行交配，所產(chǎn)生的雜交第一代第一代動物。(3) 雜交群動物雜交群動物 5年以上年以上不從外部引進新血緣，僅由同一品系的動物在固定場所保存繁殖的動物群。 昆明種小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、Wistar大鼠、SD大鼠、青紫藍兔、新西蘭兔等。(4) 封閉群動物封閉群動物一一. .

5、 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .10104.微生物控制級別微生物控制級別(1) 無菌動物無菌動物 體內(nèi)外均無任何微生物和寄生蟲的動物。(2) 無特定病原體動物（無特定病原體動物（SPF） 體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動物。容許攜帶非特定微生物，但不能攜帶傳染性病原菌。(3) 清潔動物清潔動物 最低限度疾病動物。動物體內(nèi)外不攜帶人畜共患的病人畜共患的病原體或動物傳染病病原體原體或動物傳染病病原體。抗體檢查常發(fā)現(xiàn)腦脊髓質(zhì)炎病毒、鼠肝炎病毒等抗體。但不應(yīng)有臨床癥狀、病理改變及自然死亡。飼養(yǎng)在半屏蔽系統(tǒng)。一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .11111.年齡2.性別 3.生理狀態(tài) 4.

6、健康狀況 5.個體選擇要求個體選擇要求一一. . 實驗動物的選擇實驗動物的選擇. .1212可根據(jù)人類可根據(jù)人類實際接觸方式實際接觸方式和和受試物的理化性質(zhì)受試物的理化性質(zhì)等因素，等因素，選擇合適的染毒方式。選擇合適的染毒方式。1.1.經(jīng)口染毒經(jīng)口染毒 灌胃，喂飼，膠囊2.2.經(jīng)呼吸道染毒經(jīng)呼吸道染毒 靜式吸入染毒，動式吸入染毒3.3.經(jīng)皮染毒經(jīng)皮染毒4.4.皮下、靜脈注射和腹腔內(nèi)注射皮下、靜脈注射和腹腔內(nèi)注射 5.5.其他其他 二二. . 常用染毒方式常用染毒方式. .1313三三. . 毒理學(xué)試驗中的常用對照組毒理學(xué)試驗中的常用對照組1.未處理對照組未處理對照組( (空白對照組空白對照組)

7、 ) 本底值，質(zhì)量控制2.陰性陰性( (溶劑賦形劑溶劑賦形劑) )對照對照 與染毒組比較的基礎(chǔ) 3.陽性對照陽性對照 檢測試驗體系的有效性有效性和準確性準確性4.歷史性對照歷史性對照 檢查試驗體系的穩(wěn)定性穩(wěn)定性，即進行實驗室質(zhì)量控制和保證質(zhì)量控制和保證 . .1414四四. . 受試樣品要求受試樣品要求 用用同一種同一種、同一批號同一批號受試物受試物 受試物受試物成分成分和和配方配方必須固定必須固定 如存在異構(gòu)體混合物，則要求如存在異構(gòu)體混合物，則要求異構(gòu)體比例異構(gòu)體比例 必須固定必須固定 活性成分的含量活性成分的含量和和雜質(zhì)的濃度雜質(zhì)的濃度應(yīng)固定應(yīng)固定 受試物保質(zhì)期內(nèi)受試物保質(zhì)期內(nèi)不發(fā)生分解

8、不發(fā)生分解，摻入到飼料，摻入到飼料 惑溶液中也要求惑溶液中也要求穩(wěn)定穩(wěn)定. .1515五五. . 實驗結(jié)果的判斷實驗結(jié)果的判斷1.實驗組與對照組比較實驗組與對照組比較有無顯著性差異有無顯著性差異2.劑量劑量-反應(yīng)關(guān)系反應(yīng)關(guān)系和和劑量劑量-效應(yīng)關(guān)系效應(yīng)關(guān)系3.其他其他相關(guān)參數(shù)相關(guān)參數(shù)的改變的改變4.是否在是否在“正常正?！敝捣秶捣秶?. .1616一一.急性毒性急性毒性 急性毒性(acute toxicity)指機體一次一次接觸或在24小時內(nèi)多次小時內(nèi)多次接觸化學(xué)物后，短期內(nèi)引起的毒效應(yīng)。死亡行為死亡行為生理生化指標的異常變化生理生化指標的異常變化 病理學(xué)改變病理學(xué)改變5.1 5.1 急性毒性

9、及其評價急性毒性及其評價. .1717急性毒性實驗?zāi)康募毙远拘詫嶒災(zāi)康?1.致死劑量致死劑量、急性閾劑量急性閾劑量、初步估計對人類毒對人類毒害的危險性害的危險性。 2.闡明急性毒性強度急性毒性強度、特征特征、可能的靶器官可能的靶器官、致死原因致死原因和劑量反應(yīng)劑量反應(yīng)(效應(yīng)效應(yīng))關(guān)系關(guān)系。 3.體內(nèi)生物轉(zhuǎn)運和轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)運和轉(zhuǎn)化，及其動力學(xué)變化動力學(xué)變化。 4.為設(shè)定蓄積性蓄積性、亞慢性亞慢性、慢性毒性實驗的染慢性毒性實驗的染毒劑量毒劑量、觀察指標觀察指標提供參考依據(jù)。一一. .急性毒性急性毒性. .1818急性毒性參數(shù)急性毒性參數(shù) 1.絕對致死劑量或濃度(LDl00/LC100) 2.最小致死

10、劑量或濃度(MLD/MLC) 3.最大耐受劑量或濃度(MTD、LD0/MTC、LC0) 4.半數(shù)致死劑量或濃度(LD50/LC50) 5.急性毒性LOAEL 6.急性毒性NOAEL 7.急性毒作用帶(Zac) 一一. .急性毒性急性毒性. .1919二二. . 急性毒性實驗的動物選擇急性毒性實驗的動物選擇 健康成年動物 未曾交配或受孕 大鼠(180240g) 小鼠(1825g) 家兔(22.5kg) 貓(1.52.0kg)氣態(tài)毒物的粘膜刺激氣態(tài)毒物的粘膜刺激貓皮膚的局部刺激作用皮膚的局部刺激作用豚鼠，家兔過敏反應(yīng)過敏反應(yīng)豚鼠、家兔、狗、小鼠、貓嘔吐反應(yīng)嘔吐反應(yīng)狗、貓哺乳動物哺乳動物. .202

11、0三三. . 急性毒性實驗染毒方式急性毒性實驗染毒方式1.經(jīng)口經(jīng)口(胃腸道胃腸道)接觸接觸 (1) (1) 一次灌胃體積一次灌胃體積 小鼠小鼠 0.1 0.5ml/10g體重體重 大鼠大鼠 0.5 1.0ml/100g體重體重 (2) (2) 吞咽膠囊吞咽膠囊 家兔及貓、狗等大動物家兔及貓、狗等大動物 實驗動物染毒前應(yīng)實驗動物染毒前應(yīng)禁食禁食，染毒，染毒 后也應(yīng)繼續(xù)禁食后也應(yīng)繼續(xù)禁食3 3 4 4小時。小時。. .21212.經(jīng)呼吸道接觸經(jīng)呼吸道接觸 常溫、常壓下為氣態(tài)，或以常溫、常壓下為氣態(tài)，或以蒸氣態(tài)、氣溶膠、煙、塵狀態(tài)蒸氣態(tài)、氣溶膠、煙、塵狀態(tài)污染生產(chǎn)環(huán)境與生活環(huán)境空氣。污染生產(chǎn)環(huán)境與生

12、活環(huán)境空氣。 靜式染毒靜式染毒 動式染毒動式染毒3.經(jīng)皮膚接觸經(jīng)皮膚接觸 應(yīng)當盡量選擇應(yīng)當盡量選擇皮膚解剖皮膚解剖、生生理與人類較近似理與人類較近似的動物為對象。的動物為對象。家家兔兔和和豚鼠豚鼠為首選，也可用為首選，也可用大鼠大鼠代替。代替。 三三. . 急性毒性實驗染毒方式急性毒性實驗染毒方式. .2222四四. . 半數(shù)致死量測定程序半數(shù)致死量測定程序1 1 實驗動物實驗動物 性成熟、健康，雌雄各半2 2 化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和毒性參考資料化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和毒性參考資料 3 3 預(yù)試驗預(yù)試驗 求出全活、全死劑量 4 4 正式實驗正式實驗 在求出全活、全死劑量之間設(shè)56個實驗組 組距 1.

13、21.5倍小鼠、大鼠 10只/組、家兔46只/組 如化合物毒性有性別差異，則應(yīng)分別計算雌、雄性動物各自的LD50(LC50)。 . .2323觀察持續(xù)時間和飼養(yǎng)條件觀察持續(xù)時間和飼養(yǎng)條件 觀察期一般為觀察期一般為14天內(nèi)天內(nèi)的總死亡數(shù)。的總死亡數(shù)。 速死性毒物求其速死性毒物求其LD50(LC50)，應(yīng)計算，應(yīng)計算24小時小時的死亡率。的死亡率。 LD50值的表示應(yīng)注明值的表示應(yīng)注明染毒途徑染毒途徑和和觀察時間觀察時間，以便于在進行毒性比較時有可比性。以便于在進行毒性比較時有可比性。 在觀察期間，應(yīng)保障實驗動物有在觀察期間，應(yīng)保障實驗動物有完全的膳食完全的膳食、充足的飲水充足的飲水及及適宜的溫濕

14、度適宜的溫濕度環(huán)境，以防止動環(huán)境，以防止動物出現(xiàn)非中毒性死亡。物出現(xiàn)非中毒性死亡。四四. . 半數(shù)致死量測定程序半數(shù)致死量測定程序. .2424中毒癥狀觀察中毒癥狀觀察 應(yīng)詳細地觀察記錄動物的應(yīng)詳細地觀察記錄動物的中毒癥狀、發(fā)生中毒癥狀、發(fā)生和發(fā)展過程及規(guī)律，死亡前癥狀特點、死亡時和發(fā)展過程及規(guī)律，死亡前癥狀特點、死亡時間間等。等。 很多毒物初期往往很多毒物初期往往初期初期先出現(xiàn)先出現(xiàn)興奮或抑制興奮或抑制現(xiàn)象。應(yīng)注意現(xiàn)象。應(yīng)注意體重變化體重變化。 粘膜刺激癥狀，如出汗、流涎，粘膜刺激癥狀，如出汗、流涎，甚至有血性分泌物，瞳孔改變等。甚至有血性分泌物，瞳孔改變等。四四. . 半數(shù)致死量測定程序半

15、數(shù)致死量測定程序. .2525病理學(xué)檢查和其它指標觀察病理學(xué)檢查和其它指標觀察 在觀察期間中毒死亡動物應(yīng)在觀察期間中毒死亡動物應(yīng)及時解剖，及時解剖，檢查器官有無充血、出血、水腫或其它改變，檢查器官有無充血、出血、水腫或其它改變，并對并對有變化的臟器作病理組織學(xué)檢查有變化的臟器作病理組織學(xué)檢查。 對存活動物在觀察期結(jié)束時，應(yīng)做全部對存活動物在觀察期結(jié)束時，應(yīng)做全部動物解剖，逐一進行病理學(xué)檢查。動物解剖，逐一進行病理學(xué)檢查。四四. . 半數(shù)致死量測定程序半數(shù)致死量測定程序. .2626計算計算LD50和和LD50 95%可信限可信限四四. . 半數(shù)致死量測定程序半數(shù)致死量測定程序. .2727五五

16、. . 急性毒性分級急性毒性分級單位：mg/kgWHO化化學(xué)品毒性分級學(xué)品毒性分級劇毒 1高毒 1中等毒 50低毒 500實際無毒 5000極毒 15000 中國衛(wèi)生部中國衛(wèi)生部根據(jù)大鼠一次經(jīng)口根據(jù)大鼠一次經(jīng)口LD50的急性毒性分級的急性毒性分級. .2828急性毒性閾劑量急性毒性閾劑量( (濃度濃度) ) 一次染毒引起某種毒性反應(yīng)的最小劑量，屬于非致死性指標非致死性指標。未知毒性污染物：未知毒性污染物： 可選擇綜合性、非特異性指標。如體重，活動能力，應(yīng)激狀態(tài)、條件反射等。已知毒性已知毒性比較了解的可選擇最敏感的指標刺激性氣體或蒸汽：刺激性氣體或蒸汽：可選擇眼睛和嗅覺刺激閾濃度。觀察指標的選擇

17、觀察指標的選擇. .2929急性毒性試驗的局限性急性毒性試驗的局限性1.消耗的動物量大動物量大2.獲得的信息有限信息有限3.測得的LD50僅僅是一個近似值近似值4.在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息深入細致的毒性信息。. .3030急性毒性閾劑量實驗方法急性毒性閾劑量實驗方法游泳實驗游泳實驗 反映體力和活動能力刺激閾實驗刺激閾實驗 反映對上呼吸道、眼睛和口腔等粘膜的刺激作用貓置于染毒柜內(nèi)，加入受試物，觀察癥狀30min癥狀：流淚、流締、噴嚏、嗆咳、流涎等50%實驗動物出現(xiàn)癥狀的最小濃度刺激閾濃度刺激閾濃度 水槽

18、 水溫20 動物放入水中，記錄從放入到沉沒5秒所需要的時間 記錄游泳速度游泳速度和游泳姿勢游泳姿勢 . .3131一一. 慢性毒性和亞慢性毒性慢性毒性和亞慢性毒性 在日常生活環(huán)境中，人類接觸環(huán)境污染物的濃度遠在日常生活環(huán)境中，人類接觸環(huán)境污染物的濃度遠低于急性致死濃度，但接觸的時間則較長。低于急性致死濃度，但接觸的時間則較長。 為了為了評價在評價在較長的一段時間內(nèi)反復(fù)接觸低濃度環(huán)境較長的一段時間內(nèi)反復(fù)接觸低濃度環(huán)境污染物的毒性作用，獲得接近于人類實際接觸條件下的污染物的毒性作用，獲得接近于人類實際接觸條件下的毒性資料毒性資料，需進行亞慢性或慢性毒性試驗。，需進行亞慢性或慢性毒性試驗。5.2 環(huán)

19、境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評價環(huán)境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評價. .3232亞慢性毒性(subchronic toxicity) 在一段時間內(nèi)（13個月個月）連續(xù)攝入、較大劑量環(huán)境污染物引起的毒性效應(yīng)。慢性毒性(chronic toxicity) 長期連續(xù)、低劑量攝入環(huán)境污染物（6個月個月終生終生）引起的毒性效應(yīng)。5.2 環(huán)境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評價環(huán)境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評價. .3333二二. . 亞慢性毒性及評價方法亞慢性毒性及評價方法1.在急性毒性試驗的基礎(chǔ)上，在較短時間內(nèi)了解受試物對機體長期作用時的主要毒性性質(zhì)主要毒性性質(zhì)和特點和特點、靶器官靶器官和最大耐受劑

20、量最大耐受劑量2.探討敏感指標敏感指標及其劑量劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系3.為慢性毒性試驗慢性毒性試驗設(shè)計提供依據(jù)。 亞慢性毒性評價目的. .3434實驗動物和分組實驗動物和分組 大鼠或小鼠大鼠或小鼠 健康，幼齡健康，幼齡 每組每組1020只只 雌雄各半雌雄各半染毒途徑染毒途徑染毒劑量和實驗期限染毒劑量和實驗期限1. 1/201/5 LD50范圍內(nèi)設(shè)三個劑量組，設(shè)對照組范圍內(nèi)設(shè)三個劑量組，設(shè)對照組2.無蓄積作用，排泄快的毒物還可適當加大劑量無蓄積作用，排泄快的毒物還可適當加大劑量3.低劑量組動物不會產(chǎn)生可觀察到的毒性反應(yīng)低劑量組動物不會產(chǎn)生可觀察到的毒性反應(yīng)4.高劑量組動物出現(xiàn)明顯

21、的中毒反應(yīng)，但不引起動物死高劑量組動物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)，但不引起動物死 亡（或亡（或10%）5.13個月個月與人類實際接觸的方式和途徑相同與人類實際接觸的方式和途徑相同亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗二二. . 亞慢性毒性及評價方法亞慢性毒性及評價方法. .3535亞慢性毒性實驗觀察指標亞慢性毒性實驗觀察指標1 1 一般性指標一般性指標 體重體重、食物利用率食物利用率、活動能力活動能力等指標等指標2 2 特異指標特異指標 特異性反應(yīng)特異性反應(yīng), ,能更確切地闡明受試物引起的有害影響能更確切地闡明受試物引起的有害影響的的閾劑量閾劑量及及最大無作用劑量最大無作用劑量。應(yīng)盡量選用特異指標。應(yīng)盡量選用特

22、異指標。3 3 血液學(xué)及生化學(xué)指標血液學(xué)及生化學(xué)指標 血常規(guī)血常規(guī)，骨髓細胞成分骨髓細胞成分、血清血清和和尿液生化學(xué)檢查尿液生化學(xué)檢查 4 4 有害物質(zhì)在體內(nèi)的分布、代謝及排泄指標有害物質(zhì)在體內(nèi)的分布、代謝及排泄指標5 5 病理組織學(xué)檢查病理組織學(xué)檢查 死亡的動物應(yīng)作病理檢查。實驗結(jié)束時，全部動物進死亡的動物應(yīng)作病理檢查。實驗結(jié)束時，全部動物進行剖檢，測定行剖檢，測定臟器系數(shù)臟器系數(shù)，應(yīng)特別，應(yīng)特別注意靶器官的變化注意靶器官的變化。 肝、腎等組織肝、腎等組織應(yīng)列為常規(guī)檢查項目。應(yīng)列為常規(guī)檢查項目。二二. . 亞慢性毒性及評價方法亞慢性毒性及評價方法. .3636試驗結(jié)果評價試驗結(jié)果評價1 確定

23、毒性作用確定毒性作用 闡明亞慢性毒性的性質(zhì)、特點、毒性質(zhì)、特點、毒效應(yīng)類型、作用強度和靶器官效應(yīng)類型、作用強度和靶器官。2 確定毒性作用的敏感指標確定毒性作用的敏感指標3 中毒閾劑量和最大無作用劑量中毒閾劑量和最大無作用劑量二二. . 亞慢性毒性及評價方法亞慢性毒性及評價方法. .3737慢性毒性實驗的目的慢性毒性實驗的目的 本實驗?zāi)康氖窃u價環(huán)境污染物在長期、小劑量、在長期、小劑量、反復(fù)作用反復(fù)作用條件下，對機體產(chǎn)生的損害及其特點，確定其慢性毒性閾劑量和最大無作用劑量慢性毒性閾劑量和最大無作用劑量，為制訂環(huán)境中有害物質(zhì)的最高容許濃度(MAC)和人類每日容許攝入量(ADI)提供科學(xué)依據(jù)。三三.

24、. 慢性毒性及評價方法慢性毒性及評價方法. .3838慢性毒性試驗設(shè)計慢性毒性試驗設(shè)計初斷乳的大鼠或小鼠。每組2040只，雌雄各半。設(shè)34個實驗組和一個對照組。實驗動物和分組實驗動物和分組染毒劑量和實驗期限染毒劑量和實驗期限對對 照照 組組 溶劑對照低劑量組低劑量組 1/100 亞慢性毒性閾劑量 不出現(xiàn)中毒反應(yīng) 無作用劑量組 NOAEL 中劑量組中劑量組 1/10 可出現(xiàn)輕微的毒效應(yīng) LOAEL 高劑量組高劑量組 1/5 出現(xiàn)明顯的毒效應(yīng)甚至亞致死狀態(tài)實驗期間實驗期間 6終生終生 實驗結(jié)束后可停止染毒觀察恢復(fù)狀況染毒方式和觀察指標染毒方式和觀察指標 選擇原則同亞慢性試驗，盡量選擇在亞慢性試驗中

25、觀察到的特異和敏感指標。三三. . 慢性毒性及評價方法慢性毒性及評價方法. .3939慢性毒性實驗注意事項慢性毒性實驗注意事項 1 控制實驗條件 排除干擾因素對實驗結(jié)果的影響排除干擾因素對實驗結(jié)果的影響 2 試驗前應(yīng)對觀察指標，尤其是血、尿常規(guī)及重點測定的 生化指標進行正常值測定，篩除個體差異過大的動物篩除個體差異過大的動物 3 染毒期間進行動態(tài)觀察的各項指標，應(yīng)與對照組同步測定與對照組同步測定 4 各化驗測定方法應(yīng)精確、可靠、需要進行質(zhì)量控制需要進行質(zhì)量控制。 5 應(yīng)重視病理組織學(xué)的檢查重視病理組織學(xué)的檢查。凡試驗期間死亡的動物，都 應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。三三. . 慢性毒性及評價方法慢性毒性

26、及評價方法. .4040慢性毒性實驗結(jié)果評價慢性毒性實驗結(jié)果評價 1 觀察指標與對照組比較與對照組比較，是否超出正常值范圍，是否具有顯著性差異顯著性差異和劑量劑量-效應(yīng)效應(yīng)(反應(yīng)反應(yīng))關(guān)系關(guān)系 2 根據(jù)實驗期間和恢復(fù)期的觀察和檢測結(jié)果，進行全面的綜合分析綜合分析。結(jié)合受試物的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特性，應(yīng)用生物學(xué)和醫(yī)學(xué)理論，闡明慢性毒性的性質(zhì)、特點、毒作用類性質(zhì)、特點、毒作用類型、靶器官和中毒機理型、靶器官和中毒機理。 3 確定敏感指標的慢性毒性閾劑量慢性毒性閾劑量(LOAEL)和最大無作最大無作用劑量用劑量(NOAEL)。三三. . 慢性毒性及評價方法慢性毒性及評價方法. .41415.3 蓄積毒性

27、蓄積毒性 連續(xù)多次攝入的環(huán)境毒物總量環(huán)境毒物總量（或速度），大于代謝和排泄速度大于代謝和排泄速度時，毒物或其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)逐漸增加逐漸增加并貯留現(xiàn)象貯留現(xiàn)象叫做毒物的蓄積作用(Accumulation)。蓄積作用功能蓄積 Functional Accumulation物質(zhì)蓄積 Material Accumulation. .4242蓄積毒性評價方法蓄積毒性評價方法蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法1 高度蓄積高度蓄積 1 明顯蓄積明顯蓄積3 中等蓄積中等蓄積 5 輕度蓄積輕度蓄積5 蓄積性蓄積性固定劑量法固定劑量法1.先測定一次經(jīng)口先測定一次經(jīng)口LD502.每日固定劑量每日固定劑量(1/201/5 LD50

28、）選定一個劑量，固）選定一個劑量，固定時間和相同途經(jīng)連續(xù)染毒，至一半實驗動物死亡。定時間和相同途經(jīng)連續(xù)染毒，至一半實驗動物死亡。3.如果累積劑量達到如果累積劑量達到5個個LD50，即使未引起一半動物，即使未引起一半動物死亡，也可以終止試驗。死亡，也可以終止試驗。. .4343劑量遞增法劑量遞增法染毒天數(shù)染毒天數(shù)累積劑量累積劑量（LD50）0.40 0.60 0.90 1.36 2.00 3.00 4.484天內(nèi)染毒總量天內(nèi)染毒總量（LD50） 0.1 0.15 0.22 0.34 0.50 0.75 1.12每日染毒劑量每日染毒劑量（LD50/kg/day）14 58 912 1316 172

29、0 2124 2528 0.40 1.00 1.90 3.26 5.26 8.26 12.74固定劑量固定劑量的的20天蓄積實驗天蓄積實驗陰性對照陰性對照實驗組：實驗組：1/20LD50, 1/10LD50, 1/5LD50, 1/2LD50結(jié)果判定：結(jié)果判定： 1.各實驗組均無死亡均無死亡，無蓄積性無蓄積性2.1/20LD50組，有死亡組，有死亡，其他組無死亡，弱蓄積性弱蓄積性3.除除1/20LD50組之外組之外，其他組均有死亡，中等蓄積性中等蓄積性4.各組均有死亡各組均有死亡，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系劑量反應(yīng)關(guān)系，強蓄積性強蓄積性連續(xù)染毒連續(xù)染毒20天天. .44445.4 局部毒性測定實驗局部毒性測定實驗急性皮膚刺激急性皮膚刺激/ /腐蝕試驗腐蝕試驗 豚鼠或家兔 皮膚染毒424h 洗去殘留毒物，觀察染毒后24、48、72小時涂抹部位的皮膚反應(yīng)急性眼睛刺激急性眼睛刺激/ /腐蝕試驗腐蝕試驗 家兔 0.1ml受試物滴入眼結(jié)膜囊內(nèi)，記錄染毒后1